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应用蛋白芯片技术筛选针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠的凋亡相关蛋白
目的应用蛋白芯片技术筛选针刺对缺血再灌注损伤( CIRI)大鼠脑组织凋亡相关蛋白。方法SD健康大鼠40只随机分为4组：假手术组、模型组、针刺对照点组(均取穴左侧旁开0.3 cm的非经非穴点)、针刺穴位组(针刺大椎、百会、人中)，每组10只，各组大鼠6次处理后取左侧海马脑组织，采用720磷酸化抗体蛋白芯片检测处理后的脑组织细胞信号蛋白磷酸化的变化，然后筛选各组上调、下调显著(磷酸化水平变化上调≥1.5倍，下调≤0.67倍)且与凋亡相关的蛋白。结果与假手术组比较，模型组上调≥1.5倍与凋亡相关的蛋白8种，下调≤0.67倍的蛋白4种；与模型组比较，对照点组上调≥1.5倍与凋亡相关的蛋白5个，下调≤0.67倍的蛋白8个；穴位组上调≥1.5倍与凋亡相关的蛋白2个，下调≤0.67倍的蛋白11个，其中下调模型组中上调的蛋白3种。结论针刺大椎、百会、人中(穴)对CIRI大鼠通过调整多个凋亡相关的蛋白表达变化抑制凋亡实现脑保护作用。
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ATM／p53通路在杂色曲霉素诱导人胃黏膜上皮细胞（GES－1）G2期阻滞中的作用
杂色曲霉素（ sterigmatocystin， ST）是一种致癌性真菌毒素，在人类食物中污染非常广泛。我们前期研究发现，ST可诱导人胃黏膜上皮细胞G2期阻滞。普遍认为各种理化因素引发的DNA损伤与细胞周期阻滞和细胞凋亡关系密切。为了进一步探讨ST诱发GES－1细胞G2期阻滞的机制，本实验研究了ST诱导的DNA损伤及损伤下游的ATM／p53信号通路的激活情况。我们通过彗星实验检测到了ST引发的GES－1细胞的DNA损伤；同时发现了ATM及其下游分子Chk2和 p53的激活；通过ATM阻断剂咖啡因的预处理，我们发现咖啡因可以阻断ST诱导的GES－1细胞G2期阻滞和p53及下游分子的激活；另外，我们发现p53 siRNA转染至GES－1细胞可有效阻断ST诱导的GES－1细胞G2期阻滞的作用；ST还能诱导GES－1细胞凋亡。因此，通过实验我们得出结论，ST能够引起GES－1细胞的DNA损伤，并激活损伤下游由ATM／p53依赖的信号通路，进而影响G2／M期相关调控因子及凋亡相关蛋白的表达，终诱导GES－1细胞发生G2期阻滞和凋亡。
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Tau蛋白在缺氧／复氧诱导的PC12细胞凋亡中的机制初探
目的：初步探讨缺氧／复氧（ hypoxia／reoxygenation，H／R）诱导PC12细胞凋亡模型中tau蛋白及其磷酸化水平、凋亡相关蛋白Bax、Bcl－2的表达情况。方法：类神经元PC12细胞体外培养并传至第三代，进行相应处理，实验分组为正常对照组（ control组）、模型组（ H／R组）。 Annexin V－PI双染流式细胞术分别检测各组凋亡率以确定模型是否成功；造模成功后，使用RIPA裂解液提取蛋白；Western blotting技术检测各组tau蛋白及其磷酸化、Bax和Bcl－2的表达变化。结果：与control组相比，H／R组细胞凋亡率显著升高（ P＜0．05），提示模型构建成功；Westem blotting结果显示，与control组相比，H／R组中tau蛋白表达显著减少（P＜0．05），且tau蛋白Ser202位点的磷酸化水平显著升高（P＜0．05），Bax／Bcl－2显著升高（P＜0．05）。结论：Tau蛋白可能参与了缺氧／复氧诱导的神经细胞凋亡，其机制有待深入研究。
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下调Sam68基因表达促进急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡
目的：探讨Sam68蛋白对白血病细胞Jurkat凋亡的影响。方法：针对Sam68靶点构建pLKO－Tet－On条件性真核表达干扰载体，制备慢病毒并感染Jurkat细胞，诱导干扰载体表达，筛选稳定表达shRNA细胞；采用实时荧光定量和免疫印迹技术检测干扰效率；应用流式细胞术检测细胞凋亡，采用免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白表达水平变化情况。结果：Sam68基因表达下调的细胞凋亡数量增多，伴随caspase－3活化水平增加和PARP活化水平下降，Akt磷酸化水平下降，Erk和Bcl－xL表达水平无明显变化。结论：Sam68基因表达下调可通过影响Akt信号通路影响caspase－3和PARP蛋白表达，从而促进Jurkat细胞凋亡。
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银杏叶提取物EGb761诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制
