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黄芪甲苷保护胃癌前病变大鼠胃黏膜损伤研究
目的:观察黄芪甲苷对胃癌前病变(GPL)大鼠Kras/p53信号通路对程序性细胞死亡调控效应,进而保护GPL大鼠胃黏膜.方法:采用MNNG+饥饱失常法复制GPL大鼠模型,于16周时分组灌胃给药,空白组和模型组(蒸馏水),黄芪甲苷高、低剂量组(80、20mg/kg),连续给药10周,观察各组胃黏膜组织超微结构;Western blot法检测Kras、p53、Caspase-3、Bcl-2、Bax、Beclin1蛋白表达;实时定量PCR检测ATG5、ATG12、Beclin1、LC3基因表达.结果:与空白组比较,模型组GPL大鼠胃黏膜p53、Kras、Bcl-2和Beclin1蛋白表达均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),Caspase-3蛋白表达显著降低(P＜0.05);与模型组比较,黄芪甲苷高、低剂量组大鼠胃黏膜Kras、Beclin1表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).与空白组比较,模型组GPL大鼠胃黏膜Beclin1、ATG5、ATG12和LC3基因表达均显著升高(P＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,黄芪甲苷高、低剂量组胃黏膜Beclin1、ATG5基因表达均显著降低(P＜0.01).结论:黄芪甲苷可通过Kras/p53信号通路调控GPL大鼠胃黏膜上皮细胞程序性细胞死亡,延缓GPL向肿瘤的进展.
关键词： 胃癌前病变 黄芪甲苷 Kras/p53信号通路 程序性细胞死亡 胃黏膜保护 -
黄芪甲苷对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾脏保护机制探讨
目的:观察黄芪甲苷对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠肾脏保护机制.方法:4周龄Waster大鼠除了正常组,给予2周高脂肪饮食及链脲佐菌素诱导2型糖尿病成膜后随机分组:模型组、黄芪甲苷组(10mg/kg)、奥美沙坦组(100mg·kg-1·d-1)及四甲基哌啶组(3mol/L),6周治疗观察血压及肾脏组织改变.结果:STZ诱导糖尿病12周龄的大鼠血压、血糖、尿蛋白、尿肌酐清除率及肾皮质纤维化基因均显著升高,升高的数值显著被奥美沙坦所抑制,而黄芪甲苷和四甲基哌啶均抑制除了血压以外的异常指标.模型组的肾皮质AGT及renin基因异常升高,除了奥美沙坦组明显改善外,其他组均无显著改变.结论:黄芪甲苷对STZ诱导糖尿病肾脏保护作用机制并未参与肾内血管紧张素系统,可能是通过抗氧化作用实现的.
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黄芪甲苷对淀粉样蛋白1-40损伤的胚胎鼠神经干细胞的增殖和分化的影响
目的:研究黄芪甲苷(AS)对阿尔兹海默病(AD)脑中神经干细胞(NSC)增殖分化的影响.方法:分离胚胎大鼠神经干细胞,并以β淀粉样蛋白1-40(A β1-40)处理,MTT法检测AS对细胞增殖的影响;免疫细胞化学检测AS诱导神经干细胞分化的类型;Real-time PCR检测γ-分泌酶及Notch mRNA的表达.结果:高剂量AS能刺激NSC分化,中低剂量AS能够促进细胞增殖,减轻A β的细胞毒性作用.机制研究表明,AS既能抑制y-分泌酶mRNA表达,也能促进Notch mRNA的表达.高剂量AS抑制γ-分泌酶mRNA表达的作用明显,中剂量AS则以促进Notch mRNA的表达为主.结论:高剂量AS能够通过抑制γ-分泌酶mRNA的表达,抑制Notch的激活从而诱导NSC分化.中剂量AS主要通过促进Notch的表达来促进干细胞增殖.
