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正交试验优选降糖合剂的提取工艺
目的:考察降糖合剂的佳提取工艺.方法:通过正交试验,以黄芪甲苷的得率为指标,考察加水量、煎煮时间及次数对提取效果的影响.结果:降糖合剂的佳提取工艺为煎煮两次,每次加水12倍,煎煮2h.结论:佳提取工艺提净率高,简单、方便.
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高效液相色谱法测定胰复康胶囊中黄芪甲苷含量
目的:对复方制剂胰复康胶囊中黄芪甲苷进行含量测定.方法:采用HPLC法测定了制剂中黄芪甲苷的含量.结果和结论:制剂中黄芪甲苷的含量平均为0.0443 mg/粒.HPLC法可以用于复方制剂中黄芪甲苷的含量测定.
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黄芪甲苷对大鼠心肌基因表达谱的影响
目的:观察黄芪甲苷连续给药对大鼠心肌基因表达谱的影响.方法:雄性 Wistar大鼠以黄芪甲苷5mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续2周.对照组给予相同容积的黄芪甲苷溶剂.取黄芪甲苷给药组大鼠心肌组织和相同部位的溶剂对照组大鼠心肌组织进行基因芯片对照检测,扫描仪扫描芯片荧光信号,用相应软件分析差异表达基因和基因功能.结果:黄芪甲苷组显示72个上调基因,其中39个基因生物学特性明确.经基因功能分析,黄芪甲苷对血管发育功能的影响大;其次是对心肌发育功能和与细胞骨架表达及细胞收缩相关功能有影响.结论:黄芪甲苷对促进血管和心肌发育、增强心肌功能等基因上调的作用为明显.
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黄芪甲苷的大鼠在体肠吸收动力学的研究
目的:研究黄芪甲苷的在体肠吸收机制.方法:采用大鼠在体单向肠灌流实验,利用HPLC法测定黄芪甲苷的含量,分别研究吸收部位、药物浓度、P-糖蛋白抑制剂对黄芪甲苷吸收的影响.结果:各肠段的吸收速率常数(KA)和表观吸收系数(Papp)有显著性差异(P<0.05);在20～80 mg·L-1内,小肠吸收速率常数和表观吸收系数无显著性差异;P-糖蛋白抑制剂对黄芪甲苷的肠吸收影响不大.结论:黄芪甲苷的肠吸收为典型的被动扩散吸收机制.
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氨液水解法用于提高黄芪中黄芪甲苷含量的工艺研究
目的:探讨氨试液水解法用于提高黄芪甲苷含量的佳工艺条件;比较氨解前后黄芪总皂苷的含量差异.方法:采用正交设计试验对影响氨解程度的主要因素进行考察,以黄芪甲苷含量为指标,用高效液相色谱法测定其含量.采用大孔吸附树脂-比色法测定氨解前后黄芪总皂苷的含量.结果:浓氨试液与药材的配比对氨解程度的影响为显著.佳氨解工艺参数为:浓氨试液与药材配比1:5,氨试液浓度为2%时,于90℃水浴回流2 h,黄芪甲苷含量较原药材提高约16倍.比色法结果显示氨解前后黄芪总皂苷含量无统计学差异.结论:氨解法可显著提高黄芪药材中黄芪甲苷的含量,且氨解过程并未影响黄芪总皂苷的含量.说明该法可使其他类型的皂苷转化为黄芪甲苷,具有较高实用价值,可为工业生产提供参考依据.
