首页 > 文献资料
-
舒脉胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增生及NO、SOD、MDA的影响
目的:观察舒脉胶囊及其拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增生以及细胞培养上清液中一氧化氮(NO)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响.方法:组织贴块法进行血管平滑肌细胞培养,应用血清药理学的方法,Ang Ⅱ 10-7mol/L作为刺激因子,将药物血清分为舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组和补脾益肾拆方组,MTT比色法测OD值,生化试剂盒检测NO、SOD、MDA水平.结果:舒脉胶囊全方组和活血化瘀拆方组的OD值低于AngⅡ组和补脾益肾拆方组(P<0.01);AngⅡ组、补脾益肾拆方组NO和MDA量低于空白组、舒脉胶囊全方组和活血化瘀拆方组(P<0.01),而SOD水平高于上述3组(P<0.01).结论:舒脉胶囊具有抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖作用,并能促进NO和MDA的分泌,限制SOD的表达.而且舒脉胶囊全方和活血化瘀拆方作用更明显.
-
淫羊藿苷对动脉粥样硬化病灶血管平滑肌细胞葡萄糖调节蛋白78基因表达的影响
目的:差异筛选淫羊藿苷(icariin,ICA)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡相关基因葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78),观察其在动脉粥样硬化(athemsclerosis,AS)病灶中的表达情况,探讨ICA抗AS的可能机制.方法:建立同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度ICA共同培养48h后,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)筛选差异基因片段,克隆、鉴定、测序,组织原位杂交观察该基因在正常及AS病灶中的表达水平.结果:TUNEL法显示ICA组凋亡细胞数目明显增多;筛选出全长648bp的基因片断与兔GRP78基因高度同源,组织原位杂交显示该基因在AS病灶VSMC胞质中高表达.结论:GRP78基因参与AS病变形成,其表达上调可能是ICA诱导VSMC凋亡作用靶点之一.
-
丹蒌片调控ERS通路诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究
目的:观察丹蒌片对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖的血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡及内质网应激蛋白(BIP)表达的影响.方法:取第2-5代原代培养的大鼠腹主动脉VSMC,除空白组外,均加入10-4mol/L的HCY培养24h,经过免疫组化检验特异性标志蛋白α-SMA确认,建立大鼠增殖的VSMC模型.以加入药物不同分为空白组,HCY组、瑞舒伐他汀(可定)组、丹蒌片组、丹蒌片+可定组.其中可定组、丹蒌片组、丹蒌片+可定组分别加入相应的含药血清,继续培养48h,Annexin V-PI法检测细胞凋亡率,Western blotting检测BIP蛋白表达情况.结果:免疫组化中α-SMA表达呈阳性率超过98％,提示培养细胞为VSMC;HCY组凋亡率显著低于空白组(P＜0.01),与HCY组比较,可定组、丹蒌片组、丹蒌片+可定组可显著增强大鼠VSMC凋亡率(P＜0.01);Western blotting检测,与空白组比较,HCY组BIP表达升高(P＜0.01);与HCY组比较,可定组、丹蒌片组、丹蒌片+可定组细胞BIP蛋白表达水平明显上调(P＜0.05,P＜0.01),可定组、丹蒌片组、丹蒌片+可定组组间比较,BIP蛋白表达水平无明显差异.结论:丹蒌片通过上调BIP表达诱导VSMC凋亡.
-
解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响
目的:研究解毒活血益气方药物血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)增殖、脂质过氧化的影响.方法:首先建立颈动脉粥样硬化狭窄模型,运用球囊原位扩张和喂饲高脂饲料致经皮动脉腔内成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)后再狭窄模型,造模成功后给予含解毒活血益气组方和阳性对照药(普伐他汀、巴米尔)的饲料进行治疗4周,获取模型动物和给药动物血清;采用MTT法、黄嘌呤氧化酶法和MDA测试盒观察药物血清作用12、24h时,对VSMC增殖、总SOD活力和MDA含量的影响.结果:解毒活血益气方在不同时相均能显著抑制VSMC的增殖;解毒活血益气方显著降低MDA的含量和增加总SOD活力,并呈现出良好的时效性.结论:解毒活血益气方可能通过抑制VSMC增殖,对抗脂质过氧化损伤等机制,干预PTCA术后再狭窄.
