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新西兰大白兔局部牙槽骨缺损模型的建立
目的 建立新西兰大白兔局部牙槽骨缺损模型,为骨替代材料的动物实验研究提供参考.方法 取20只新西兰大白兔,全麻下在兔双侧下颌第一磨牙与中切牙中间的无牙区制造约4 mm×4 mm×4 mm牙槽骨缺损模型.造模后1、4、8、12周随机各取5只大白兔将其处死,完整取出双侧下颌骨体部,去软组织.X线检查骨缺损处愈合及骨小梁改建情况,双能X线骨密度仪测量其骨密度,大体解剖学及组织学观察骨缺损处愈合程度,碱性磷酸酶活性检测试剂盒测定成骨细胞活性.结果 随造模时间延长,兔骨缺损部位逐渐长满新骨,新生骨与周围骨界限不清;造模后前8周以新骨形成为主,8～12周以骨痂改建为主,12周时骨密度高;造模后第4周成骨细胞活性达顶峰.结论 于下颌第一磨牙与中切牙之间成功构建新西兰大白兔局部牙槽骨缺损模型.
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非甾体类孕酮受体激动剂 Tanaproget对兔动脉硬化的抑制作用及其机制
目的：探讨非甾体类孕酮受体激动剂Tanaproget对动脉硬化的影响及其可能的机制。方法健康新西兰大白兔24只随机分为正常饲料（干草粉）喂养组（正常组）、高脂饲料（2％胆固醇＋1％猪油＋90％普通饲料）喂养组（模型组）、高脂饲料加Tanaproget喂养组（干预组），模型组及干预组于喂养第1周末，耳缘静脉注射牛血清白蛋白250 mg／kg。实验1周末和10周末，检测血清甘油三脂（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-C），ELISA法检测血清白细胞介素8（IL-8）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）；实验10周末随机抽取每组中一只取主动脉做油红O染色，其余取主动脉弓做石蜡包埋切片并行HE染色，提取血管组织蛋白，采用Western blotting法检测核转录因子κB （ NF-κB）和Toll样受体4（TLR4）。结果实验10周末模型组和干预组血清 TG、LDL-C水平较正常组升高（P均＜0．01）；实验后模型组血清IL-8、TNF-α水平较正常组和干预组升高（ P均＜0．01）；大体标本油红O染色肉眼可见模型组斑块明显多于、大于正常组和干预组；HE染色后模型组主动脉内膜厚度明显大于正常组和干预组。模型组NF-κB、TLR4表达明显高于正常组和干预组（P均＜0．01）。结论 Tanaproget通过特异性与孕酮受体结合后调节血脂代谢，同时抑制活化的TLR4／NF-κB信号通路，减少炎症因子的转录与生成，从而发挥其抗动脉硬化作用。
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降脂治疗对新西兰大白兔性激素和促甲状腺激素的影响
目的 探讨降脂治疗是否对新西兰大白兔性激素及促甲状腺激素水平存在影响.方法 48只新西兰大白兔平均随机分为:A组(空白对照组),B组(辛伐他汀20mg/kg组),C组(辛伐他汀40mg/kg组).检测用药前及用药10个月后3组LDL-C、血清睾酮、雌二醇、促甲状激素水平.结果 与A组比较,B、C组LDL-C、雄兔雌二醇及雌兔睾酮水平下降(P<0.05);3组间促甲状腺激素水平比较无统计学差异(P>0.05).结论 降脂治疗降低雄兔雌二醇及雌兔睾酮水平,促甲状腺激素水平无明显变化.
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痰湿方对痰湿阻络型颈椎病兔IL-1、IL-6和PGE2的影响
目的:观察内服痰湿方对痰湿阻络型颈椎病兔椎间盘和咽部黏膜白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)水平的影响.方法:将造模成功的32只痰湿阻络型颈椎病新西兰大白兔随机分为痰湿方组、空白对照组,每组16只,分别在用药后第1周、第2周、第3周、第4周随机处死,取椎间盘和咽部黏膜,做成匀浆,用ELISA法检测上清液IL-l、IL-6、PGE2的浓度.结果:给药后第2周、第3周、第4周的椎间盘和咽部黏膜IL-l、IL-6、PGE2含量均极显著低于给药后第1周(P＜0.01),空白对照组第3周、第4周的椎间盘IL-1含量显著低于给药后第1周(P＜0.05);组间比较,第2周痰湿方组椎间盘IL-1的含量显著低于空白对照组(P＜0.05),第3周、第4周痰湿方组椎间盘IL-1的含量极显著低于空白对照组(P＜0.01).结论:痰湿方可用于慢性咽炎引起的颈椎病的治疗中可起到良好的治疗效果.
