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西红花苷对大鼠实验性高脂血症的影响及其机制研究
目的:观察西红花苷对实验性高脂血症的影响并探讨其作用机制.方法:采用高胆固醇饮食饲养SD大鼠2个月,造成高脂血症模型,观察西红花苷对大鼠血脂质的影响.此外体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC),以加高脂血清和加西红花苷等不同培养基分组培养,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)法检测平滑肌细胞活性,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化.结果:西红花苷能明显降低血胆固醇,甘油三酯、LDL含量,升高HDL及其亚型含量.西红花苷可明显抑制高脂血清培养下SMC的增殖,其吸光度低于造模组.高脂血清组磷酸化p38MAPK的表达有所增加,加入西红花苷后可显著降低p38MAPK的活化,并能逆转高脂血清诱导的SMC增殖.结论:西红花苷可有效地调整脂蛋白代谢,抑制SMC增殖,并通过抑制p38MAPK而使平滑肌细胞增殖减少,从而防治高脂血症、阻止动脉粥样硬化发生发展.
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虫草素对小鼠慢性哮喘模型支气管平滑肌收缩的作用及机制研究
目的 评价虫草素及虫草素与糖皮质激素联合应用对慢性哮喘模型小鼠气道平滑肌收缩的调节作用及可能机制.方法 将32只C57/BL6小鼠随机分成对照组和慢性哮喘模型组,利用肌动描记仪比较p38蛋白激酶抑制剂SB239063(10-6M)、虫草素(10-6M)以及糖皮质激素地塞米松(10-6M)单独或联合孵育前、后由乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)诱导的支气管收缩反应,同时应用蛋白印迹检测支气管组织中p38蛋白激酶和热休克蛋白27(heat shock proteins 27,HSP27)的磷酸化状态.结果 模型组小鼠的支气管收缩较对照组加重,有统计学意义.对照组和模型组p38蛋白激酶抑制剂SB239063孵育1 h后对Ach介导的收缩反应较空白对照组下降(P<0.05),地塞米松单独和地塞米松联合虫草素在模型组小鼠Ach诱导支气管平滑肌收缩力的作用均较对照组降低(P<0.05);地塞米松单独和地塞米松联合虫草素孵育后,对照组和模型组小鼠支气管组织p38蛋白激酶和HSP27磷酸化水平较Ach单纯作用组降低,而且在模型组,使用虫草素干预后p38蛋白激酶和HSP27磷酸化水平较Ach单纯作用组下降(P值均<0.05).结论 Ach诱导的离体支气管收缩反应具有良好的可重复性,卵清白蛋白吸入可导致Ach诱导的支气管收缩反应加重,糖皮质激素联合虫草素治疗较糖皮质激素单独治疗更有效抑制Ach诱导的气道平滑肌收缩,此种潜在的协同作用可能通过更大程度地抑制p38蛋白激酶信号通路为机制.
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地塞米松对哮喘小鼠气道炎症反应和外周血单核细胞p38MAPK表达的影响
目的:探讨支气管哮喘小鼠急性外周炎症反应和血单核细胞p38 MAPK表达的变化及地塞米松(DEX)对其的影响.方法:采用蛋白质印迹和ELISA方法检测PBMCs核蛋白p38MAPK的表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度.结果:哮喘组PBMCs核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较正常对照组显著升高(P＜0.01),DEX处理组核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-1、IL-6的蛋白质浓度较哮喘对照组显著降低(P＜0.01).通过直线相关分析发现,PBMCs核蛋白p38MAPK表达与培养上清液中IL-1、IL-6蛋白质含量之间均呈显著正相关(r分别=0.72、0.56,P＜0.01).结论:地塞米松可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症反应,作用机制可能是通过下调外周血单核细胞p38 MAPK过度表达,从而抑制依赖于p38 MAPK信号转到通路的急性气道炎症反应.
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增生性瘢痕中磷酸化丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达的变化
目的探讨磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化应激活化蛋白激酶(p-SAPK)和磷酸化P38MAPK(p-P38MAPK)在增生性瘢痕发生和成熟过程中蛋白表达的特征.方法用免疫组化方法和常规病理技术检测p-ERK1/2、p-SAPK和p-P38MAPK在16例增生性瘢痕和8例正常皮肤组织中的表达和分布规律.结果在正常皮肤中,p-ERK1/2、p-SAPK和p-P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞内,三种蛋白的阳性细胞率均较低.随着增生性瘢痕不断成熟,p-ERK1/2和p-SAPK表达逐渐增强.在成熟的增生性瘢痕中,这两种蛋白主要存在于表皮基底层细胞和部分成纤维细胞中,阳性细胞率分别为正常皮肤的1.8和1.7倍,蛋白表达明显升高(P<0.05).p-P38MAPK的阳性细胞率在生长活跃的增生性瘢痕中升至高,在成熟的瘢痕中虽有所下降,但仍明显高于正常皮肤(P<0.05),含有p-P38MAPK蛋白的细胞主要为表皮细胞和部分成纤维细胞.结论在增生性瘢痕中,p-ERK1/2、p-SAPK和p-P38MAPK蛋白表达均高于正常皮肤,提示这三种蛋白介导的信号传导通路可能参与了调控增生性瘢痕的发生和成熟.