-
川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖的分子机制研究
目的:观察川芎嗪注射液对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中增殖相关基因表达变化的影响,为探讨川芎嗪活血化瘀作用的分子机制提供实验依据.方法:采用贴块法培养VSMC,建立PDGF诱导的细胞增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的影响.采用Western blotting方法分别检测各组细胞中增殖相关基因AP-1及PCNA的表达变化及川芎嗪对它们的影响.结果:川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,与刺激组相比,川芎嗪可显著抑制增殖相关基因AP-1及PCNA的表达.结论:川芎嗪可能是通过抑制增殖相关基因的表达而发挥抗血管内膜增生的作用.
-
通脉宁胶囊对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖及相关因素的影响
目的:观察通脉宁全方及拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌增殖及相关因素的影响.方法:组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学方法,制备通脉宁全方、益气拆方、活血拆方三组药物血清;AngⅡ作为刺激因子.应用流式细胞仪检测VSMC周期,采用Fluo-3染色荧光探针标记测定钙离子荧光强度,检测NO含量及NOS酶活力.结果:通脉宁全方及拆方药物血清可明显降低VSMC的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比;减弱细胞内钙离子荧光强度;增加细胞培养液中NO含量及NOS酶活力.通脉宁全方作用优于益气拆方和活血拆方.结论:通脉宁药物血清抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖与部分阻断细胞内的信号转导途径、增加NO含量及NOS酶活力等因素有关.
-
沥水调脂胶囊对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的影响
目的:探讨沥水调脂胶囊抑制血管平滑肌细胞增殖的机制.方法:用消化法获取血管平滑肌细胞(VSMC),DMEM培养,以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清、弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)和vitE分组处理细胞,RT-PCR扩增c-jun、c-fos、c-myc,用凝胶成像分析仪分析琼脂糖电泳结果,与GAPDH对照进行半定量分析.结果:在处理后30min含药除蛋白血清和vitE对mox-LDL诱导VSMC c-fos、c-jun、c-myc mRNA表达均无明显影响,在1h、2h vitE组与对照组比较均有明显差异(P<0.05).含药除蛋白血清组c-myc、c-fos在1h、2h与对照组比较无明显差异,c-jun则明显降低(P<0.05),与vitE的作用不相同.结论:降低JNK/SAPK途径信号途径可能是沥水调脂胶囊抑制VSMC增殖的机制之一.
关键词： 健脾祛痰化瘀法 弱氧化型低密度脂蛋白 血管平滑肌细胞 增殖 机制 -
沥水调脂胶囊在体外对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨沥水调脂胶囊治疗动脉粥样硬化的作用机理和弱氧化型低密度脂蛋白在动脉粥样硬化由痰致瘀过程中的作用.方法:以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清和弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)处理血管平滑肌细胞(VSMC),用3H-TdR掺入法检测DNA合成率.结果:低浓度的除蛋白含药血清(5%、10%)在5、10μg/ml的nox-LDL处理VSMC细胞组中与对照组比较,差异均无显著性意义;高浓度除蛋白含药血清(20%)对两个不同浓度的mox-LDL诱导的VSMC增殖均有明显的抑制作用(抑制率分别为40%、42%,P<0.05);其作用方式与维生素E相似.结论:沥水调脂胶囊呈浓度依赖方式抑制mox-LDL诱导的VSMC增殖,其机制可能与该药的抗氧化作用有关,进一步提示氧化损伤是由痰致瘀过程中的关键环节,以及抗氧化可能是阻止由痰致瘀的主要手段.
关键词： 健脾祛痰化瘀法 弱氧化型低密度脂蛋白 血管平滑肌细胞 增殖 -
血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖效应的影响.方法 采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组:空白血清组,血府逐瘀胶囊含药血清组,血塞通胶囊含药血清组,3组分别+LPA组,卡托普利含药血清+LPA组.以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量.结果 空白血清+LPA组,血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组OD值升高(P＜0.05),S期指数升高(P＜0.01).血府逐瘀胶囊含药血清+LPA组、血塞通胶囊含药血清+LPA组较卡托普利含药血清+LPA组OD值降低(P＞0.05,P＜0.01);S期指数升高(P＜0.01,P＞0.05).结论 LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用,血塞通胶囊无促增殖作用.血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,血塞通胶囊作用更强.其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关.