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黄芪甲苷与川芎嗪合用对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究
目的:观察黄芪甲苷与川芎嗪合用对大鼠脑缺血再灌注损伤保护的作用.方法:采用大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,观察对各用药组大鼠脑缺血损伤后神经功能,脑梗死体积,脑含水量、脑指数,缺血侧脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,Bcl-2和Bax蛋白表达,以及尼氏小体数的影响.结果:黄芪甲苷与川芎嗪合用可显著地减轻MCAO模型大鼠的神经功能缺损(P＜0.01);显著缩小脑梗死体积(P＜0.01);降低脑含水量和脑指数(P＜0.01);显著提高脑组织SOD活性(P＜0.01),明显降低MDA含量(P＜0.01);上调Bcl-2蛋白(P＜0.01),下调Bax蛋白表达(P＜0.01);显著抑制尼氏小体的减少或消失(P＜0.01).且两者合用的作用明显优于单用.结论:黄芪甲苷与川芎嗪合用对大鼠脑缺血性损伤具有明显的保护作用.
关键词： 黄芪甲苷 川芎嗪 脑缺血再灌注 保护作用 大脑中动脉局灶性栓塞模型 -
中药复方愈溃胶囊质量标准研究
目的:建立中药复方愈溃胶囊的质量标准,控制制剂的质量.方法:用薄层色谱法对制剂中的当归、桂枝、浙贝母和黄连进行定性鉴别,用高效液相色谱法对制剂中的黄芪甲苷进行定量分析.结果:薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰；高效液相色谱方法精密度、稳定性、重现性、准确性良好,黄芪甲苷在0.138-6.880μg与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.5％,RSD 0.87％.结论:本研究建立的方法准确、稳定、可靠,可用于中药复方愈溃胶囊的质量控制.
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黄芪甲苷对宫颈癌细胞株放射敏感性的影响及相关机制
目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV)对宫颈癌细胞株Hela的放射敏感性影响并讨论其可能机制.方法:采用MTT法检测黄芪甲苷对Hela细胞生长的抑制作用,克隆形成实验和流式细胞术分别检测Hela细胞的放射敏感性和细胞周期,Tunel法检测Hela细胞凋亡能力,Western blot检测Hela细胞中p-EGFR、EGFR与p-Akt、Akt蛋白表达水平变化.结果:黄芪甲苷抑制Hela细胞的生长,且60 μg/mL时抑制作用大;60 μg/mL黄芪甲苷联合放射治疗后,Do和Dq值显著小于单独放射时的值,拟合的生存曲线左移,且降低放射诱导的细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡;黄芪甲苷可显著下调EGFR与Akt的磷酸化水平,EGFR与Akt总蛋白表达水平不变.结论:黄芪甲苷具有增加宫颈癌细胞株Hela放射敏感性的作用,可能与细胞周期G2/M期阻滞和DNA损伤修复蛋白表达水平降低有关.
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黄芪甲苷对关节不稳诱导型小鼠膝骨关节炎的保护作用
目的:观察黄芪甲苷能否缓解膝骨关节炎的病理改变.方法:将小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和黄芪甲苷组,实验组通过关节不稳术造成小鼠膝骨关节炎模型,并分别给予生理盐水和黄芪甲苷腹腔注射8周.取左侧膝关节进行三维重建和组织学染色.结果:模型组小鼠膝关节半月板钙化明显增加,关节软骨变薄,Ⅱ型胶原明显减少,破坏明显,边缘骨赘形成;黄芪甲苷组均有明显改善.结论:黄芪甲苷可以减轻关节不稳诱导的小鼠膝骨关节炎病理改变.
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HPLC法测定红芪中黄芪甲苷的含量
目的 建立用高效液相色谱法测定红芪中黄芪甲苷含量的检测方法.方法 以甲醇-水(68:32)为流动相,于200nm波长处,以外标法测定.结果 红芪中黄芪甲苷的量在3.704～14.816|ì g 范围内,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9994),平均回收率为98.83%.结论 本方法灵敏、准确、快速.
