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结缔组织生长因子与骨重建
结缔组织生长因子(CTGF)是即刻早期基因(CCN)家族的成员之一,早由Bradham等[1]在1991年用亲和色谱法从人脐静脉内皮细胞条件培养基中发现,研究表明,CTGF mRNA及其蛋白产物可在内皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、血管平滑肌细胞和成骨细胞等多种细胞中表达,在机体多种生物学过程,如胚胎发育、瘢痕组织、恶性肿瘤、软骨发生和诱导成骨细胞的分化、创伤愈合及促进多种细胞的黏附和运动等方面发挥着重要作用.
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基质金属蛋白酶与损伤后血管再狭窄
支架植入与经皮球囊血管成形术可以迅速扩张血管、改善缺血症状，但术后再狭窄的发生严重影响了手术效果。再狭窄是血管损伤后内膜增生和血管重塑的过程，其中血管平滑肌细胞的迁移、增殖和细胞外基质的重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因。金属基质蛋白（ MMPs ），作为重要的细胞外基质水解酶［1-2］，广泛参与调节血管重塑和细胞迁移过程，抑制MMPs活性可以显著抑制再狭窄的发生。
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骨桥蛋白在变态反应性疾病中的作用
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是早期在骨组织中发现的一种基质蛋白,具有调节钙离子浓度的作用[1] .后来发现OPN 还存在于肾、肺、肝、胰腺、膀胱及骨细胞、破骨细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、活化的T 细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和多种肿瘤细胞中,参与组织修复、肿瘤转移和炎症发生的过程.
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胰岛素样生长因子1的抗动脉粥样硬化机制研究
目的 观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对SD大鼠动脉粥样硬化病变处巨噬细胞、TNF-α 和血管平滑肌细胞的影响,以探讨其可能的抗动脉粥样硬化机制,为其临床应用提供理论依据和指导.方法 24只8周龄SD大鼠,随机分为模型组(12只)和IGF-1组(12只),分别测量体重、血压、血脂.IGF-1组予高脂饮食+腹腔注射IGF-11.0 ml(0.1 mg/ml),模型组予高脂饮食+皮下注射生理盐水1.0 ml,16周后再次测量体质量、血压、血脂,获取两组SD大鼠主动脉行病理分析:HE染色观察横切面动脉粥样硬化程度;免疫组化法半定量观察横切面斑块内TNF-α、巨噬细胞标志物CD68及血管平滑肌细胞标志物α-SMA各自光密度值(OD).两组间独立样本比较用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 与模型组相比,IGF-1组SD大鼠体质量、血压、血脂无显著差异(P>0.05),巨噬细胞标志物CD68及TNF-αOD值显著减少(巨噬细胞OD值:t=6.548,P<0.001;TNF-αOD值:t=6.628,P<0.001),血管平滑肌细胞标志物α-SMA的OD值显著增加(t=12.520,P<0.001).结论 IGF-1可能通过减少斑块内炎症及炎症因子水平、增加血管平滑肌细胞数量来发挥抗动脉粥样硬化作用.
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胰岛素样生长因子1对血管平滑肌细胞凋亡的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞制备炎症模型即条件培养基(CM),未加LPS诱导组为对照组即非条件培养基(nCM).体外培养血管平滑肌细胞,分别予nCM、CM、CM+IGF-160 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1120 ng/ml干预,用AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测平滑肌细胞凋亡率.结果 RAW264.7细胞分别在LPS 0 ng/ml,10 ng/ml,100 ng/ml,1μg/ml,10μg/ml刺激下各组上清液中IL-6的浓度分别为(6.75±0.12)pg/ml,(7.82±1.53)pg/ml,(44.09±1.58)pg/ml,(155.71.0±23.93)pg/ml,(436.59±3.15)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);nCM、CM、CM+IGF-160 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1120 ng/ml条件下血管平滑肌细胞的凋亡率分别为(4.89±0.09)%,(10.86±0.15)%,(9.64±0.65)%,(3.85±0.51)%,(4.82±0.08)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 炎症可促进平滑肌细胞凋亡,但给予IGF-1后可减少平滑肌细胞凋亡,本实验中IGF-1抑制平滑肌凋亡的适浓度为90 ng/ml.
