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苯并芘处理HELF阻滞于S期细胞的蛋白质差异表达谱
目的 观察由于苯并芘(BaP)作用而阻滞于细胞周期特定时相的人胚肺成纤维细胞的蛋白表达改变,探讨苯并芘引起的细胞应激和致癌机制.方法 利用流式细胞术对苯并芘作用后的细胞进行分析和分选,采用双向凝胶电泳与相应软件分析苯并芘处理后细胞内蛋白质的表达谱,MALDI-TOF(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白斑点.结果 细胞经5 μmol/L苯并芘处理后明显阻滞于S期,该时相细胞蛋白质表达的改变,主要包括热休克蛋白HSP70、HSP27,超氧化物歧化酶SOD[Mn],不均一核糖核蛋白H,翻译调控肿瘤蛋白,类肌钙蛋白,α-肌球蛋白,肌动蛋白结合蛋白和纽蛋白等参与氧化应激和肿瘤发生有关的蛋白.结论 这些表达改变的蛋白与苯并芘引发的细胞应激和细胞S周期阻滞有关,进一步研究可有助于阐明苯并芘的致癌机理.
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化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究
应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中(非定标性突变),并有突变谱特征和突变好发的序列特异性.它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变,应用mRNA差异显示和反义技术分离到两个基因表达序列标识,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变.用体外DNA复制技术证明其发生基础是由于化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降,而细胞错配修复功能未发现异常,但DNA聚合酶酶谱发生改变.还证明它的发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活和cAMP浓度升高.细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生.
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肝癌常用治法复方抑制肝癌细胞恶性增殖的机制研究
目的:观察肝癌常用治法代表方及其拆方联合G418抑制肝癌细胞增殖的作用,及其与金属硫蛋白家族(MTs)的关系.方法:观察全方及其清热、活血、健脾等拆方或联合G418对SMMC7721肝癌细胞及转染MTs iRNA质粒肝癌细胞增殖的抑制作用(MTT法),后者与转染表达绿荧光蛋白质粒对照.结果:中药全方和3个不同拆方具有不同程度的抑制肝癌细胞增殖作用,且存在量效关系;联合G418用药后作用显著增强(P<0.05).肝癌细胞被转染MTs iRNA载体后,与荧光质粒比较,无论是中药复方单独给药还是联合G418给药,对肝癌细胞增殖抑制的作用均较强(健脾方例外),提示MTs确有抵御药物治疗的作用.G418给药1d后撤药,2d后肝癌细胞出现增殖加速(P<0.05);全方、清热方、活血方、健脾方等联合G418后撤药2d,细胞增殖仍不活跃(P<0.05),提示不同治法中药联合G418用药具有减缓停药后细胞增殖反跳的作用.结论:SM MC7721肝癌细胞中MTs的过表达是该细胞耐药机制之一,临床常用防治肝癌复方及其拆方联合G418具有显著抑制肝癌细胞恶性增殖,并减缓其停药后恶性增殖加速的作用.
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精神活性物质对热休克蛋白70表达的影响
热休克蛋白70(Hsp70)是热休克蛋白家族中重要的一类蛋白,广泛存在于原核生物和真核生物中,结构较为保守,主要发挥分子伴侣、抗凋亡以及免疫调节功能.精神活性物质可导致高体温,诱导细胞应激,促进细胞凋亡,在非致死剂量下可使细胞内Hsp70适应性表达增高.本文以吗啡、甲基苯丙胺、酒精、可卡因为例,阐明它们对Hsp70表达的影响和涉及的分子机制,为精神活性物质与Hsp70相关性的研究提供一定参考.
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tRNA的异常甲基化将细胞应激与神经发育异常相关联
遗传性智力障碍是一种全球发病率约2%的神经发育异常疾病。已报道NSun2基因的若干突变会导致人群中的Dubowi-tz样综合征,其主要征状包括智力障碍、小头畸形、语言迟缓、行为缺陷、生长发育迟滞等。部分上述征状在NSun2敲除小鼠模型中也有表现。同样,在缺失NSun2的果蝇中研究人员发现果蝇的短时记忆受损。已知NSun2是一种保守的RNA甲基转移酶,可对转运RNA(tRNA)和其他非编码RNA进行m5C修饰。那么这种转录后的修饰是如何影响疾病的发生比如神经发育异常的呢?对此本文的作者进行了研究,他们的研究结果发表在2014年7月25日在线出版的《欧洲分子生物学组织杂志》( EMBO Journal)杂志上。
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克感利咽口服液对流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞释放氧自由基和NO水平的调节作用
流感病毒作为外源性抗原侵入机体,激活巨噬细胞和嗜中性白细胞产生氧自由基已被我们和其他学者的实验所证实[1],而流感病毒感染对次级免疫器官脾脏T、B淋巴细胞产生活性氧和一氧化氮(NO)自由基的体内实验尚未见报道.我们依据本项课题的研究目标和中药复方的作用特点,从中医整体观出发,研究了流感病毒FM1呼吸道感染对小鼠脾淋巴细胞释放氧自由基和NO的影响及其克感利咽口服液对流感病毒感染引起脾淋巴细胞应激升高的调节作用.