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补气通络针剂加小剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后脊髓组织及血液中NO合成酶的影响
为探讨早期静脉滴注补气通络针加小剂量甲基强的松龙(methylprednisolone MP)对急性脊髓损伤的疗效和作用机制.取65只新西兰大白兔,随机分为空白组、生理盐水组、中药组、大剂量MP组、小剂量MP加中药组,采用改良Allen's重物打击法,致伤能量为 120 g·cm.通过观察动物脊髓神经功能的恢复和脊髓组织及血清中MOS的含量变化情况.结果显示中药组、大剂量MP组、小剂量MP加中药组均可促进脊髓神经功能的恢复,尤以大剂量MP组、小剂量MP加中药组为著;伤段脊髓及血清中NOS急剧升高且在6小时升至高,以后逐渐下降,中药组、大剂量MP组和小剂量MP加中药组在不同时间均能降低血清及脊髓组织中NOS,大剂量MP组和中药加小剂量MP组在不同时间伤段脊髓及血清NOS变化比较无明显差异;但均比中药组显著.表明该方法可通过调节脊髓组织及血清NOS的含量变化,促进脊髓神经功能的恢复.
关键词： 脊髓损伤/中西医结合疗法 NOS 实验研究 动物 新西兰大白兔 -
补气通络针剂加小剂量甲基强的松龙对损伤脊髓组织及血中内皮素的影响
为探讨早期静注补气通络针加小剂量甲基强的松龙(methylprednisolone MP)对急性脊髓损伤的疗效和作用机制.取65只新西兰大白兔,随机分为空白组、生理盐水组、中药组、大剂量MP组、小剂量MP组加中药组,采用改良Allen's重物打击法,致伤能量为120gcm.通过观察动物脊髓神经功能的恢复和脊髓组织及血浆中ET含量的结果显示中药组、大剂量组MP、小剂量MP加中药组均可促进脊髓神经功能的恢复,尤以大剂量MP组、小剂量MP加中药组为著;伤段脊髓及血清中ET急剧升高,血浆中ET在ASCI后6小时升至高峰,以后逐渐下降;而脊髓组织中ET在24小时升至高峰;中药组、大剂量MP组和小剂量MP加中药组在不同时间均能降低血浆及脊髓组织中ET,大剂量MP组和中药加小剂量MP组在不同时间伤段脊髓及血清中ET变化比较无明显差异,但均比中药组显著.表明早期静注补气通络针加小剂量甲基强的松龙可通过调节脊髓组织及血浆中ET的含量变化,治疗脊髓的继发性损伤,增效减毒.
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兔眼瞳孔缝合修复术后远期病理学改变
病理性瞳孔散大是影响视功能的重要因素,近年来开展的瞳孔缝合术通过机械性缩小瞳孔来改善视觉质量,但有关虹膜内缝线长期存留的病理学变化及术眼和对侧眼远期的安全性研究报道甚少,本研究选用新西兰大白兔进行瞳孔括约肌损伤和缝合修复的实验研究,观察术后兔眼远期的临床及病理学变化,为临床治疗提供依据.
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孕晚期应用高压氧对孕兔及胎兔脂质过氧化的影响
自20世纪70年代将高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)用于治疗分娩期急性缺氧及胎儿宫内发育迟缓后,人们发现HBO在改善胎盘血流及促进细胞水平氧扩散方面有不可替代的作用.有研究表明,孕期应用HBO能明显改善晚发型胎儿生长受限胎儿的脐动脉血流波形及血液黏稠度,增加新生儿平均出生体重[1],可见HBO治疗为临床产科提供了一种有效的治疗手段.目前,有关妊娠期应用HBO对母儿的影响及其安全性的报道甚少.Hink等[2]提出,为更全面的探讨HBO的临床治疗潜能,研究过氧化作用与HBO治疗机理之间的关系是非常必要的.本研究利用新西兰大白兔进行动物实验,以探讨妊娠晚期应用HBO对母兔及胎兔脂质过氧化的影响.