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低频超声辐照联合微泡对血管平滑肌细胞凋亡的影响
目的 观察低频超声辐照联合微泡对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响.方法 联合不同浓度的SonoVue(0、0.5×106、1.0×106、1.5×106、2.0×106/mL),使用42.6 kHz超声分别辐照大鼠主动脉平滑肌细胞10 s、20 s、30 s,空白对照组不作任何处理.台盼蓝染色分析辐照后即刻细胞存活率,流氏细胞仪观察辐照后24 h细胞凋亡率.结果 细胞的死亡和凋亡与微泡浓度及辐照时间相关.当超声波在微泡浓度达到或超过0.5×106/mL,联合辐照30 s,以及微泡浓度达到2.0×106/mL,联合辐照10 s、20 s时,细胞大量死亡.在超声辐照10 s时,辐照后24 h细胞凋亡率随微泡浓度的增加而增加,但在微泡浓度低于1.0×106/mL时,细胞即刻存活率并无显著减少.在超声辐照20 s时,细胞即刻存活率随微泡浓度的增加而减少,辐照后24 h细胞凋亡率在微泡浓度为0.5×106/mL、1.0×106/mL、1.5×106/mL时差异无统计学意义.结论 在一定空化强度范围内,低频超声辐照后24 h细胞凋亡率随强度增加而增加,但超过一定程度,则无法增加细胞凋亡率,只会导致细胞死亡.低频超声辐照联合微泡的空化作用可在短时间内诱导体外培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡.
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7,8-二羟基黄酮对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响
目的 探讨7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响.方法 用Western blotting法检测清洁级雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠及SHR胸主动脉和VSMCs中平滑肌肌动蛋白(SM-α-actin)及增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平;用不同浓度7,8-DHF和(或)TrkB特异性抑制剂ANA-12处理SHR胸主动脉源性VSMCs,用CCK-8法检测VSMCs活性;用Western blotting法检测7,8-DHF和(或)ANA-12处理SHR胸主动脉源性VSMCs后SM-α-actin和PCNA的蛋白表达水平.使用Prism 5统计软件,应用独立样本t检验或单因素方差分析进行统计学分析.结果 同WKY大鼠比较,SHR胸主动脉组织中SM-α-actin的蛋白表达水平显著降低[(0.72±0.06),(0.41±0.08);t=6.35,P<0.05],PCNA的蛋白表达水平则明显升高[(0.51±0.09),(0.99±0.15);t=6.43,P<0.05].SHR胸主动脉源性VSMCs中SM-α-actin的蛋白表达水平较WKY大鼠显著降低[(0.71±0.05),(0.36±0.04);t=11.12,P<0.01],PCNA的蛋白表达水平则明显升高[(0.69±0.07),(1.05±0.08);t=8.49,P<0.05].7,8-DHF能明显抑制SHR胸主动脉源性VSMCs增殖活性,并呈浓度依赖性(F=17.49,P<0.01),给予ANA-12(10μmol/L)处理后,SHR胸主动脉源性VSMCs的增殖活性较单独给予7,8-DHF组显著升高[(0.52±0.08),(0.86±0.14);t=5.13,P<0.01];ANA-12能够显著消除7,8-DHF引起的SHR胸主动脉源性VSMCs中SM-α-actin蛋白表达水平的升高[(0.85±0.13),(0.35±0.15);t=4.37,P<0.01]及PCNA蛋白表达水平的降低[(0.42±0.13),(0.76±0.10);t=3.54,P<0.05].结论 7,8-DHF能够有效抑制SHR胸主动脉源性VSMCs由收缩型向增殖型转化,其作用可能是由TrkB受体介导.
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动脉钙化发生机制的研究进展
动脉钙化常见于动脉粥样硬化、糖尿病、老年人及慢性肾脏病患者,是导致心血管疾病发生发展和致死的重要原因.目前认为,动脉钙化是一种类似于骨形成的主动调控过程,其中血管平滑肌细胞(VSMCs)是动脉钙化的细胞学基础.然而,动脉钙化的确切机制尚不清楚,多种因素如C反应蛋白(CRP)、骨形成蛋白(BMPs)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)以及骨保护素(OPG)等都影响其进程.笔者简要综述了炎症、细胞因子和相关免疫与动脉钙化的关系.