关键词： 细胞外信号调节激酶1/2 应急活化蛋白激酶 p38蛋白激酶 增生性瘢痕 -
虫草素对小鼠慢性哮喘模型支气管平滑肌收缩的作用及机制研究
目的 评价虫草素及虫草素与糖皮质激素联合应用对慢性哮喘模型小鼠气道平滑肌收缩的调节作用及可能机制.方法 将32只C57/BL6小鼠随机分成对照组和慢性哮喘模型组,利用肌动描记仪比较p38蛋白激酶抑制剂SB239063(10-6M)、虫草素(10-6M)以及糖皮质激素地塞米松(10-6M)单独或联合孵育前、后由乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)诱导的支气管收缩反应,同时应用蛋白印迹检测支气管组织中p38蛋白激酶和热休克蛋白27(heat shock proteins 27,HSP27)的磷酸化状态.结果 模型组小鼠的支气管收缩较对照组加重,有统计学意义.对照组和模型组p38蛋白激酶抑制剂SB239063孵育1h后对Ach介导的收缩反应较空白对照组下降(P＜0.05),地塞米松单独和地塞米松联合虫草素在模型组小鼠Ach诱导支气管平滑肌收缩力的作用均较对照组降低(P＜0.05)；地塞米松单独和地塞米松联合虫草素孵育后,对照组和模型组小鼠支气管组织p38蛋白激酶和HSP27磷酸化水平较Ach单纯作用组降低,而且在模型组,使用虫草素干预后p38蛋白激酶和HSP27磷酸化水平较Ach单纯作用组下降(P值均＜0.05).结论 Ach诱导的离体支气管收缩反应具有良好的可重复性,卵清白蛋白吸入可导致Ach诱导的支气管收缩反应加重,糖皮质激素联合虫草素治疗较糖皮质激素单独治疗更有效抑制Ach诱导的气道平滑肌收缩,此种潜在的协同作用可能通过更大程度地抑制p38蛋白激酶信号通路为机制.
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p38蛋白激酶对耐药K562细胞株上p-糖蛋白表达的影响
目的:研究p38蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路抑制剂SB202190对体外培养的K562/多柔比星(Dox)耐药细胞表达P-糖蛋白(PGP)的影响.方法:建立PGP高表达的K562/Dox耐药细胞株为对照组.在K562/Dox细胞中加入SB202190为实验组.采用免疫组化学、Western blot和RT-PCR技术检测两组细胞PGP的表达情况;采用四甲基偶氮唑盐法比较两组对苯妥英纳的耐药性.结果:相对于K562/Dox细胞组,给予SB202190后K562/Dox细胞表达PGP水平降低(P<0.01),苯妥英纳对K562/Dox细胞株的半数抑制浓度(IC50)明显高于K562细胞株;加入SB202190后,苯妥英纳对K562/Dox细胞的IC50明显下降,逆转倍数为2.62.结论:p38MAPK抑制剂SB202190可以抑制PGP的表达,逆转K562/Dox细胞对苯妥英纳的耐药,p38MAPK信号传导途径参与了PGP介导的多药耐药.
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p38蛋白激酶信号通路对支气管哮喘小鼠骨髓CD34+祖细胞迁移的调控作用
目的:探讨p38蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对哮喘小鼠骨髓CD34+祖细胞迁移的调控作用.方法:将小鼠随机分为3组:模型组[卵白蛋白(ovalbumin,OVA)组]、吡啶咪唑类衍生物干预组(SB203580组)、对照组(NS组),每组20只.前两组以OVA致敏和激发建立哮喘模型,其中SB203580组于抗原激发前经腹腔注射SB203580.于后一次抗原激发后48 h,留取骨髓悬液、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及外周血,分别行细胞计数、流式细胞仪分析及细胞涂片.留取肺组织制备组织切片.体外趋化实验检测各骨髓CD34+祖细胞对eotaxin的趋化反应和Western Blot检测骨髓CD34祖细胞上磷酸p38MAPK蛋白的表达.结果:OVA组小鼠BALF、外周血中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)数及CD34+细胞数较NS组明显增加,而骨髓中CD34+细胞数较NS组无明显变化(P＞0.0S),体外趋化实验表明OVA组小鼠骨髓CD34+祖细胞对eotaxin趋化反应明显增强,与NS组相比差异有统计学意义(P＜0.01),Western Blot显示OVA组小鼠骨髓中CD34+祖细胞上磷酸化p38MAPK蛋白的表达明显高于NS组(P＜0.01);SB203580组上述指标较OVA组明显降低(P＜0.01),肺组织Eos浸润及黏液高分泌亦较OVA组明显减轻.结论:通过SB203580抑制p38MAPK的活性可以降低哮喘小鼠骨髓中CD34+祖细胞的迁移,从而抑制气道嗜酸性粒细胞炎症,为哮喘的防治提供新视角.