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盐酸决奈达龙口服对兔左室肌电生理特性的影响
目的 探讨决奈达龙口服后对新西兰大白兔左室楔形心肌组织块电生理特性的影响.方法 20只兔随机分为对照组和决奈达龙组,对照组给予正常饮食,决奈达龙组给予正常饮食和决奈达龙100 mg·kg.·d-1,连续4周.4周后建立冠状动脉灌注的兔左室楔形心肌组织块模型,应用浮置玻璃微电极和心电图同步记录技术,观察两组内外两层心肌细胞的动作电位时程(APD)、跨壁复极离散度(TDR)及心律失常发生情况.结果 在不同的刺激频率下(1000、2 000、3 000、4000),①决奈达龙组心肌细胞的QT间期较对照组延长(P＜0.05).②决奈达龙组内、外膜心肌细胞的APD较对照组均延长(P均＜0.05).③决奈达龙组心肌细胞的TDR较对照组缩短(P＜0.05).结论 决奈达龙可延长兔内、外膜心肌细胞的APD,并可减小心肌细胞的TDR.
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血管内皮生长因子对兔软骨修复的影响
已证实血管内皮生长因子(VEGF)可以促进血管的增殖,本实验旨在探讨通过VEGF增加损伤区域的血运,观察其是否可以促进软骨的修复.一、材料与方法24只新西兰大白兔,随机分为2组.静脉麻醉、消毒后,取膝关节外侧入路,暴露股骨滑车负重区的软骨面,制作直径4 mm、深2 mm的全层软骨损伤的模型.实验组关节内注射30 μg VEGF-A混合0.2 ml生理盐水;对照组注射0.5 ml生理盐水.术后3、6和12周随机选取实验组和对照组的4只兔处死,切取标本,进行组织学观察.
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带蒂筋膜瓣促血管化成骨与膜诱导成骨作用的比较
本研究旨在比较带蒂筋膜瓣促血管化成骨与膜诱导成骨作用,现报道如下。一、材料与方法1.组织工程骨制备:成年新西兰大白兔75只,雌雄不限,年龄4～5个月,体质量2.0～2.5 kg,每只兔分点抽取自体红骨髓共8ml,应用淋巴分离液经密度梯度离心去除红细胞等纯化处理后,取中间分离出的单个核细胞层,通过稀释获得浓度为1×108/ml的含有骨髓基质干细胞(BMSC)的单核细胞悬液2ml,将含有骨形态发生蛋白(BMP)的生物支架材料即骨诱导活性材料(OAM)切成符合动物造模后骨缺损大小的条块状,置于含庆大霉素16万U抗生素生理盐水中复水5 min取出,放入含BMSC的上述试管中充分浸泡混合10 min,制成自体BMSC+ OAM的组织工程化骨,使用前配置。
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兔肝癌动脉插管介入技术研究
兔VX2肝癌模型是一种适合经导管动脉化疗栓塞术( TACE)实验研究的肝癌动物模型。我们对兔VX2肝癌模型介入插管技术进行了改良,提高了插管成功率,现报道如下。一、材料与方法1.材料:6 ～8个月龄新西兰大白兔20只,体质量2.0～2.5 kg,雌雄不限,购自山东省农业科学院。VX2瘤细胞株由美国引进。介入器械:3F微导管及微导丝、自制股动脉导管鞘等。主要设备:德国西门子大C臂数字减影血管造影(DSA)。2.建立移植性肝癌模型:将瘤细胞接种于兔大腿内侧近腹股沟部位皮下,使其成瘤并传代,2周左右瘤体可长至1 ～2 em3,手术取出传代瘤株,取靠近边缘的鱼肉样肿瘤组织在平皿上剪成l～2 mm3的小块,以生理盐水反复冲洗,作为瘤种备用。将预接种兔麻醉后固定,剑突下切口长1 ～2 em打开腹腔,暴露肝脏。
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体外冲击波治疗兔缺血性股骨头坏死过程中骨形态发生蛋白的表达
我们通过观察骨形态发生蛋白(BMP)-2在体外冲击波治疗股骨头缺血坏死过程中的表达特点,探讨其治疗机制.一、材料与方法1.实验模型及分组:成年新西兰大白兔30只,体质量3.0～4.0kg,由武汉大学医学院实验动物中心提供.参照Yamamoto等[1]的方法,30只家兔接受10 μg/kg的脂多糖静脉注射,24 h后重复1次,然后每隔24 h注射40 mg/kg甲基泼尼松龙1次,共3次.