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神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响
目的 应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31, Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2+]i浓度的影响.方法 用分散细胞培养法培养VSMC.用10 μmol/L的Fluo-3孵育细胞.使其与细胞内的游离[Ca2+]i相结合,从而能够在525 nm的激发光激发下产生荧光.分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6 mol/L[Leu31, Pro34 ]-NPY、1 μmol/L硝苯地平、10-6 mol/L[Leu31, Pro34 ]-NPY+1 μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像.用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2+]i荧光强度.结果 正常细胞外液灌流时[Ca2+]i变化不明显,高值为57.3±3.1,低值为53.7±2.9,无明显差异(P＞0.05). [Leu31, Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2+]i明显地升高,随后又开始下降.高值为86.4±2.7,低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P＜0.01).无钙细胞外液+[Leu31, Pro34 ]-NPY灌流VSMC时[Ca2+]i浓度变化不明显,高值为52.5±3.5,低值为48.0±1.2(P＞0.05);[Leu31, Pro34 ]-NPY+硝苯地平组[Ca2+]i变化不明显,高值为52.6±2.1,低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P＞0.05).硝苯地平组[Ca2+]i呈下降趋势,高值为52.8±2.2,低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P＜0.01).结论 NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2+]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2+]i由L型[Ca2+]i通道进入细胞的.
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降钙素基因相关肽调节平滑肌细胞表型改变对动脉损伤后新生内膜增生的作用
目的 通过降钙素基因相关肽(CGRP)干预体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)和体内颈动脉损伤大鼠模型,探讨其对VSMC表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖的影响.方法 取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMC,给予血小板源生长因子(PDGF,终浓度为2.0×10-8 mol/L)和(或)CGRP(终浓度为3.5×10-7 mol/L)处理,利用Western blot法检测细胞表型改变,噻唑蓝法和流式细胞仪检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移能力;同时建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组,通过HE染色观察新生内膜形成情况,Western blot法检测损伤动脉中VSMC表型改变和信号转导通路细胞外信号调节激酶(ERK)激活情况.结果 PDGF明显诱导体外培养的VSMC表型改变;而CGRP处理则显著抑制PDGF诱导的细胞表型转换,降低细胞增殖[48 h:CGRP组(0.20±0.03)×105比PDGF组(0.67±0.08)×10 5,P＜0.05;72 h:CGRP组(0.17±0.04)×105比PDGF组(1.42±0.11)×105比对照组(0.45±0.05)×105,P＜0.05]和迁移能力[24 h:CGRP组(2.12±0.21)％比PDGF组(5.04±0.52)％比对照组(4.87±0.44)％,P＜0.05;48 h:CGRP组(2.84±0.43)％比PDGF组(5.78±0.74)％比对照组(5.50±0.37)％,P＜0.05];CGRP降低新生内膜形成,伴随着损伤动脉中VSMC合成表型标志蛋白骨桥蛋白表达减少,并抑制细胞外信号激活途径ERK的激活.结论 CGRP可能通过抑制ERK1/2信号途径激活而调节VSMC表型,抑制细胞增殖和迁移,从而降低动脉损伤后新生内膜形成.
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肾上腺髓质素2调控血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖作用
目的 观察肾上腺髓质素2(ADM2)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法 采用培养的大鼠胸主动脉VSMCs,分为5组:对照组(n=6)、ADM2组(10~(-6)～10~(-6) mol/L,n=24)、AngⅡ组(10~(-7) mol/L,n=6)、Ang Ⅱ(10~(-7) mol/L)+ADM2(10~(-9)～10~(-6) mol/L)组(n=24)、ADM2受体拮抗剂(ADM 22-52或CGRP8-37)组(n=12).用胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法检测细胞DNA合成,噻唑兰比色法(MTT)观察VSMCs增殖,并加入受体拮抗剂后观察其促增殖作用.结果 不同浓度的ADM2对未经AngⅡ诱导的VSMCs呈剂量依赖性地促增殖作用(P＜0.01).ADM2(10~(-9)～10~(-6) mol/L)抑制Ang Ⅱ引起VSMCs的~3H-TdR掺入量的增加,与AngⅡ组比较,Ang Ⅱ+ADM2(10~(-9)～10~(-6) mol/L)组VSMCs的DNA合成抑制率分别为28%、32%、44%和52%(均P＜0.01).MTT结果显示,增殖抑制率分别为9%、14%、16%和20%(均P＜0.01).拮抗剂降钙素基因相关肽8-37(CGRP8-37)和ADM22-52消除了ADM2对AngⅡ增殖细胞作用的抑制.与不加拮抗剂相比,分别增高了34%和43%(P＜0.01).结论 ADM2可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖肥大的作用,从而完成其扩张血管、进而降低血压的作用.
