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硒化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及粘附功能影响的研究
目的 探讨甲基硒酸(MeSeA)、硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)对宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移及粘附功能的影响.方法 体外培养HeLa细胞,3μmol/L的MeSeA、SeMet和MeSeCys处理HeLa细胞12 ～ 72 h,分别采用MTT法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HeLa细胞的增殖、迁移及粘附功能.结果 与对照细胞相比,MeSeA处理组HeLa细胞的增殖速度明显降低(P＜0.01).MeSeA处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为34％(P＜0.05)和26％(P＜0.05);SeMet处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为18％和13％;MeSeCys处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为28％ (P ＜0.05)和5％.MeSeA、SeMet和MeSeCys对HeLa细胞粘附功能的抑制率分别为36％(P＜0.01)、25％和49％ (P ＜0.01).结论 MeSeA可以更好地抑制HeLa细胞的增殖和迁移,而MeSeCys对HeLa细胞的粘附功能的抑制作用更强.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中游离硒代蛋氨酸
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定硒代蛋氨酸(SeMet)的方法,并用于测定牛奶中游离SeMet.方法 在Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)上以水∶乙腈∶甲酸(95∶5∶0.1,V/V)为流动相,流速0.3 mL/min,柱温40℃,分析时间2.5 min,在电喷雾-正离子电离源上以多反应监测模式分析SeMet,用于定量分析的离子反应为m/z 198.0→181.1.结果 SeMet线性范围为0.5～ 100 ng/mL,方法的定量下限为0.5 ng/mL.SeMet批内准确度在97.6％～100.6％,批间准确度在97.7％～99.2％,批内精密度在0.53％～ 4.49％,批间精密度在1.03％～4.54％.结论 UPLC-MS/MS法具有特异性好、灵敏度高、分析速度快和准确可靠的优点,适用于牛奶中游离SeMet的定量测定.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱 硒代蛋氨酸 牛奶 -
亚硒酸钠与硒代蛋氨酸对镉在大鼠体内分布的影响
目的比较亚硒酸钠(Na2SeO3)与硒代蛋氨酸(SeMet)对镉(Cd)毒性的拮抗效应,探讨体内Cd的代谢分布在硒(Se)拮抗Cd毒性作用中的意义.方法健康雄性Wistar大鼠36只,随机分为6组.Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为Cd中毒组,Ⅲ组为Na2SeO3组,Ⅳ组为SeMet组.Ⅴ组为Cd+Na2SeO3组,Ⅵ组为Cd+SeMet组.Cd按100μmol·kg-1体重,Se按10 μmol·kg-1体重的剂量隔日1次经口灌胃,其中Ⅴ组和Ⅵ组按先Se后Cd交替灌胃.Se、Cd均灌胃15次.实验时间为30 d.实验结束后,取全血、肝脏、肾脏、睾丸,测定其Se、Cd含量.结果Cd在体内的蓄积主要分布于肝脏和肾脏,全血和睾丸含量较少,Cd的组织分布顺序为肝脏＞肾脏＞睾丸＞全血.2个Cd加Se保护组组织中Cd含量没有减少,表明Se不能促进Cd的排泄.Cd+Na2SeO3组肝脏cd含量明显高于单独给Cd组,但Se含量并未相应增加;Cd+SeMet组大鼠组织Cd含量与单独给cd组比没有明显差异,由此不能证实有Se-cd复合物的形成.各组织Se含量,SeMet组明显高于Na2SeO3组,表明其生物利用度与Se化合物的形式有关.2种Se化合物吸收后其组织Se的分布顺序均为:全血＞肾脏＞肝脏＞睾丸.结论Cd在大鼠体内的分布具有脏器选择性,Na2SeO3和SeMet对Cd体内分布的影响具有一定的差异,但均不能促进Cd的排泄,也未表明有Se-Cd复合物的形成.