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胆汁泡蛋白促成核活性及其在不同人群含量分布的研究
我们利用超速离心法结合电泳区带定位法提纯了一种相对分子质量为33.5×103的泡蛋白，通过本研究探讨泡蛋白的促成核活性并观察不同人群的含量分布。 一、 材料和方法 1. 材料：相对分子质量为33.5×103泡蛋白（本院已制备）。胆固醇、弗氏佐剂、金黄色葡萄球菌A蛋白交联的辣根过氧化酶（HRP-SPA）等购自Sigma公司。偏光显微镜（Olympus公司），离子交换柱DEAE-Sephadex A50（Pharmacia分装），12×8孔酶标板及酶标读数仪（华美公司）。新西兰大白兔由复旦大学医学院实验动物中心提供。 2. 泡蛋白促成核活性检测： 参照Kibe等［1］的方法制备Small模拟胆汁，总脂浓度100 g/L，胆固醇饱和度1.2，胆盐/磷脂4.4；采用朱雷明等［2］的方法配制综合模拟胆汁，含3.80 mmol/L未结合胆红素。分别取40 μg泡蛋白加入1 ml Small模拟胆汁及综合模拟胆汁作为实验组，对照组用人体白蛋白（n=6）。成核时间（NT）的测定根据Holan等［3］的方法，并计算成核活性。 3. 泡蛋白抗血清的制备及效价鉴定： 将0.4 ml弗氏完全佐剂在新西兰大白兔双侧足蹼均匀多点注射激发免疫反应，2周后取50 μg泡蛋白混匀乳化液多点免疫，第5、8周行加强免疫，10周后采血、收集抗血清；经DEAE-Sephadex A50纯化IgG；双向免疫扩散法检测效价。
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新西兰大白兔腰椎间盘退变、固定融合术后相邻椎间盘退变模型的建立
目的 建立新西兰大白兔腰椎间盘退变、固定融合术后相邻椎间盘退变的动物模型.方法 取10个月龄健康新西兰大白兔15只,雌雄不限,用18G穿刺针在透视下经皮穿刺定位L3 ～L4椎间盘,定期观察磁共振成像(MRI),当L3～L4椎间盘出现退变后,切除L3～L4椎间盘取横突椎体间植骨融合、钛板内固定,术后连续观察相邻椎间盘MRI的变化,术后12周处死兔,做相邻椎间盘的组织病理学观察.结果 穿刺椎间盘术前、后各时间点兔反应评分比较,差异均无统计学意义(F=1.563,P =0.061);椎间盘切除固定融合术后各时间点兔反应评分与术前比较,差异均有统计学意义(F=6.178,P=0.000).而穿刺和融合、固定术后两组比较各时间点兔反应评分均明显降低,差异均有统计学意义(t=7.952和5.791和3.944,P=0.000和0.000和0.000),存活率100％.动态查MRI,发现穿刺椎间盘后第4周开始在T2像上整体表现为信号下降,融合固定术后相邻椎间盘有不同程度退变表现,第4周后经皮穿刺椎间盘术后和椎间盘切除固定融合术后的相邻椎间盘退变差异无统计学意义(P=0.084),第8、12周后相邻椎间盘退变差异有统计学意义(P=0.002);固定融合术后12周处死实验动物,见固定节段完全融合,周围被骨痂包饶,相邻节段椎间盘在大体表现为髓核色灰暗,呈脂肪样改变,量少;苏木素-伊红(HE)染色:髓核界限不清,髓核组织被软骨组织所替代,中央呈变性样改变.结论 为椎间盘切除固定融合术后相邻椎间盘退变的研究提供了一种可靠的动物模型.
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兔蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛程度的分级标准判定
目的 探讨兔迟发性脑血管痉挛模型制作方法及脑血管痉挛程度的分级标准.方法 应用两次枕大池注血法建立兔迟发型脑血管痉挛模型,分别在造模后1、3、7d观察动物模型的行为学后,行DSA造影;然后取基底动脉进行HE染色和扫描、透射电镜观察.结果 造模后3、7d,出现明显行为和神经功能异常,血管造影显基底动脉中度-重度痉挛;HE染色示基底动脉血管管壁增厚,管腔变小,血管明显痉挛;透射电镜观察显示,造模后3d基底动脉内皮细胞核出现凋亡小体,线粒体空泡样变性,造模7d基底动脉内皮线粒体肿胀溶解,包浆空泡样变性.结论 应用两次枕大池注血法能够重复建立成功的兔迟发型脑血管痉挛模型,在此基础上可以制定脑血管痉挛程度的判定标准(4级分法),有利于科学地综合评价迟发型脑血管痉挛模型.