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p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖
目的 研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况.用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p38MAPK的活性.结果 1)Ang Ⅱ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当Ang Ⅱ为10-7 mol/L、PDGF为10 ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[Ang Ⅱ组:(11 588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P＜0.05].p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7 mol/L)呈浓度依赖性地降低Ang Ⅱ、PDGF诱导的VSMC增殖活度.2)Ang Ⅱ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制.3者作用都呈剂量依赖性.结论 Ang Ⅱ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖.
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多巴胺D3受体在胰岛素样生长因子1介导的血管平滑肌细胞迁移中的作用
目的 研究多巴胺D3受体激动剂(PD128907)对胰岛素样生长因子1(IGF-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的抑制效应及其机制.方法 以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10)细胞为研究对象,观察PD128907对IGF-1促VSMC迁移作用的影响,采用微孔膜培养(transwell)方法测定细胞迁移状况,并检测PD128907对IGF-1促迁移中的一氧化氮/鸟苷酸环化酶(NO/cGMP)信号途径的影响.结果 5、30、50 μg/L浓度IGF-1能促进A10细胞迁移,迁移的效应随着IGF-1浓度增加而增强；PD128907(10-7 mmol/L) +IGF-1(50 μg/L)作用A10细胞后,可抑制IGF-1的促迁移作用[(35.0±6.9)比(83.0±10.0)/mm2,P＜0.05],抑制幅度为85％；这种抑制效果被一氧化氮合酶和鸟苷酸环化酶(cGMP)的抑制剂——左旋硝基精氨酸甲酯和1H-[1,2,4]恶二唑[4,3-a]喹喔啉-1-酮所阻断[(78.0±9.0)、(65.0±13.0)比(35.0±6.9)/mm2,P＜0.05].结论 多巴胺D3受体对IGF-1促VSMC迁移具有明显抑制效应,该作用与NO/cGMP信号途径有关.
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单核细胞微泡对人血管平滑肌细胞增殖的作用与机制
目的 研究单核细胞微泡对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用并探讨其可能的机制.方法 按照如下方法培养VSMC:给予未经脂多糖刺激的,通过多步差速离心法提取的人单核细胞系THP-1细胞微泡(微泡组);给予经脂多糖100 μg/L刺激的THP-1细胞来源的微泡[脂多糖刺激的微泡(LPS-Evs)组];给予可刺激VSMC增殖的去甲肾上腺素(NE)(NE组,作为阳性对照);给予与其他组等量的磷酸盐缓冲液(对照组).二辛可酸法测定微泡蛋白浓度.应用[3 H]-胸腺嘧啶核苷掺入法和细胞计数试剂盒-8检测VSMC增殖.Western blotting检测蛋白的表达与活性.结果 微泡组中,不同浓度的单核细胞微泡(1、5、15、25 mg/L)均可促进VSMC增殖,与VSMC共培养24 h后,微泡浓度15 mg/L时VSMC增殖较1、5 mg/L时增多(均P＜0.05),而25 mg/L时VSMC增殖幅度与15 mg/L时差异无统计学意义(P＞0.05).微泡浓度在15 mg/L时,微泡刺激24 h较6、12 h VSMC的增殖程度增强(均P＜0.05),而刺激48与24 h差异无统计学意义(P＞0.05).LPS-Evs组对VSMC增殖的促进作用较微泡组以及NE组更明显(P＜0.01).微泡刺激可诱导VSMC中细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶与p38的磷酸化,并上调c-fos与c-jun的表达,LPS-Evs的作用则更为明显.结论 单核细胞微泡可诱导VSMC的增殖,这种作用可能与丝裂原活化蛋白激酶信号通路的激活有关.