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Maspin与p53在宫颈鳞癌中的表达及相关性分析
乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(mammary-serpin,Maspin)是近年来发现的一种肿瘤抑制基因,具有抑制肿瘤侵袭转移和血管生成,诱导细胞凋亡的功能.p53作为多种细胞应激与细胞应答的中间环节,在整个机体细胞的生长发育分化过程中起着举足轻重的作用[1].本文旨在探讨两者的异常表达与宫颈鳞癌发生发展之间的关系,为宫颈鳞癌的诊断、治疗和预后寻找新的思路.
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内质网应激与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病
细胞应激涉及线粒体、内质网、细胞核等细胞器的应激,它们既相对独立,又相互作用.内质网(endoplasmic reticulum,ER)是细胞合成、加工蛋白质和贮存Ca2+的主要场所,对应激极为敏感,其功能紊乱时出现错误折叠与未折叠蛋白在腔内聚集以及Ca2+平衡紊乱的状态,称为ER应激.ER应激对决定应激细胞的结局如抵抗、适应、损伤或凋亡有重要作用,近年来有关其信号通路与效应的研究非常活跃.包括肥胖、胰岛素抵抗(IR)、2型糖尿病(DM)在内的代谢综合征已经成为危害人类健康的严重的疾病之一.2型DM中超过85%的人表现为肥胖,同时,全球肥胖人口的增加又大大提高了代谢综合征尤其是IR和2型DM的发病率.但是这些疾病代谢紊乱的分子机制以及其彼此之间的相互关联仍未完全阐明.在细胞培养和动物模型中,有研究显示:在有机体、细胞、分子水平上,ER应激是联系肥胖、外周IR和2型DM的纽带[1].ER应激可做为肥胖、IR和2型DM的一个新的研究热点.
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核转录因子CHOP研究进展
一、CHOP概述GADD153/CHOP(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153/C/EBP homology protein)是一种细胞应激相关蛋白,又称C/EBPζ,DNA damage in-ducible transcript 3(DDIT3),属于C/EBP(CCAAT/enhancer binding proteins)家族成员,对细胞增生及分化具有十分重要的作用.
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在心血管疾病时热休克蛋白27作用研究的进展
热休克蛋白(heat shock proteins,Hsp)包括几类功能上有关的热反应细胞应激蛋白质家族,由许多类型的细胞表达,初于1962年自果蝇幼虫的唾液腺中发现.Hsp根据它们的大小和分子结构,通常可分为7个家族,即Hsp 10、小Hsp(15~30kDa)、Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp100[1].
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重视心血管疾病中的内质网应激机制——从细胞应激的基本反应到临床防治的思考
基因组学和蛋白组学的发展极大地推动了生物医学的进步.近年来,以蛋白质为中心,上呈基因下联功能表型的研究为临床疾病的防治开拓了新的领域.内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)即是这样一个新概念.蛋白质功能取决于其正确折叠和修饰,这主要由内质网完成,内质网还调控脂质和胆固醇合成、钙稳态、细胞凋亡和自噬等细胞基本生命活动.内质网通过启动并整合细胞核、线粒体和高尔基体等亚细胞器反应,以决定应激细胞的转归:恢复自稳态和修复损伤,或损伤加重乃至死亡.
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多功能G3BP应激蛋白的红色及蓝色荧光标记
目的:分别构建含有樱桃红荧光蛋白和蓝色荧光蛋白(BFP)标签的应激蛋白G3BP表达质粒,实现活细胞内G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记.方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,分别利用EcoRI和BamHI双酶切法将目的片段连接到pmCheery-C1和pEBFP-N1载体上,再将构建成功的pmCheery-C1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦显微镜及Western印迹法检测红/蓝色荧光蛋白与目的蛋白G3BP的融合表达以及在活细胞内的共定位情况.结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到红/蓝色融合蛋白的表达,共定位分析结果显示两者均可在HeLa细胞胞浆中形成应激颗粒.结论:pmCheery-C 1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP构建成功,对G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记有助于进行其在细胞应激方面的机制研究.
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烟雾吸人性急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征与细胞应激
烟雾吸人性急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征是火灾后患者的主要死亡原因,其发病机制仍未完全清楚,近年来的研究发现其同细胞应激反应关系密切.其中热应激早发生,产生各种热休克蛋白;氧化应激可诱导各种酶类及氧自由基的产生及释放;缺氧性应激可产生缺氧诱导因子.这些应激蛋白的产生可以提高细胞抗应激能力,维持细胞的稳态以利细胞在应激条件下生存,但若应激过强过久则诱导损伤细胞的凋亡来保护机体.本文就近年来烟雾吸人性急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的研究与细胞应激的相关联系作一阐述.