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高压氧治疗对兔脑内种植的VX2肿瘤生长的影响
目的 探讨高压氧治疗对兔脑内种植VX2肿瘤生长的影响.方法 随机将脑内种植VX2肿瘤的14只新西兰大白兔分为对照组和高压氧治疗组,每组7只,对比分析两组肿瘤的生长情况及荷瘤兔的生存期.结果 肿瘤种植后第9天(高压氧治疗前)对照组和高压氧治疗组肿瘤体积分别为(301.2±50.4)mm3和(298.0±18.6)mm3,肿瘤种植后第15 d分别为(563.7±75.0)mm3和(566.5±23.8)mm3,肿瘤种植后第21 d分别为(1208.5±224.8)mm3和(1143.8±125.0)mm3以及荷瘤兔死亡时分别为(2446.8±384.7)mm3和(2520.4±302.7)mm3;对照组和高压氧治疗组荷瘤兔平均生存期分别为(35.6±5.2)d和(36.7±6.3)d.肿瘤种植后第9(高压氧治疗前)、15、21天及荷瘤兔死亡时肿瘤体积以及荷瘤兔的平均生存期两组之间均无明显差异(P>0.05).结论 高压氧治疗对兔脑内种植VX2肿瘤的生长及荷瘤兔生存期均无明显影响.
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环磷酰胺对兔下颌骨缺损愈合的影响
目的:观察应用cyclophosphamid对兔下颌骨缺损的变化,探讨CTX在兔下颌骨愈合过程中影响.方法:健康的新西兰大白兔24只,体重2.0～2.4 kg.在其下颌骨体部制造1.5 mm×10 mm的部分骨缺损模型,随机分成A、B两组、不限雌雄,每组12只.术后第2天,A组腹腔注射CTX,20mg/kg,B组腹腔注射生理盐水,10 mL/只.注射1次/d,共1周.在术后不同时间点行X线片、骨密度、HE染色及免疫组织化学染色观察,并测血清钙素水平.结果:术后4周B组的骨密度较A组高(P＜0.05).B组术后骨缺损X线评分在1、4、8周明显高于A组(P＜0.05).术后B组骨缺损部位的新骨生成面积百分比均比A组高(P＜0.05).B组术后骨缺损处Ⅱ胶原(ColⅡ)蛋白分泌较A组增多(P＜0.05).术后1、4、8周B组血清骨钙素水平均较A组明显增高(P＜0.05).结论:在骨缺损的愈合过程中,应用CTX可起延迟骨缺损愈合的作用.
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自体血清培养新西兰大白兔关节软骨细胞
目的：改进与探讨新西兰大白兔软骨细胞体外培养的方法。方法：取3月龄新西兰大白兔自体血，制备自体血清备用，无菌条件下取4周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨，采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法，分离关节软骨细胞并应用新西兰大白兔自体血清进行原代、传代培养；采用形态学观察，甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原免疫组织化学方法对膝关节软骨细胞进行鉴定，MTT法检测软骨细胞的增值能力；结果：倒置显微镜下见原代软骨细胞2 h后开始贴壁，8 h可形成单层，24 h即可传代。第1~5代细胞表型稳定，增殖力良好。甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞核呈深染色，细胞质呈淡蓝色；免疫组织化学显示软骨细胞Ⅱ型胶原呈黄褐色表达，MTT检测显示前5代软骨细胞增值能力强，无明显差异；结论：结果表明自体血培养的前5代新西兰大白兔节软骨细胞均可用于膝骨关节炎的研究。
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骨膜联合同种异体骨治疗兔骨缺损模型的实验研究
目的：通过实验动物研究观察骨膜联合同种异体骨治疗骨缺损的效果，探讨其可行性及修复机制。方法以新西兰大白兔为研究对象，分为3组，即实验组、对照组和空白组。通过X线、HE染色及荧光定量PCR方法，检测骨膜联合同种异体骨修复骨缺损的效果及其可能机制。结果 X线检查显示实验组与对照组骨缺损处均已修复，空白组骨缺损处未修复；HE染色结果显示实验组新生骨小梁排列良好，仍有少量异体骨残留，对照组新生骨小梁排列整齐，空白组未见明显新生骨小梁；荧光定量PCR结果显示，术后实验组Spp-1、BMP-2基因表达高于对照组(P<0.05)，ColⅠα1基因表达低于对照组(P<0.05)。结论骨膜联合同种异体骨能够有效地促进骨缺损的修复。