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核苷酸结合的寡聚结构域2激动剂与Toll样受体激动剂协同诱导血管平滑肌细胞合成促炎症细胞因子
目的 研究细胞内模式识别受体核苷酸结合的寡聚结构域(NOD)2受体在血管平滑肌细胞中的表达及其诱导血管平滑肌细胞产生促炎症细胞因子过程中的作用,并探讨它与Toll样受体(TLR)2、4在此过程中的相互关系.方法 体外培养人冠状动脉血管平滑肌细胞,用NOD2激动剂胞壁酰二肽(MDP)、TLR2激动剂(PAM3)和TLR4激动剂脂多糖(LPS)单独或联合进行刺激,用实时定量逆转录聚合酶链反应检测血管平滑肌细胞中NOD2和成纤维生长因子2mRNA的表达,用酶联免疫吸附法测定细胞培养物上清液中白介素8和肿瘤坏死因子α的浓度,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测血管平滑肌细胞增殖活性.结果 MDP能使血管平滑肌细胞中NOD2 mRNA的表达呈时间依赖性上调[0 h:(0.028±0.001);3 h:(0.045±0.002);6 h:(0.053±0.002);24 h:(0.162±0.013)],并能引起血管平滑肌细胞中成纤维生长因子2 mRNA的表达增加[MDP组:(9.3±0.4)vs对照组:(7.4±0.2);P＜0.05],细胞培养物上清液中白介素8[MDP组:(2.4±0.2)μg/L vs对照组:(1.0±0.1)μg/L;P＜0.05]和肿瘤坏死因子α[MDP组:(51.9±4.7)ng/L vs对照组:(29.4±3.7)ng/L;P＜0.05]的分泌增多和细胞增殖活性增加[(0.90±0.05 vs对照组:0.72±0.02;P＜0.05].MDP还能协同LPS、PAM3诱导血管平滑肌细胞增殖活性增加,细胞培养物上清液中自介素8和肿瘤坏死因子α的分泌增加.结论 NOD2使血管平滑肌细胞增殖活性增加,诱导其分泌促炎症细胞因子.NOD2与TLR2、4在促进血管平滑肌细胞增殖活性增加,诱导血管平滑肌细胞分泌促炎症细胞因子的过程中具有协同作用.
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去甲肾上腺素与哌唑嗪对高血压大鼠动脉平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性及mRNA表达的影响
目的 观察去甲肾上腺素(NE)及其α1肾上腺素能受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(Prazosin)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉血管平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性及mRNA表达的影响.方法 采用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术,观察不同浓度的NE和哌唑嗪对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性和mRNA表达的影响.结果 与SHR组比较,NE(10-7 mol/L)能减弱Na+-K+-ATPase活性(3.98±0.14 vs 7.92±0.19,P＜0.01)及Na+-K+-ATPase α1-亚单位mRNA的表达(0.863±0.057 vs 1.307±0.051,P＜0.01),单用哌唑嗪对Na+-K+-ATPase活性及mRNA的表达均无影响(P＞0.05).哌唑嗪(10-7,10-6,10-5 mol/L)呈剂量依赖性减弱和阻断NE(10-7mol/L)对Na+-K+-ATPase活性(4.31±0.24,6.15±0.30,7.52±0.31)及Na+-K+-ATPase α1-亚单位mRNA表达(0.857±0.041,1.096±0.055,1.183±0.059)的影响(P＜0.01,P＜0.05).结论 NE抑制SHR Na+-K+-ATPase活性和下调Na+-K+-ATPase α1-亚单位mRNA表达,可能是通过α1-AR途径介导基因转录的下调.肾上腺素能1型受体拮抗剂哌唑嗪可通过阻断α1-AR途径抑制NE对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞Na+-K+-ATPase活性和Na+-K+-ATPase α1-亚单位mRNA表达的影响.