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硒代蛋氨酸遗传毒性的研究
目的 探讨硒代蛋氨酸对小鼠微核及精子畸变的影响及硒代蛋氨酸是否具有基因水平的诱变性,研究硒代蛋氨酸的遗传毒性.方法 设三个硒代蛋氨酸剂量实验组,一个阴性对照组和一个阳性对照组.分别进行雌雄小鼠骨髓微核试验和雄性小鼠精子畸变试验.选用TA97、TA98、TA100、TA102四种菌进行硒代蛋氨酸的Ames试验.结果 微核实验阴性对照组的微核率为1.7％,阳性对照为6.92％,在0.06mg/mL剂量时微核率为3.2％,结果为阳性;在0.03 mg/ml剂量时微核率为2.5％,结果为阴性.精子畸变实验阴性对照组的精子畸变率为1.22％,阳性对照为4.36％,在0.06 mg/ml剂量时精子畸变率为2.24％％,结果为阳性;在0.03 mg/ml剂量时精子畸变率为1.86％,结果为阴性.Ames试验结果为硒代蛋氨酸对TA97、TA98、TA100、TA102四种菌株均无致突变活性.结论 在实验剂量范围内,硒代蛋氨酸不具有基因水平的诱变性,可以作为食品添加剂.通过对硒代蛋氨酸遗传毒性的研究,从小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸变试验都可得出试验在大于0.06 mg/ml剂量时结果为阳性;试验在小于0.03 mg/ml剂量时结果为阴性.硒代蛋氨酸作为一种补充硒元素的有效途径,本实验说明低浓度的硒代蛋氨酸可用于富硒食品的生产,而高浓度的硒代蛋氨酸对生物体有一定的损伤作用.
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酵母硒和硒代蛋氨酸对铅中毒小鼠解毒 作用的比较研究
铅是一种对人体无任何生理功能且对人体健康有严重危害的重金属元素,人类的神经系统,特别是儿童,易受铅污染[1] ,儿童铅中毒已成为一个全球性的公共安全问题.含铅汽油曾经是铅中毒的主要来源.近年来,使用无铅汽油后,儿童的铅中毒比例有所下降,但仍时有发生[2].
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硒代蛋氨酸及其创新化合物在糖尿病防治中的应用研发进展
硒代蛋氨酸及其创新化合物在生命科学各个领域中的应用日益广泛深入,特别是在糖尿病防治中的应用是国内外关注的热点问题.笔者致力于硒代蛋氨酸及其创新化合物的研究、创新和开发,发明了"甲硒基丙醛法制备硒代蛋氨酸"(专利申请号02104206.8),为实现工业化生产硒代蛋氨酸提供了新的前景方案;发明了"硒代蛋氨酸铬的制备和应用"(专利申请号98120472.4),为糖尿病防治提供了具有拟胰岛素作用的一种新化合物;发明了"硒代蛋氨酸铬磺脲类化合物的制备和应用"(专利号99121819.1),创新了具有拟胰岛素作用的第三代磺脲类降血糖药等,使我国在硒代蛋氨酸及其创新化合物技术领域的研发居国际领先水平.
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硒代蛋氨酸与亚硒酸钠对EV71在体内外增值的影响
目的 探讨硒代蛋氨酸和亚硒酸钠抗EV71病毒感染的效果,解析硒蛋白在机体抗感染的免疫作用.方法 以非洲绿猴肾细胞(VERO细胞)和ICR小鼠为研究模型,用体外细胞培养和小鼠的动物实验来探讨不同含量的硒代蛋氨酸和亚硒酸钠对EV71在VERO细胞中和ICR小鼠体内增值的抑制作用,用荧光定量PCR方法定量分析病毒载量.结果 2μ mol/L和3μ mol/L的硒代蛋氨酸在5d内能有效抑制EV71在VERO细胞中的增值.而用5mg/L硒代蛋氨酸饲养的小鼠产下的幼鼠经EV71感染后,肌肉组织中的EV71核酸载量也比对照组显著降低.结论 硒代蛋氨酸在体外和体内都能够有效抑制EV71复制,暗示硒代蛋氨酸可能参加了机体的免疫应答抗EV71的感染.
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硒代蛋氨酸对小鼠巨噬细胞增殖及硒蛋白K的影响
目的 探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(SelenoproteinK,SelK)的影响,并观察SelK在小鼠巨噬细胞中的定位.方法 加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测Se-Met对小鼠巨噬细胞中SelK mRNA和SelK蛋白表达的影响;用细胞免疫荧光法观察SelK在巨噬细胞中的位置.结果 Se-Met能促进巨噬细胞的增殖,其中浓度为1 μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(P＜0.01);1 μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中SelK的mRNA含量显著增加(24 h处理组,P＜0.05; 48 h处理组,P＜0.01),另外,SelK蛋白的含量也有所增加(48 h处理组,P＜0.05).浓度为100 μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(P＜0.01).结果还显示SelK蛋白与内质网标志物KDEL都存在于巨噬细胞内的相同位置上. 结论 SeMet在促进巨噬细胞增殖的同时,使存在于内质网上的SelK增加.