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中药复方成分提取动力学数学模型的初步研究
目的:建立中药复方成分提取动力学数学模型,并对补阳还五汤中黄芪甲苷的提取动力学参数进行研究和分析.方法:根据Fick定律、Noyes-whitney溶出理论和药材提取过程的实际情况,考虑到溶出成分的分解消除,建立包括代数式的微积分方程组的中药复方溶出动力学数学模型,求解得函数表达式,并对动力学参数求算进行分析.运用该模型研究了补阳还五汤中黄芪甲苷的动力学参数.结果:建立了包含3项e的指数形式的成分溶出浓度解析解及各参数分析方法.黄芪甲苷的动力学参数M,α,N,β,L,π,K,k1',k2',ρ1,ρ2,tmax,cmax,AUC,w0,P,D分别为0.061 27%,0.280 2 min-1,-1.027%,0.008 965 min-1,1.077%,0.002 665 min-1,3.451×10-3 min-1,3.188×10-3 min-1,0.375 9 min-1,1.420 min,0.754 7 min,184.9 min,0.057 21 mg·mL-1,289.9 min,0.070 11%,46.24%,22.35%.结论:封闭可溶中药复方扩散体系的成分溶出符合线性动力学数学模型,各参数可根据溶出浓度表达式关系计算得到.
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黄芪甲苷对Chang Liver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用
目的:探讨黄芪甲苷对Chang Liver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用.方法:以Chang Liver细胞为研究对象,使用乙醇、H2O2分别建立酒精性及非酒精性氧化损伤模型,MTT法测定细胞存活率,微板法、比色法检测转氨酶活力及抗氧化能力,DCF荧光法检测细胞内活性氧,流式细胞术检测细胞周期,DNA ladder法检测细胞凋亡.结果:2种氧化损伤均可导致Chang Liver细胞存活率和抗氧化酶活性下降、以及细胞外液中转氨酶活力和丙二醛含量升高,黄芪甲苷对上述损伤均有显著或极显著的保护效果;同时,乙醇能够显著降低损伤细胞内的活性氧水平,而H2O2能够显著升高损伤细胞内的活性氧水平,黄芪甲苷则能使上述异常的活性氧水平趋于正常.同时缓解乙醇或H2O2对Chang Liver细胞G0/G1期的阻滞现象,并对二者诱导的细胞凋亡均有一定的抑制作用.结论:黄芪甲苷对Chang Liver细胞的酒精性和非酒精性氧化损伤均有保护作用.
关键词： 黄芪甲苷 Chang Liver细胞 酒精 H2O2 氧化损伤 -
黄芪甲苷调控STAT1/IκB/NF-κB信号通路抑制γ-干扰素诱导BV-2细胞激活
目的:研究黄芪甲苷(ASI)对γ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞激活的抑制作用及机制.方法:不同浓度的ASI(25,50,100 μmol·L-1)预处理BV-2小胶质细胞2h后,以IFN-γ刺激1.5h或24h,分别收集细胞培养基上清和细胞.分别以Griess和ELISA法检测培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;qPCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,白介素1β(IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平;Western blot法检测细胞STAT1/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达.结果:ASI能显著抑制IFN-γ诱导BV-2细胞NO和TNF-α水平的升高(P＜0.001);进一步研究表明,50 μmol·L-1ASI能够显著抑制细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P＜0.01,P＜0.05),并表现出下调iNOS mRNA表达的趋势,但对BV-2细胞CD11b的mRNA水平无显著影响;同时,ASI显著抑制IFN-γ诱导上调的pSTAT1,pIκB和pNF-κB的蛋白表达.结论:ASI能够抑制IFN-γ诱导的小胶质细胞的激活,其机制与其抑制STAT1/IκB/NF-κB信号通路的激活,降低炎症状态下小胶质细胞IL-1β,TNF-α以及iNOS的基因表达,从而减少NO和TNF-α的生成有关.