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骨宝丸质量标准研究
目的 为了更好地控制中药制剂的产品质量,建立骨宝丸的质量标准.方法 采用薄层色谱法对方中的黄芪、熟地黄、当归和川芎进行定性鉴定.结果 斑点清晰,专属性强,结果明显.结论 实验重复性强,结果易于判断,可以作为骨宝丸质量控制的标准.
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芪雪浸膏剂质量标准研究
目的 研究并建立芪雪浸膏剂的质量控制标准.方法 采用薄层色谱法对芪雪浸膏剂中的黄芪、当归、虎杖、大黄、进行定性鉴别;采用HPLC-ELSD法研究并建立芪雪浸膏剂中黄芪甲苷的含量测定方法.结果 处方中4味中药均能在薄层色谱中检出,分离效果好,斑点清晰,阴性未见干扰.黄芪甲苷进样量在2.5～25 μg范围内呈良好线性关系(r=0.999 2),平均回收率96.62％,RSD为1.42％(n=6).结论 建立的方法简便、可行、准确,可为芪雪浸膏剂质量标准的制定提供依据.
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HPLC法测定清肝颗粒中黄芪甲苷的含量
目的 建立清肝颗粒中黄芪甲苷的含量方法.方法 采用HPLC法,色谱柱:Agilent Hypersil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水(25∶75),检测波长:201nm,流速:1.0mLμmin-1,柱温:室温,进样量:10μL.结果 黄芪甲苷在0.0824～2.06μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系,r=0.9998;平均回收率为100.90%,RSD=1.92%(n=6).结论 该方法准确、重复性好,可用于清肝颗粒的质量控制.
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薄层扫描法测定珍芪降糖胶囊中黄芪甲苷的含量
珍芪降糖胶囊是由黄芪、黄连、玉竹、女贞子、金银花、生地、郁金、赤芍组成.由河南省食品药品监督管理局批准医疗机构生产的,当时质量标准主要是黄芪的显微鉴别.该制剂主要功能:益气养阴,生津止渴,凉血润燥.
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黄桂颗粒的质量标准研究
目的 建立黄桂颗粒的质量标准.方法 采用TLC对芍药苷、桂皮醛进行鉴别,采用HPLC测定黄芪甲苷的含量.结果 薄层色谱鉴别分离度好,专属性强;黄芪甲苷对照品在125～1000ng呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.9%,RSD为1.37%.结论 该法简单方便、准确,重现性好,可用于黄桂颗粒的质量控制.
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高效液相色谱法测定黄芪总皂苷氯化钠注射液中黄芪甲苷的含量
目的 建立以高效液相色谱法测定黄芪总皂苷氯化钠注射液中黄芪甲苷含量的方法.方法 色谱柱为Diamonsil C18(5 μm,4.6×250 mm),流动相为乙腈-水(36:64),流速为0.8ml/min,柱温为室温.结果 黄芪甲苷进样量在5μg～40μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9993,n=5),平均加样回收率为99.75%(RSD=0.57%).结论 本方法测定结果准确、操作简便、灵敏度高、重复性好,可用于本品的质量控制.
关键词： 高效液相色谱法 黄芪总皂苷氯化钠注射液 黄芪甲苷 含量 -
HPLC-ELSD测定益心健脾颗粒中黄芪甲苷的含量
目的 建立益心健脾颗粒HPLC-ELSD的含量测定方法.方法 采用ODS-C18,流动相为乙腈-水(35∶65),检测器为蒸发光散射检测器(漂移管温度60℃,雾化管温度60℃).结果 黄芪甲苷进样量在2.01～10.04μg范围内呈良好的线性r=0.9996,样品平均回收率为99.89%.RSD2.05%.结论 HPLC-ELSD测定益心健脾颗j虫中黄芪甲苷的含量,结果准确,可靠,可用于该制剂的质量控制.
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黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响
目的 观察黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响,并探讨其作用机理.方法 体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,Nestin 免疫细胞化学染色进行神经干细胞的鉴定,BrdU 标记鉴定增殖.采用稀释法检测黄芪甲苷高、中、低剂量组(6、0.6、0.06 μmol/L)对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.结果 Nestin 染色为阳性,BrdU 的增殖鉴定为阳性.与对照组相比,黄芪甲苷高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加.结论 黄芪甲苷能够明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用.