-
动脉粥样硬化大鼠"痰瘀"病理演变与血管平滑肌细胞凋亡的相关性研究
目的探讨动脉粥样硬化模型大鼠随着造模时间的推移"痰瘀"演变规律.方法采用高脂饲料喂饲法复制大鼠动脉粥样硬化模型,用生化法及免疫组化法,根据造模时间先后动态检测血脂、血液流变学、血糖、胰岛素及血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡指标的变化.结果动脉粥样硬化大鼠由痰到瘀的变化,血脂、血液流变学、血糖、胰岛素及胰岛素敏感指数等指标均随病情加重而变化,细胞凋亡逐渐增加.结论细胞凋亡增加是动脉粥样硬化大鼠由痰致瘀终至痰瘀互结的必然结果.
-
小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究
目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制.方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos, c-myc, p15, p16, p18, p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[3H]TdR参入测定VSMC 的DNA合成.结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos, c-myc蛋白表达,但不影响p15, p16, p18, p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR参入.结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos, c-myc蛋白表达,而不是影响p15, p16, p18, p19蛋白表达来抑制VSMC增殖.
-
三七总皂苷对大鼠主动脉球囊损伤后血管内膜增生及PCNA表达的影响
目的:研究三七总皂苷(PNS)对大鼠主动脉球囊损伤后血管内膜增生及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,阐明其作用机制.方法:以2.0 F球囊导管建立大鼠主动脉内膜剥脱模型,随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷(100 mg·kg~(-1)组、阳性药阿托伐他汀(10 mg·kg~(-1))组.造模后第2天开始给药,连续给药14 d后取胸主动脉损伤段,以组织形态学和免疫组织化学方法测定血管形态计量指标及PCNA表达.结果:模型组的内膜面积、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均显著大于假手术组(P＜0.01).PNS组和阿托伐他汀组上述各指标均低于模型组(P＜0.05).模型组增生内膜中PCNA表达较假手术组显著增强(P＜0.01).PNS组、阿托伐他汀组PCNA表达均显著低于模型组(P＜0.01).结论:PNS可抑制血管内膜损伤后引起的血管内膜增生,其作用可能是通过抑制血管内膜损伤后血管平滑肌细胞增殖而实现的.
-
大黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:观察大黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制.方法:斑贴法培养大鼠主动脉VSMC,Ang Ⅱ刺激VSMC建立细胞增殖模型.采用MTT法检测细胞增殖,观察大黄素(10,20,40,80 μmol·L-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100 μmol·L-1)对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响.免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达;硝酸还原酶及化学比色法测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平.半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC iNOS mRNA的表达.结果:大黄素在10～80 μmol·L-1呈剂量及时间依赖性抑制VSMC增殖,但可被100 μmol·L-1的L-NAME部分抵消;大黄素能减少PCNA阳性细胞表达,升高NO,NOS,iNOS水平,增加iNOS mBNA的表达.结论:大黄素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有抑制作用,抑制VSMC PCNA的表达,上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制.
-
西红花苷对大鼠实验性高脂血症的影响及其机制研究
目的:观察西红花苷对实验性高脂血症的影响并探讨其作用机制.方法:采用高胆固醇饮食饲养SD大鼠2个月,造成高脂血症模型,观察西红花苷对大鼠血脂质的影响.此外体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC),以加高脂血清和加西红花苷等不同培养基分组培养,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)法检测平滑肌细胞活性,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化.结果:西红花苷能明显降低血胆固醇,甘油三酯、LDL含量,升高HDL及其亚型含量.西红花苷可明显抑制高脂血清培养下SMC的增殖,其吸光度低于造模组.高脂血清组磷酸化p38MAPK的表达有所增加,加入西红花苷后可显著降低p38MAPK的活化,并能逆转高脂血清诱导的SMC增殖.结论:西红花苷可有效地调整脂蛋白代谢,抑制SMC增殖,并通过抑制p38MAPK而使平滑肌细胞增殖减少,从而防治高脂血症、阻止动脉粥样硬化发生发展.
-
淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响
目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.