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黄芪甲苷对肾缺血再灌注后纤维化小鼠Toll样受体通路的作用研究
为了观察黄芪甲苷(astragalosideⅣ)对缺血再灌注后(IRI)小鼠肾组织纤维化程度的影响并探讨其作用机制,将雄性C57BI/6小鼠40只随机均分为假手术组,模型组,黄芪甲苷防治组(30 mg· kg-1· d-1),黄芪甲苷治疗组(30 mg·kg-1·d-1).除假手术组外,各组小鼠术中暴露左右肾,于肾蒂处分离肾动脉,以血管夹夹闭两侧肾动脉45 min后松开血管夹,确认肾脏血液灌注复流后,关闭切口.从手术当天防治组灌胃给药,连续30 d;从手术60d后,治疗组灌胃给药,连续30 d.检测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,HE和Masson染色下光镜观察肾组织病理和胶原的沉积;免疫组化、Western blot法和RT-PCR法分别从蛋白水平和mRNA水平观察各组肾脏中Toll样受体通路相关分子(TLR4,MyD88,TRAF6,TRAM,TRIF,NF-κB,TNF-α,IL-6,IFN-γ)的表达.结果显示,模型组小鼠患侧肾脏的纤维化程度、病理损害明显;TLR4/MyD88依赖信号通路相关分子(TLR4,MyD88,TRAF6,NF-κB)的表达量多,同时假手术组TLR4/MyD88非依赖信号通路相关分子(TRAM,TRIF)的表达量与防治组和治疗组没有差异.而防治组和治疗组小鼠的肾脏损伤有明显改善、纤维化程度明显减轻,TLR4/MyD88依赖信号通路相关分子(TLR4,MyD88,TRAF-6,NF-κB)蛋白表达水平也相应减少,且对该信号通路末端炎症因子TNF-α,IL-6和IFN-γ的表达有抑制作用.因此,黄芪甲苷可能通过抑制TLR4/MyD88依赖信号通路及炎症因子TNF-α,IL-6和IFN-γ的释放来改善小鼠缺血再灌注所致的肾纤维化,而TLR4/MyD88非依赖信号通路可能并没有参与缺血再灌注后引起肾纤维化过程.
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黄芪甲苷对大鼠肝微粒体酶活性影响
目的:研究黄芪甲苷对CYP450酶的影响,为制定合理用药方案提供科学依据.方法:以甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、硝苯地平、非那西丁为探针药,HPLC测定探针药与相应代谢产物的浓度,在体外的孵育体系中研究黄芪甲苷对CPY2C9,CPY2E1,CPY2A6,CPY3A4和CPY1A2酶活性的影响.结果:黄芪甲苷对CYP1A2,CYP2A6,CYP2E1酶的活性没有明显的影响,而对CYP2C9和CYP3A4酶的IC50分别为35.40,88.22μmol·L-1.结论:黄芪甲苷对CYP2C9和CYP3A4酶有明显的抑制作用,在与经由CYP2C9,CYP3A4酶代谢的药物合用时,可能会产牛药物相互作用.
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黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制
目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASⅣ)对H2O2诱导肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)氧化应激损伤的保护作用,并进一步探讨其分子机制.方法:将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、AS Ⅳ(12.5,100 nmol·L-1)组、阳性药(Tempol,1×105nmol·L-1)组.采用MTT法观察细胞活力；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;DHE染色检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生；流式细胞术检测细胞周期变化情况；Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin A及磷酸化p38,T-p38的表达.结果:1×105,2×105,3×105,4×105nmol·L-1H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发牛氧化应激损伤:细胞存活率明显降低,细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势.100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2(3×l05nmol·L-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤:提高细胞存活率及细胞活力,抑制细胞凋亡,降低胞内ROS产量；恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖；降低磷酸化p38的表达.结论:黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用.其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路,影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关.