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格尔德霉素对脑缺血／再灌注神经损伤保护作用的机制研究
目的：探讨格尔德霉素在大鼠脑缺血／再灌注神经损伤保护中的分子机制。方法清洁级SD大鼠，建立四动脉结扎法大鼠脑缺血模型。 SD大鼠随机分组，每组6只：① Sham组，仅手术，不进行缺血／再灌注；②脑缺血／再灌注6 h组（ I／R组）；③溶剂对照组（ D＋I／R组），缺血前20 min溶剂20μl／kg脑室注射；④格尔德霉素组（ G＋I／R组），缺血前20 min格尔德霉素20μl／kg脑室注射。采用免疫组化和免疫印迹技术检测格尔德霉素对脑缺血／再灌注后HSP90的表达和P38蛋白激酶的磷酸化水平。结果再灌注6 h的格尔德霉素组HSP90的蛋白表达量和P38的磷酸化水平与I／R组相比较显著降低（ P＜0．05）。结论格尔德霉素通过抑制HSP90的表达及P38蛋白激酶的磷酸化发挥缺血／再灌注脑损伤保护作用。
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p38蛋白激酶在诱导凋亡前后胃癌组织中的表达及意义
目的 探索p38蛋白激酶在胃癌组织中的表达及其意义,以及其在术前诱导化疗中的作用.方法 对30例进展期胃癌患者术前进行新辅助化疗2个周期,采用免疫组织化学SP法检测30例未行术前化疗患者(未化疗组)和30例术前行新辅助化疗患者(化疗组)的胃癌组织、癌旁组织标本中p38蛋白激酶的表达情况.结果 未化疗组胃癌组织中p38蛋白激酶表达高于癌旁组织;Ⅳ期及Ⅱ、Ⅲ期胃癌组织中p38蛋白激酶表达高于Ⅰ期胃癌组织.化疗组Ⅳ期胃癌组织中p38蛋白激酶表达与Ⅱ～Ⅲ期胃癌组织中的表达差异有显著性(P<0.01).结论 p38蛋白激酶表达水平与胃癌的分期相关;术前化疗诱导凋亡后胃癌组织中p38蛋白激酶表达下降.p38蛋白激酶表达水平与胃癌的发生、发展和转移密切相关;p38蛋白激酶参与了胃癌细胞的诱导凋亡.
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特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子变化的影响
目的:探讨特异性p38蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子(IFN-γ/IL-4)变化的影响.方法:BALB/c小鼠30只随机分成3组:正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ含量,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变.结果:与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4水平升高而IFN-γ水平降低(P＜0.01);与哮喘模型组比较,SB203580干预组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4水平明显降低,IFN-γ水平明显上升(P＜0.01),肺组织病理学改变显著减轻.结论:SB203580能抑制哮喘小鼠的气道炎症反应,纠正IFN-γ/IL-4平衡的失调.
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p38蛋白激酶抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响
目的观察特异性p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对哮喘小鼠气道炎症和Th2类细胞因子的影响.方法 BALB/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和SB203580干预组.通过原位分子杂交和酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-4、IL-5 mRNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL-4、IL-5)含量的变化,并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变.结果哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞计数和IL-4、IL-5含量以及肺组织IL-4、IL-5mRNA的表达较正常对照组明显升高,差异具有显著性(P<0.01);SB203580干预组小鼠上述指标较哮喘模型组小鼠明显降低,差异亦具有显著性(P<0.01),肺组织病理学改变明显减轻.结论 SB203580能降低气道炎症细胞的聚集和炎症介质的表达.抑制p38 MAPK的活性可能成为哮喘治疗的新途径.