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FIZZ1促使血管平滑肌细胞迁移的机制
目的 探讨FIZZ1对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的作用及其可能机制.方法 采用贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,分别用Boyden小室法、免疫荧光法和免疫印迹法评价不同浓度FIZZ1对VSMC迁移的作用、F-actin表达及Akt/Akt1的表达.结果 FIZZ1呈剂量依赖性地促进VSMC的迁移,促进F-actin和Akt1的表达,但对Akt表达无影响,预先加入PI3K抑制剂(Ly294002)可抑制FIZZ1诱导的VSMC迁移、F-actin和Akt1的表达,且呈剂量依赖趋势.结论 FIZZ1通过活化VSMC内PI3K/Akt通路,促进F-actin的表达,从而促进VSMC的跨膜迁移.
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D3多巴胺受体对α肾上腺素能受体介导的促动脉平滑肌细胞增殖作用的影响
目的 观察D3多巴胺受体对肾上腺素α受体介导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 用去甲肾上腺素(NE)刺激SD大鼠的VSMC,观察在D3受体激动剂(PD128907)存在的情况下,NE促增殖作用的变化,其中细胞增殖用3H-TdR掺入量表示.结果 NE通过肾上腺素α受体促进SD大鼠VSMC增殖,该作用呈现浓度依赖性关系.PD128907低浓度(10(-8)、10(-7) mol/L)对VSMC增殖无影响,但高浓度(10(-6)、10(-5) mol/L)却促进VSMC的增殖[PD128907 10(-6) mol/L=(4982±529)计数/min、PD128907 10(-5) mol/L=(5782±483)计数/min与对照=(3798±438)计数/min相比,P＜0.05],此作用可被α受体阻断剂酚妥拉明阻断.低浓度的PD128907(10(-7) mol/L)可通过D3受体减弱NE 10(-6) mol/L引起的VSMC增殖[NE 10(-6) mol/L=(6315±245)计数/min与NE 10(-6) mol/L+PD128907 10(-7) mol/L=(4898±286)计数/min相比,P＜0.05.结论 D3受体对NE所致的VSMC增殖具有抑制作用,该作用可能在高血压的发生、发展中发挥作用.
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富含半胱氨酸蛋白61 RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖
目的 观察富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 构建Cyr61 RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量.结果 测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0 01);pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低(P<0 01).结论 Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖.
关键词： RNA干扰 血管平滑肌细胞 富含半胱氨酸蛋白61 细胞增殖 基因转染 -
氧化低密度脂蛋白与转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞增殖和分化的不同作用
目的 骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗已经成为治疗心肌梗死的主要途径,但是MSC在体内微环境中是否会被诱导分化为其他细胞而产生副效应如加重再狭窄尚不十分清楚.实验模拟MSC与血管平滑肌细胞(VSMC)混合的微环境.探讨氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)和转化生长因子β1(TGFβ1)对共培养体系中MSC增殖和向平滑肌方向分化的影响.方法 建立MSC与VSMC直接共培养体系;利用24孔板进行细胞爬片的培养,MSC先行4,6联脒2苯基吲哚(DAPI)5μg/L标记,然后再与VSMC进行直接避光共培养,分别给予ox-LDL(5 mg/L)和TGFβ1(5μg/L)干预及10%胎牛血清DMEM培养液作为对照,5 d后终止实验,在相同放大倍数高倍视野下计数DAPI阳性细胞核数量,用免疫荧光法检测MSC平滑肌细胞质肌丝蛋白(α-SM-actin)的表达.结果 ox-LDL干预显著升高DAPI标记MSC数量[(115.7±23.1)比对照组[(68.3±25.0)/高倍视野,P<0.05],但MSC表达α-SM-actin的阳性率反而较对照组明显下降(13.5%比对照组26.6%,P<0.05);TGFβ1干预组作用相反,DAPI标记MSC阳性细胞核数量[(42.0±12.9)/高倍视野]较对照组[(68.3±25.0)/高倍视野]下降(P<0.05),而MSC α-SM-actin阳性率(40.7%)较对照组(26.6%)明显升高(P<0.05).结论 ox-LDL(5 mg/L)促进直接共培养体系中MSC增殖,但是抑制MSC向平滑肌方向分化,而TGFβ1(5μg/L)抑制MSC增殖,促进MSC向平滑肌方向分化.