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补阳还五汤苷类有效组分及其有效成分配伍对血管平滑肌细胞增殖及相关信号转导通路的影响
研究补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷及其配伍抗血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的作用,阐明其抗VSMC增殖的主要药效物质,并从细胞信号转导途径研究其作用机制.大鼠口服给药后制备含药血浆.培养大鼠主动脉VSMC,采用血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)刺激VSMC增殖,加入含药血浆,测定细胞增殖活性、细胞周期及其相关蛋白表达、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(phos-phatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3 K/Akt)、Janus激酶/信号转导与激活因子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路相关蛋白表达.结果显示,PDGF刺激后,VSMC增殖活性增强(P＜0.01),G0/G1期细胞减少(P＜0.01),S/M期细胞增多(P＜0.01),同时细胞周期相关蛋白PCNA,cyclin D1蛋白表达增强(P＜0.01).苷类组分、3个主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍均可抑制细胞增殖(P ＜0.05或P ＜0.01),作用呈量效关系和时效关系;且可使G0/G1期细胞增多(P＜0.01),S/M期细胞减少(P＜0.01),PC-NA,cyclin D1蛋白表达下调(P＜0.01),3个有效成分配伍的作用强于单个有效成分(P＜0.05).PDGF诱导VSMC增殖后,p-ERK1/2表达增强(P＜0.01),PI3K表达降低(P＜0.01),p-PI3K表达增强(P＜0.01),STAT3表达降低(P＜0.01),p-STAT3表达增高(P＜0.01).苷类有效组分和主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可使p-ERK1/2表达降低(P＜0.05),PI3K表达升高(P＜0.01),p-P13K表达降低(P＜0.05或P＜0.01),STAT3表达升高(P＜0.01),p-STAT3表达下调(P＜0.05或P＜0.01).上述结果表明PDGF可诱导VSMC细胞周期转化,使VSMC增殖.其机制与ERK,P13K/Akt,JAK/STAT信号通路激活有关.补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可抑制VSMC细胞周期转换,具有抗VSMC增殖的作用,其作用机制与其抑制PI3K/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、JAK/STAT 3个信号通路激活有关.黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷为其抗VSMC增殖的主要有效成分,三者配伍对VSMC增殖的抑制具有增强作用.
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HPLC-ELSD内标法测定8个产地黄芪药材、饮片中黄芪甲苷的含量
目的 建立HPLC-ELSD内标法,测定黄芪药材中黄芪甲苷含量.方法 采用人参皂苷Rb2为内标物,Agilent TC-C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇-水(72 28)为流动相,流速1mL·min-1,柱温30℃,ELSD检测器漂移管温度为75℃,以洁净干燥的压缩空气为雾化气体,压力为172.4 kPa.结果 黄芪甲苷在进样量0.5624～5.624μg,进样量的常用对数与对照品峰和内标峰峰面积比值的常用对数成良好线性关系(r =0.9999)；平均回收率为98.06%,RSD为0.98%.结论 建立的内标法准确度高,重复性好,是控制黄芪药材质量的较理想方法.
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黄芪甲苷的生物样品稳定性考察及在大鼠体外肠菌中代谢转化研究
为明确黄芪甲苷(AST)在生物样品中的稳定性和在大鼠体外肠菌代谢转化产物及代谢途径.本实验采用体外的方法对AST在人工胃液、人工肠液及大鼠肝匀浆中的稳定性以及大鼠离体肠道菌群中的代谢产物进行探讨.采用HPLC法测定AST在生物样本中的含量,计算AST在生物样本中的剩余百分率.采用TLC,HPLC和LC-MS/MS相结合的分析手段,鉴定代谢产物.结果发现,AST在人工胃液、人工肠液及肝脏中均较稳定,不易代谢;AST肠道菌群的代谢是通过脱糖基逐级进行的.首先,失去3位木糖基转化成次生代谢产物环黄芪醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CMG).然后,失去6位葡萄糖基得到极性更小的皂苷元环黄芪醇(CAG).研究结果表明AST在体内主要在肠道代谢,发生糖基水解作用.即肠道菌群的水解作用是AST代谢的主要原因.
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HPLC-ELSD法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量
黄芪注射液为部颁标准所收载的品种[1],其功能为益气养元、扶正祛邪、养心通脉、健脾利湿.黄芪甲苷为有效成分之一,标准中采用TLC-S法测定其含量,但该法操作繁琐,薄层条件不易控制.有文献报道采用HPLC-ELSD法测定黄芪药材中的黄芪甲苷[2].参考文献,本文采用HPLC-ELSD法测定注射剂中的黄芪甲苷,方法学研究表明该方法简便、准确、重现性好,可作为黄芪注射液中黄芪甲苷的一种测定方法.