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高效液相色谱－电化学检测器测定富硒酵母中硒代蛋氨酸含量
目的：建立测定富硒酵母中的硒代蛋氨酸含量的高效液相色谱－电化学检测器检测法。方法色谱柱采用Agilent Eclipse plus C18柱(150 mm ×3.0 mm，3.5μm )，流动相为100 mmol/L柠檬酸缓冲盐（pH＝2.75，含300 mg/L辛烷基磺酸钠）－甲醇（85：15），检测电压为500 mV ( ECD1)和700 mV ( ECD2)。结果硒代蛋氨酸质量浓度在1～300μmol/L范围内与峰面积线性关系良好（ r2＝0.9996），检出限为0.30μmol/L，加样回收率为101.30％，RsD为2.30％（ n＝6）。结论该方法操作简便，灵敏度高，重复性好，可用于富硒酵母中硒代蛋氨酸的检测。
关键词： 高效液相色谱-电化学检测器 富硒酵母 硒代蛋氨酸 -
硒代蛋氨酸及亚硒酸钠对小鼠赭曲霉毒素A肾损伤模型的保护作用
目的 探讨硒代蛋氨酸、亚硒酸钠干预对小鼠赭曲霉毒素A(OTA)肾损伤模型的保护作用及机制.方法 实验分为对照组(A组)、模型OTA组(B组)、硒代蛋氨酸干预组(C组),亚硒酸钠干预组(D组),联合干预组(E组).采用分光光度法检测小鼠血清和肾组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物歧化酶(SOD)水平;RT-PCR法检测肾组织谷胱甘肽过氧化物酶(GPx-1、GPx-4)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)mRNA表达,Westernbolt法检测肾组织Caspase-3、8、12表达.结果 与A组比较,B组GSH-Px、SOD水平降低,MDA水平升高(P＜0.01);与B组比较,C、D、E组GSH-Px、SOD水平升高,MDA水平降低(P＜0.01);B组GPx-1、GPx-4、TrxR mRNA表达量低于A组,C、D、E组高于B组,E组高于C组、D组(P＜0.01);B组Caspase-3、8、12的表达均高于A组,C、D、E组低于B组(P＜0.01).结论 硒代蛋氨酸、亚硒酸钠对OTA所致小鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与降低氧化应激反应,上调抗氧化酶表达,减少细胞凋亡有关.
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硒的生物标志物
人体必需微量元素硒具有多种生物学活性，这依赖于硒摄入的水平。相对较低的硒摄入决定含硒酶的表达，含硒酶是人体质量主要的组份。较高水平的硒摄入已被证明具有抗肿瘤的潜能，而非常高的硒摄入可对机体产生不良影响。这种生物活性的层次性要求不同水平的硒暴露有不同的生物标志物信息。一些硒的生物标志物，如硒蛋白，特别是GPX3和SEPP1，可直接提供功能相关的信息，并在识别营养性硒缺乏及追踪硒缺乏个体补硒治疗疗效方面有重要价值。它们在硒摄入情况下可有效的调节范围内硒蛋白的表达。其他硒生物标志物通过基于食品、组织、尿液或粪便中硒含量的推论间接的提供信息。它们可以提示硒缺乏或不良反应的可能性，却不能提供其直接证据。它们的价值在于提供广泛的硒摄入量的硒状态信息，特别是来自食物形式的。
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硒代蛋氨酸对慢性低氧大鼠缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的影响
目的 明确硒代蛋氨酸(Se-Met)对慢性低氧大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,及对心肌细胞线粒体结构的影响.方法 将SD大鼠共分为9组,设常氧组1组,海拔3000m和5000m各4组:低氧对照组,低氧1、2、3补硒组,补硒组饲料中加入Se-Met,分别为参考摄入量的5、10、20倍.低氧模拟实验在低压氧舱进行(30d).用ELISA法测定各组大鼠血浆HIF-1α、VEGF水平;用电镜观察心肌细胞线粒体改变.结果 在海拔3000m和5000m的低氧对照组的HIF-1α水平高于补硒各组,HIF-1α水平随补硒量的增加而降低,5000m补硒各组下降明显.VEGF水平在海拔3000m组均低于常氧组,VEGF水平随补硒量增加而降低.补硒组大鼠心肌细胞线粒体的形态明显接近于常氧对照组.结论 Se-Met对慢性低氧大鼠HIF-1α、VEGF水平存在影响,能够减轻低氧对心肌细胞线粒体结构的影响.