目的：探究银杏叶提取物EGb761对人结肠癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养12株人结肠癌细胞，给予不同浓度EGb761（0～600 mg／L）作用24 h，采用MTT、集落生成实验以及流式细胞术检测给药处理后结肠癌细胞的增殖和凋亡情况。通过Western blot技术检测RIP－1分子表达水平和凋亡标志物PARP的表达水平变化。利用ELISA技术检测NF－κB信号通路的活性。结果：EGb761在较低浓度（400 mg／L）可以抑制结肠癌细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞发生凋亡。随着药物浓度的增加，EGb761诱导结直肠癌细胞凋亡率也随之增加。 EGb761作用于结肠癌细胞后可导致凋亡相关蛋白RIP－1的降解。同时 EGb761通过抑制 I－κB 磷酸化而抑制 NF－κB 信号通路促细胞增殖的作用。结论：银杏叶提取物（ EGb761）能广泛抑制人结肠癌细胞的增殖，并诱导人结肠癌细胞发生凋亡，研究结果提示凋亡发生的机制与细胞内RIP－1的降解以及NF－κB信号通路的活性降低有关。
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线粒体应激蛋白在脑缺血再灌注损伤中的表达及意义
目的：探讨线粒体应激蛋白在脑缺血再灌注损伤过程中的作用。方法：应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（ MCAO）模型，神经行为学评分、TTC及HE染色，观察不同缺血时间（1 h、1．5 h、3 h）再灌注24 h，大脑皮质损伤程度； Western blot检测脑缺血不同时间再灌注损伤后缺血半暗带线粒体应激相关蛋白ClpP及凋亡相关蛋白cleaved caspase－3的表达。结果：随着缺血时间的延长，大鼠神经行为学评分逐渐升高、梗死面积由纹状体向皮层及海马逐渐扩展，大鼠脑缺血再灌注引发的大脑皮质损伤逐渐加重，cleaved caspase－3表达量亦逐渐升高，而线粒体应激蛋白ClpP表达量在缺血1．5 h达到峰值，3 h时有所下降。结论：半暗带区神经元细胞凋亡随着缺血时间的延长而增加，但线粒体应激反应要早于凋亡的发生，对脑缺血再灌注损伤诱导的凋亡起到防御作用。
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硫氢化钠对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
目的 探讨硫氢化钠(NaHS)对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响.方法 本研究通过腹主动脉缩窄术构建CHF大鼠模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NaHS低剂量组和NaHS高剂量组,每组6只.治疗4周后,采用超声心动图检测每组大鼠心功能,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测每组大鼠血清脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)浓度,采用TUNEL染色检测每组大鼠心肌组织细胞凋亡情况,采用Western blot检测各组大鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和活化的半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved-caspase 3)的表达.结果 与模型组相比,NaHS低剂量组和NaHS高剂量组的左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心室质量/体质量(left ventricular weight/body weight,LVW/BW)和心脏质量/体质量(heart weight/body weight,HW/BW)明显降低,而左心室射血分数(left ventricular ejec-tion fraction,LVEF)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).NaHS低剂量组和NaHS高剂量组大鼠血清中BNP浓度显著低于模型组大鼠,差异均有统计学意义(P<0.05).TUNEL染色检测结果显示,与模型组相比,NaHS低剂量组和NaHS高剂量组大鼠心肌组织的细胞凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot检测结果显示,与模型组相比,NaHS低剂量组和NaHS高剂量组大鼠心肌组织中Bax和cleaved-caspase 3的表达均显著降低,但Bcl-2的表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且NaHS高剂量组的效果明显好于NaHS低剂量组.结论 NaHS可通过调控凋亡相关蛋白的表达减少CHF大鼠的心肌细胞凋亡,有效改善CHF大鼠的心功能,且高剂量组的效果优于低剂量组.
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大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、FAS的表达
目的观察大鼠急性心肌梗死(AMI)时心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达.材料与方法结扎SD大鼠左冠前降支建立AMI模型,SD大鼠随机分为7组:正常对照、AMI 2 h、AMI 4 h、AMI 6 h、AMI 24 h、AMI 48 h及AMI 7 d.心肌标本的处理:实验结束时取出心脏,用于病理检查者10%中性福尔马林固定,石蜡包埋;用于DNA Ladder检测者,液氮冻存待测.用TUNEL及DNA Ladder检测心肌细胞凋亡;采用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax、FAS的表达.