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大孔吸附树脂和Al2O3吸附提纯党参苷Ⅰ的比较研究
党参为桔梗科植物Codonopsis pilosula的干燥根,性味甘平、无毒,有补中益气、生津止渴等功效,为传统补益药[1].党参苷Ⅰ是其专属成分,对党参类生药的品质评价具有一定意义,韩桂茹等人已利用D-101型大孔吸附树脂在实验室提纯出党参苷Ⅰ[2].张伟燕曾用色谱Al2O3从参芪口服液中吸附纯化黄芪甲苷,并评价该法吸附提纯的黄芪甲苷溶液背景较浅有利于测定[3].本研究根据党参苷Ⅰ的结构拟选用中性色谱氧化铝与D-101型大孔吸附树脂做吸附提纯党参苷Ⅰ的对比研究.因为党参中党参苷Ⅰ的含量极低,经大孔吸附树脂(或Al2O3)吸附提纯的党参苷Ⅰ富集提纯液又通过硅胶柱富集提纯后才用HPLC-MS仪分析检测[4].
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强骨饮颗粒中黄芪甲苷及绿原酸含量的测定
强骨饮颗粒由黄芪、忍冬藤、鸡血藤、独活等中药材组成,以补肾、温阳、壮骨为主,具有滋补肝肾、养血活血、通络壮骨之功效,能有效提高骨密度和改善骨质量,临床用于治疗骨质疏松症及骨质疏松疾病所致的疼痛、肌痉挛等症状,疗效显著.
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HPLC测定复聪香液中黄芪甲苷的含量
复聪香液是由银杏叶、黄芪、淫羊藿、石菖蒲、丹参、川芎、郁金7味中药组成,具有益髓填精,通络开窍,益智安神的功效.用于治疗老年性痴呆、脑萎缩和脑发育不全等.本品为本院自行研制的新药,按国家四类新药标准执行,经临床应用,疗效确切.复聪香液经制剂工艺处理后,制成吸入剂和合剂2部分[1].黄芪甲苷为黄芪有效成分之一[2],为有效控制其质量,建立HPLC对复聪香液合剂部分中黄芪甲苷进行含量测定.
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蒙古黄芪不同种质黄芪甲苷含量比较
目的:通过原产地药材和种植1年后药材中的黄芪甲苷含量的测定,判定影响黄芪甲苷含量的主要因素.方法:收集山西、内蒙古和甘肃主要产地的种质,收集同一份种质的原产地药材和种子,将种子种在北京和山西2个试验地,采集生长1年以后的药材,用药典规定的HPLC-ELSD方法测定药材中黄芪甲苷的含量.结果和结论:①原产地药材的黄芪甲苷含量均大于0.05%,符合药典标准,其中山西和内蒙古的药材略好于甘肃的药材;②种植在山西试验地的种质黄芪甲苷含量略高于种植于北京试验地,表明山西道地产区的气候和环境条件相对比较适合蒙古黄芪生长;③比较同一采集种植1年后药材和原产地药材黄芪甲苷含量,相关性不强,说明黄芪甲苷的积累与环境的关系可能大于种质的关系.
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HPLC测定回力神颗粒中五味子醇甲的含量
回力神颗粒由人参、麦冬、黄芪、五味子、当归、灵芝、茯苓、山楂、丹参经适宜加工而成.为控制产品质量,对药品的主要成分进行分析研究.因人参中人参皂苷的HPLC检测波长较低,其他成分易干扰测定[1],黄芪中黄芪甲苷的测定由于其他成分的干扰无法进行定量薄层扫描[2].五味子醇甲的测定已有一定的工作基础[3,4],故选择了五味子中的五味子醇甲作为本品的含量测定指标.