-
葛根素抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及c-fos和bcl-2蛋白表达
目的:观察葛根素对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对c-fos和bcl-2蛋白的表达作用,旨在认识葛根素作用的分子机制.方法:建立凝血酶(T)诱导VSMC增殖的模型,以细胞计数和流式细胞仪DNA含量测定、细胞周期分析法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响.T及葛根素等各处理因素作用24h后,用免疫印迹法(Western blot)检测c-fos蛋白和bcl-2蛋白表达.结果:T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且T在0.1～1.O U·L-1有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bcl-2蛋白的表达.结论:葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bcl-2蛋白表达有关.
-
三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:考察三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响,为评价三七的降血脂作用及其机制研究提供依据.方法:大鼠高脂血症模型给予不同剂量三七处理,2周后分离血清,分别以未处理组血清、各处理组血清刺激VSMC增殖,并采用MTT的测定A值,研究三七对高脂血清刺激的大鼠VSMC增殖的抑制作用.结果:与正常血清相比,高脂血清能显著促进VSMC的增殖(P＜0.05),而含三七的高脂血清对VSMC增殖的促进作用与高脂血清相比其作用明显减弱(P＜0.05).结论:三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,该法可为降脂药物体外研究提供借鉴.
-
葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,并探讨其机制.方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育,使用MTT法检测细胞活性,同时用Rt-PCR法检测Survivin, Bcl-xl, Bax, Gapdh mRNA的表达.结果:葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性,升高Bax/Gapdh/ Bcl-xl/Gapdh的比值.与葛根素组相比,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低,Bax/Gapdh/ Bcl-xl/Gapdh 比值较高.结论:与葛根素相比,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强.
-
水蛭通过p38MAPK信号通路对早期动脉粥样硬化大鼠VSMCs的影响
为了探究中药水蛭干预作用下p38MAPK信号转导通路对早期动脉粥样硬化(AS)大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖与凋亡的影响及其可能机制.实验通过生化分析仪检测中药水蛭对大鼠血脂(TG,TC,LDL-C,HDL-C)水平的调控;ELISA检测血清中TGF-β1的水平;免疫组织化学法(IHC)检测VSMCs的PCNA,Caspase-3表达水平;Western blot检测中药水蛭对VSMCs中MKK3,p38及C-myc蛋白表达的影响;HE染色观察大鼠胸主动脉形态变化.结果显示,中药水蛭可使TC,LDL-C明显降低,HDL-C升高,TGF-β1,PCNA的表达水平明显下降,Caspase-3表达上调,MKK3,p38及C-myc蛋白表达水平下降,以及抑制内膜增厚、减少斑块形成.以上结果表明中药水蛭可能通过调降血脂,降低TGF-β1水平,影响p38MAPK信号通路蛋白表达,从而抑制VSMCs的增殖、促进其凋亡,抑制内膜增厚、减少斑块形成等环节,进而干预早期AS进程.
关键词： 水蛭 动脉粥样硬化 p38MAPK信号通路 血管平滑肌细胞 增殖与凋亡 -
丹皮酚对脂多糖诱导损伤的与平滑肌细胞共培养的大鼠血管内皮细胞黏附功能的影响
目的:观察脂多糖(LPS)诱导的与平滑肌细胞(SMC)共培养的内皮细胞(VEC)与大鼠单核细胞黏附功能的改变及丹皮酚(paeonal,Pae)的干预作用.方法:组织块预消化贴壁法原代培养大鼠血管内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞;采用Transwell小室建立VEC-SMC共培养模型;采用LPS诱导VEC的损伤;MTT法和LDH法检测VEC活力;ELISA法检测VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平;免疫细胞化学法检测ICAM-1表达水平;孟加拉玫瑰红染色法检测VEC与单核细胞的黏附功能.结果:LPS诱导VEC损伤的质量浓度为100 μg·L-1,时间为7 h;Pae(15,30,60 μmol·L-1)对以上细胞模型作用24h可有效抑制LPS诱导的VEC损伤,显著提高LPS导致的VEC存活率的下降;降低损伤VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平,同时减少ICAM-1的表达;从而抑制LPS诱导的VEC与单核细胞的黏附.结论:Pae通过抑制IL-1β和TNF-α表达而保护VEC免受LPS的损伤,可以通过降低ICAM-1的表达水平达到抑制VEC与单核细胞的黏附的作用.