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凋亡相关蛋白的表达及Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系
背景与目的:以顺铂为基础的化疗是卵巢癌治疗的重要组成部分 , 对顺铂的耐药是卵巢癌治疗失败的原因之一 . 本研究探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株中凋亡相关蛋白表达及 caspase-3活性与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系 . 方法 : 采用 Western blot法分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株 COC1和顺铂耐药株 COC1/DDP中凋亡相关蛋白 bcl-2、 bcl-xL、 bax、 bcl-xS的表达 , caspase-3活性和其底物多聚 ADP核糖聚合酶 ( PARP) 的变化 , 并应用流式细胞仪检查不同浓度顺铂作用 COC1和 COC1/DDP细胞后的细胞凋亡率 . 结果 : 在 COC1/DDP细胞中 , bcl-2和 bcl-xL的表达明显高于 COC1细胞 , bax的表达无明显改变 , bcl-xS在 COC1和 COC1/DDP细胞中均无表达 . 用顺铂处理后 , COC1/DDP细胞中 caspase-3活性、 PARP裂解片段和凋亡率较 COC1细胞均明显降低 ( P< 0 05) , 且呈浓度依赖性 . 结论 : 人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与肿瘤细胞内凋亡抑制蛋白过度表达、 caspase-3活性下降有关 , 而与凋亡诱导蛋白的表达无关 .
关键词： 卵巢癌 凋亡相关蛋白 半胱天冬氨酸蛋白酶-3 耐药 顺铂 -
实验性脑出血细胞凋亡性损伤的初步研究
为进一步探讨脑出血是否存在凋亡性损伤,采用TUNEL技术、流式细胞术、电镜观察、凋亡相关蛋白caspase-3免疫组化检测等方法进行研究.
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鼻息肉上皮细胞中Fas、FasL和Bcl-2的表达及其意义
目的:探讨凋亡相关蛋白(Fas、FasL和Bcl-2)在鼻息肉上皮细胞中的表达及其发病学意义.方法:用免疫组化染色法检测鼻息肉组(29例)和下鼻甲组(11例)上皮细胞Fas、FasL、Bcl-2基因蛋白的表达.结果:鼻息肉组上皮细胞Fas、FasL和Bcl-2阳性细胞指数(PIFas、PIFasL、PIBcl-2)均大于下鼻甲组 (P＜0.01),PIBcl-2/PIFas也大于下鼻甲组(P＜0.01),但鼻息肉组PIFasL/PIFas与下鼻甲组比无统计学意义;鼻息肉组PIFasL/PIFas和PIBcl-2/PIFas均大于1(理论值,P＜0.05).结论:Bcl-2介导的抑制细胞凋亡机制和FasL介导的细胞免疫逃逸机制可能对Fas/FasL系统介导的细胞凋亡产生部分抑制作用,有可能是鼻息肉上皮细胞增殖和细胞凋亡平衡失调的根本原因.
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高浓度氢气吸入对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑皮质神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响
目的：探讨吸入高浓度氢气对局灶性脑缺血再灌注（ I／R）损伤大鼠脑皮质神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达的影响。方法48只健康雄性SD大鼠，随机分为假手术组（ Sham 组）、脑I／R损伤组（I／R组：再灌注同时吸入67％N2＋33％O2）、氢气（H2）治疗组（H2组：再灌注同时吸入67％H2＋33％O22 h），每组16只。使用线栓法建立大鼠局灶性脑I／R损伤模型。再灌注24 h后行神经功能缺损评分，采用TTC染色法观察大鼠脑梗死严重程度并计算其梗死面积，尼氏染色和TUNEL技术检测大鼠脑皮质神经细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI），蛋白质印迹法检测脑皮质区Bcl－2及Bax蛋白表达。结果与Sham组比较，I／R组、H2组神经功能缺损评分、脑梗死面积、AI、Bax蛋白表达明显增加（P＜0．05）；与I／R组比较，H2组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、AI、Bax蛋白表达明显降低，神经元尼氏体增加，Bcl－2表达量明显增多（P＜0．05）。结论再灌注同时吸入高浓度H2可通过上调抑凋亡蛋白Bcl－2及下调促凋亡蛋白Bax的表达抑制神经细胞凋亡，明显减少大鼠脑梗死面积，改善大鼠脑I／R后的神经功能评分，对大鼠脑I／R损伤起到一定的保护作用。
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苦参碱对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡相关蛋白的影响
目的:研究苦参碱对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其相关机制.方法:用MTT法检测不同浓度的苦参碱作用HepG2细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测苦参碱作用前后HepG2细胞周期的变化;Western Blot检测苦参碱干预HepG2细胞前后Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的改变.结果:苦参碱在浓度≥0.125 mg/mL时有抑制HepG2细胞增殖的作用,且作用随药物浓度的增加及时间的延长而加强(P＜0.05).细胞周期分析显示,随着苦参碱浓度的增加,G1期细胞比例增加,在0.125、0.500、2.000 mg/mL浓度时分别增加15％、40％、80％,S期细胞比例减少,在0.125、0.500、2.000 mg/mL浓度时分别减少17％、38％、78％.Western Blot检测结果显示,苦参碱可使HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达上调;且均呈现剂量依赖性,各个浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:苦参碱可能通过抑制Bcl-2蛋白表达和促进Caspase-3蛋白表达的方式来抑制HepG2细胞增殖与促进细胞凋亡,其效应与苦参碱的浓度呈现正相关.