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应激状态下细胞内TTR-RBPs蛋白家族核质穿梭机制的研究进展
TTR -RBPs(turnover-and translation-regulatory RNA binding proteins) 是一类 RNA结合蛋白,主要调节 RNA 的降解和 mRNA 的翻译.正常情况下,许多 TTR-RBPs 是核内定位蛋白.在应激状态下,它们会通过蛋白激酶的激活出核进入细胞质,与特定的蛋白或 RNA 结合.TTR-RBPs 通过参与细胞内应激调控机制,从而抑制细胞周期或影响细胞形态,或调控细胞损伤修复,或诱导细胞凋亡.因此,TTR-RBPs 在维护基因组稳定性,抑制细胞恶变及肿瘤发生方面发挥重要作用.本综述详细介绍近年来 TTR-RBPs 的研究进展,特别是该家族的三个代表性蛋白 HuR,TIA-1和 TIAR在应激状态下的核质穿梭调控机制的研究进展.
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热休克蛋白的表达与败血症关系研究进展
热休克蛋白( heat shock protein, HSP)又称应激蛋白,是普遍存在于所有生物细胞中一组结构和功能具有广泛同源性的蛋白质.败血症是因感染因素作用于机体所引发的一种过度炎症反应状态,导致炎性介质的大量、失控性释放并相互刺激、诱导、调节,形成复杂的级联反应网络,从而造成组织灌注不足、缺血再灌注损伤甚至多器官功能衰竭.机体对损伤的突出表现是炎症反应,启动细胞内源性保护机制.当细胞受到各种外界因素如增高的温度、有害的理化因素、缺氧、感染、创伤等刺激时,可诱导 HSP的产生.HSP的表达可作为细胞内源性保护机制以对抗细胞应激的损伤.HSP在败血症中的表达情况、作用及与炎症介质的关系比较复杂,其机制尚未完全明晰,现就此专题作一简单介绍.
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热休克蛋白70对细胞应激反应的调节
应激反应从宏观上看,是机体在遭受一切有害刺激(如创伤、感染、惊吓、温度变化)后作出的一系列非特异性防御反应.近年来分子生物学的迅速发展使人们能够从细胞与分子水平以微观角度来了解应激反应,由此提出了细胞应激的概念.研究认为细胞应激反应中能起保护作用的应激蛋白主要是热休克蛋白家族.
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P38 MAPK在慢性阻塞性肺疾病中的作用
慢性阻塞性肺疾病是一种慢性气道炎症性疾病,是肺部对有害颗粒或气体的所产生的异常炎症反应,这种气道炎症常导致持续性的气流受限和肺功能的进行性下降。此外,由肺内炎症反应等所导致的氧化应激反应也参与了COPD的发病。 p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 mitogen-activated protein ki-nase,p38MAPK)是细胞内重要的信号传递者,属应激蛋白激酶,与炎症、应激反应的调控密切相关,参与了对多种炎症细胞因子和细胞应激信号的传导。有研究表明, p38 MAPK与COPD的炎症反应、氧化应激等发病机制关系密切,且P38 MAPK 抑制剂能有效改善COPD患者的肺功能、降低炎症介质水平,提示p38MAPK可能成为COPD的治疗靶点[1]。因此本文就COPD和p38 MAPK的关系做一综述,以期为COPD的防治提供新思路。
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S IRT7研究进展
SIRT7是Sirtuins蛋白家族(组蛋白去乙酰化酶类)成员之一,位于17号亚染色体(17q25.3)的单拷贝基因。以往研究多集中在SIRT1~SIRT6,近年来,随着对SIRT7研究的不断深入,发现其对特定底物具有脱乙酰化物酶的活性,可通过多种途径参与基因转录、蛋白质合成、染色体重构及细胞应激等过程的调节。此外, SIRT7还参与相关疾病及衰老的发生发展过程。本文就近年来SIRT7研究进展作一综述。
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高原低氧诱导细胞应激试验研究
目的:探讨高原低氧状态对诱导实验鼠细胞应激性的作用和影响.方法:设定A,B,C 3组,分别再将其分为实验组(A1,B1,C1)和对照组(A2,B2,C2),每小组18只,共108只实验鼠,雌雄各半,A组和C组用CR小鼠,B组用Wistar大鼠,A1组分析快速进入海拔3 820 m的缺氧诱导因子-1α表达特点;B1组置于400~420 kPa低压氧舱内压下,观察不同低氧暴露时间对大鼠心肌线粒体的影响;C组分析对比在不同海拔高度、不同氧浓度、不同天数的血浆血管内皮生长因子表达水平.对照组在海拔800 m进行实验.结果:A1组内皮素-1α的浓度逐渐上升,小鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α实验A1组阳性显著高于A2组;B组随进入低氧环境的天数延长,大鼠心肌线粒体的数量发生不同改变;C1组血管内皮生长因子浓度随天数增加而增加,与C2组比较差异有统计学意义.结论:低氧低压环境条件可促进实验鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α表达,实验鼠有低氧适应(习服)过程,血管内皮生长因子调控与氧含量相关,随氧含量下降而表达上升.
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应激效应对大鼠心脏移植后冠脉病变的影响
我们通过建立大鼠腹部心脏异位移植模型,采用比较蛋白质组学研究移植后心肌蛋白质表达的变化,发现一些与细胞应激相关的蛋白异常表达,认为应激效应在心肌损伤和心脏移植后冠脉病变(CAV)的形成中可能发挥重要作用.