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黄芪甲苷对高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞表达致纤维化因子的影响
目的：观察黄芪甲苷对高糖腹膜透析液(PDS)诱导人腹膜间皮细胞(HPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨黄芪甲苷对致纤维化因子的调节作用。方法选用 HMrSV5细胞株,培养至第5代,随机分为对照组(10%FBS 培养液)、模型组(4.25%PDS 和10%FBS培养液)和黄芪甲苷低、中、高剂量组(含黄芪甲苷终浓度为10、20、40μg/mL的4.25%PDS和10%FBS培养液)。采用MTT法检测细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液TGF-β1、CTGF、VEGF水平。结果除5μg/mL浓度组外,HPMCs的活性均较空白组不同程度增强,以40、45、50μg/mL浓度组作用较显著(P＜0.05)；与空白组比较,模型组 TGF-β1、CTGF、VEGF 表达增加；与模型组比较,黄芪甲苷各组 TGF-β1、CTGF、VEGF表达明显减少,呈量效关系(P＜0.05)。结论黄芪甲苷通过减少高糖刺激下HPMCs TGF-β1、CTGF、VEGF表达,达到延缓腹膜纤维化的发展。
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黄芪甲苷对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的：观察黄芪甲苷对大鼠心肌细胞线粒体的保护作用及其抗心肌细胞凋亡的作用,探讨其治疗心力衰竭的机制。方法 SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型组、黄芪甲苷组和曲美他嗪组。皮下注射异丙肾上腺素复制心衰模型,黄芪甲苷组每日给予黄芪甲苷50 mg/kg灌胃,曲美他嗪组每日给予盐酸曲美他嗪10 mg/kg灌胃,连续3周。实验结束时留取各组大鼠心肌组织,应用倒置荧光显微镜测定心肌细胞线粒体膜电位(MMP),免疫印迹技术测定心肌细胞端粒酶反转录酶(TERT)的表达,流式细胞术测定心肌细胞凋亡情况。结果黄芪甲苷组心肌细胞MMP比值为3.226±0.371,显著高于模型组及曲美他嗪组(P＜0.01)。黄芪甲苷组心肌细胞凋亡率为8.91±2.12,显著低于模型组及曲美他嗪组(P＜0.01),且黄芪甲苷组TERT表达为明显。结论黄芪甲苷可保护受损心肌细胞线粒体,促进TERT的表达,抑制心肌细胞凋亡,保护心肌细胞。
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HPLC-ELSD测定养血益肾胶囊中黄芪甲苷的含量
目的建立养血益肾胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对天麻、淫羊藿、丹参进行定性鉴别。采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法对黄芪甲苷含量进行测定,Diamonsil C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水(33∶67)为流动相等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测器为蒸发光散射检测器,漂移管温度105℃,空气流速2.7 L/min。结果薄层色谱法得到的结果斑点清晰,重复性好。黄芪甲苷在进样量0.3970～5.9550μg范围内峰面积的自然对数与进样量的自然对数线性关系良好,r＝0.9999,平均加样回收率为102.0%,RSD＝1.5%(n＝6)。结论本方法简便快捷,适于该制剂的质量控制。
关键词： 养血益肾胶囊 黄芪甲苷 薄层色谱法 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 -
超滤和醇沉纯化当归补血口服液对比研究
目的：通过对比研究优化当归补血口服液的纯化方法。方法采用高效液相色谱法和苯酚硫酸法分别测定黄芪甲苷、总多糖含量，并以黄芪甲苷保留率、总多糖保留率及纯化后样品的澄明度为指标，比较超滤和醇沉纯化方法对当归补血口服液的影响，评价2种方法的优劣。结果采用超滤法纯化当归补血口服液，在黄芪甲苷、总多糖等有效成分保留及澄明度方面，均优于醇沉法。结论超滤法所得当归补血口服液的有效成分保留率高，澄明度高，品质好。