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新型小分子激酶抑制剂Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及机制研究
目的:观察新型小分子激酶抑制剂Ibr-7[依鲁替尼(Ibr)衍生物]对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及其可能机制.方法:以Capan-2细胞为对象,采用CCK-8法检测1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞增殖情况,计算细胞存活率;同法检测1μmol/L Ibr、Ibr-7对不同剂量吉西他滨/紫杉醇(均分别为0.0625、0.125、0.25、0.5、1μmol/L)的增敏作用.采用克隆形成试验检测1、2、4μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞克隆形成情况,并记录细胞集落形成数量.采用流式细胞术或JC-1法检测2、4、8μmol/L Ibr-7作用24或16 h后细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化情况,并计算总凋亡率及细胞线粒体膜电位下降比例.采用Western blotting法检测细胞中相关凋亡蛋白[多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Noxa、Bcl-2、Bax、髓样细胞白血病1(Mcl-1)、B淋巴细胞瘤xL(Bcl-xL)]的表达情况.结果:1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后,细胞的存活率均显著下降,各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组,且Ibr-7的半数抑制浓度显著低于Ibr(P<0.05或P<0.01).联用Ibr、Ibr-7后,细胞的存活率均显著低于同剂量吉西他滨/紫杉醇单用组,且Ibr-7联用组显著低于同剂量Ibr联用组(P<0.05或P<0.01).经2、4μmol/L Ibr以及1、2、4μmol/L Ibr-7作用48 h后,细胞集落形成数量均显著减少,且各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组(P<0.01).经不同剂量Ibr-7作用24或16 h后,Capan-2细胞的总凋亡率(2、4、8μmol/L组)、细胞线粒体膜电位下降比例(8μmol/L组)以及Noxa(2、4、8μmol/L组)、Bax(8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著上升,PARP(8μmol/L组)、Bcl-2(4μmol/L组)、Mcl-1(2、4、8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著下降,且8μmol/L Ibr-7组上述指标(PARP、Bcl-2相对表达量除外)均显著优于同剂量Ibr组(P<0.05或P<0.01).而各组细胞Bcl-xL蛋白的相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05).结论:与Ibr相比,Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞具有更强的体外增殖抑制作用和促凋亡作用,且具有更强的化疗药物增敏活性;其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位,下调细胞中PARP、Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达,上调Noxa、Bax蛋白的表达有关.
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小鼠胚胎胃发育中细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达
目的:观察小鼠胚胎胃发育过程中上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53的表达.方法:E11d～E15d胎鼠连续切片,体视学法测量胃上皮凋亡小体密度(DAB);免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53的表达.结果:①胃DAB峰值为E14d～E15d.②Bcl-2表达峰值为E11～13d;Bax表达峰值在E14d,P53表达峰值在E11～13d.结论:Bel-2可能具有抑制胃上皮细胞凋亡的作用;Bax可能具有促进细胞凋亡的作用;P53可能与胃上皮细胞凋亡调控的关系不密切.
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九龙虫对自然衰老大鼠卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白的影响
目的：观察九龙虫对自然衰老大鼠卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白的影响。方法：15月龄SD雌性大鼠随机分为模型组、阳性对照组、九龙虫低、中、高剂量组，4月龄大鼠为青年组。给药42d后，测定卵巢SOD、GSH－PX活性及MDA含量，采用免疫组织化学分析方法检测卵巢凋亡相关基因Bcl－2和Bax的表达。结果：与青年组比较，模型组SOD、GSH－PX活性和Bax表达降低，MDA含量和Bcl－2表达增加，差异有统计学意义（P＜0.01），阳性对照组和九龙虫各剂量组的上述指标均得到改善。结论：九龙虫抗衰老作用可能通过改善卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白表达而实现。
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CIK细胞对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用及其机制
目的:研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killing cells,CIK)对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用,并探讨其作用机制.方法:通过HE染色观察凋亡细胞ZK-75-1的形态学改变.应用TUNEL(TdT-mediated dUTPnick end labeling)法检测CIK细胞的凋亡.通过免疫细胞化学染色法检测ZK-75-1细胞中p53、p16、C-myc、Bcl-2及Bax的表达率.结果:HE染色显示,CIK细胞向ZK-75-1细胞靠近,形成典型的玫瑰花环状;肿瘤细胞的胞浆中出现颗粒状物,有的肿瘤细胞只见颗粒状碎片;而作为对照的乳腺癌细胞生长良好.TUNEL法检测显示,对照组细胞未染色或染呈均匀的淡蓝色;实验组凋亡的细胞缩小,核或核周染呈深蓝色.CIK细胞作用4～12 h ZK-75-1细胞的凋亡率上升,作用12～24h细胞的凋亡率下降,与对照组相比较有统计学意义(P＜0.01).免疫细胞化学染色的结果表明,CIK细胞实验组p53、pi6、C-myc及Bcl-2蛋白随作用时间的延长均下降,Bax蛋白的表达上调,与对照组相比较均有统计学意义(P＜0.01).结论:CIK细胞对乳腺癌细胞ZK-75-1杀伤作用的机制之一,可能与p53、p16、C-myc、Bcl-2蛋白表达的下调及Bax蛋白表达的上调有关,并与CIK细胞作用的时间关系密切.
关键词： CIK细胞 乳腺癌细胞ZK-75-1 细胞凋亡 凋亡相关蛋白 -
凋亡相关蛋白(eIF-5A)-双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备
蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白.
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白藜芦醇调控癫痫持续状态大鼠大脑皮质内源性巯醇抗氧化剂(酶)的作用研究
目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)在氯化锂(LiCl)-重复低剂量匹罗卡品(pilocarpine,Pilo)诱导癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠模型中的抗氧化作用及其机制.方法:54只SD大鼠随机分为3组:对照组、癫痫模型组和Res治疗组.采用重复低剂量氯化锂-联合皮罗卡品腹腔注射制备癫痫持续状态SD大鼠模型,并同时给予Res预防性治疗,对实验动物按痫性分级标准进行行为学观测,采用化学比色法检测痫性发作90min后模型动物大腩皮质过氧化氧酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽(glutathion,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽还原酶(glutathion reductase,GR)含量变化.采用免疫组织化学法和免疫印迹法(Western blot)检测痫性发作90min后模型动物大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3和Bax的表达变化.结果:癫痫大鼠大脑皮质CAT、GR、SOD和GSH的含量较对照组显著减少(P＜0.05),凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,该蛋白阳性细胞数减少,而caspase-3和Bax表达显著上调(P＜0.05),两种蛋白阳性细胞数增多(P＜0.05)；Res预防性治疗后,治疗组动物痫性发作潜伏期较模型组显著延长(P＜0.05)；药物治疗明显上调模型动物大脑皮质中巯醇抗氧化剂(酶)CAT、GR、SOD和GSH的含量(P＜0.05),增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P＜0.05)和阳性细胞数(P＜0.05),同时抑制促凋亡因子Caspase-3和Bax的表达(P＜0.05)和减少两种蛋白阳性细胞数(P＜0.05).结论:Res能通过上调癫痫模型大鼠皮质内源性巯基抗氧化物(酶)CAT、GR、SOD和GSH的含量,调控凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3和Bax的表达变化,对抗SE诱导的神经细胞氧化损伤,发挥神经保护作用.
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牙周炎对Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的：研究牙周炎对Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：自发Ⅱ型糖尿病OLETF大鼠按照是否复合牙周炎模型随机分为复合组（合并牙周炎）和糖尿病组（牙周健康）；同种系同周龄糖耐量正常LETO大鼠随机分为牙周炎组和正常组。复合组和牙周炎组采取丝线结扎联合涂菌建立慢性牙周炎模型，建模20周后处死大鼠，取胰腺组织脱水包埋制作切片。免疫组化半定量分析胰岛组织Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达量。结果：正常组和牙周炎组大鼠胰岛细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达差异均无显著性（P＝0．324，P＝0．091，P＝0．852）；和糖尿病组相比复合组 Bax、Caspase-3蛋白表达显著上升（P＝0．000，P＝0．000），Bcl-2蛋白表达显著下降（P＝0．022）。结论：牙周炎对无糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡相关蛋白的表达没有影响，但在糖尿病状态下，牙周炎可影响凋亡相关蛋白的表达。