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NAC和地塞米松对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶的影响
目的观察脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞(AM)p38蛋白激酶活化及抗炎药物地塞米松(DEX)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响.方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组、LPS刺激组、DEX或NAC干预组,共4组.分别采用Western印迹和放射免疫分析法检测AM核提取物p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF-α、IL-8含量.结果 LPS刺激组核蛋白提取物p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF-α、IL-8含量较正常对照组升高(P<0.01).DEX组和NAC组虽较正常对照组高,但均低于LPS刺激组(P<0.01).核提取物p38蛋白激酶和细胞培养上清TNF-α、IL-8含量之间分别呈正相关(r=0.754、0.625,P<0.01).结论 LPS诱导肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶活化,进而导致TNF-α、IL-8表达增多;DEX和NAC可能通过抑制p38活化而减少炎性介质TNF-α、IL-8的释放.
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细菌脂多糖对体外培养大鼠中性粒细胞P38和 JNK蛋白激酶表达的影响
目的:观察体外培养大鼠中性粒细胞经细菌脂多糖(LPS)刺激后P38蛋白激酶和JNK 蛋白激酶的变化,并探讨其调节作用.方法:抽取SD大鼠外周血分离培养中性粒细胞,随机分为5组:对照组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组,除对照组外各组分别加入1 mg/L LPS,刺激后制成细胞涂片,以免疫细胞化学法检测P38蛋白激酶和JNK蛋白激酶的表达.结果:LPS刺激后,P38蛋白激酶和JNK蛋白激酶表达均增加(P<0.05或0.01).P38蛋白激酶60 min组达到高峰,JNK蛋白激酶30 min组达到高峰,与其他时点相比差异均有统计学意义(P均<0.05).结论:LPS刺激体外培养的中性粒细胞可以引起P38、JNK蛋白激酶的变化,且JNK蛋白激酶变化更加迅速.
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p38蛋白激酶信号通路对骨桥蛋白介导的三阴性乳腺癌细胞自噬、凋亡活性的影响
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)和自噬相关蛋白Beclin 1在三阴性乳腺癌组织中的表达及OPN下调对p38蛋白激酶(p38MAPK)、Beclin 1表达及乳腺癌细胞自噬、凋亡活性的影响.方法 选取2015年1月至2016年12月南阳市中心医院收治的60例女性三阴性乳腺癌患者的癌组织标本为研究对象,另选取同期手术治疗的40例女性乳腺纤维腺瘤或乳腺增生结节患者的正常乳腺组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测三阴性乳腺癌组织和正常乳腺组织中OPN和Beclin 1的表达.将MDA-MB-231细胞株分为特异性OPN小干扰RNA (siRNA)实验组(OPN-siRNA组)、非同源阴性CON-siRNA对照组(CON-siRNA组)和mock空白对照组(mock组);以慢病毒介导基因干扰技术制备OPN低表达MDA-MB-231细胞模型,应用透射电镜及流式细胞术检测OPN下调后细胞自噬体形成和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测OPN下调后p38MAPK及Beclin 1的表达.结果 OPN蛋白在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的阳性表达率分别为68.3％ (41/60)和12.5％ (5/40),OPN蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率高于正常乳腺组织(x2=56.881,P=0.000);Beclin 1蛋白在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的阳性表达率分别为18.3％ (11/60)和42.5％ (17/40),Beclin 1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率低于正常乳腺组织(x2=54.692,P =0.000);三阴性乳腺癌组织中OPN蛋白表达与Beclin 1蛋白表达呈负相关(r=-0.713,P=0.003).病毒转染48 h后,OPN-siRNA组细胞中OPN mRNA和蛋白相对表达量显著低于CON-siRNA组和mock组(F =57.170、50.410,P=0.001).OPN表达下调后,OPN-siRNA组细胞中自噬体个数、早期凋亡率显著高于CON-siRNA组和mock组(F=17.590,P=0.004;F =23.180,P=0.003);OPN-siRNA组细胞中Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于CON-siRNA组和mock组(F =29.873、32.174,P=0.001),p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量低于mock组和CON-siRNA组(F=32.735、37.110,P=0.000);mock组与CON-siRNA组细胞中自噬体个数、早期凋亡率、Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达量及p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制OPN表达可促进三阴性乳腺癌细胞自噬和凋亡活性,其作用机制可能与p38MAPK表达下调、Beclin 1表达上调有关.
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P38蛋白激酶抑制剂SB203580对哮喘小鼠肥大细胞活化的影响
目的:探讨P38蛋白激酶抑制剂SB203580对哮喘小鼠肥大细胞活化的作用.方法:将BALB/c小鼠30只随机分为3组,即对照组、哮喘组、SB203580干预组,每组10只.哮喘组、SB203580干预组分别予以鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发.每次激发前1 h,SB203580干预组予以SB203580(5 mg/kg)腹腔注射,对照组与哮喘组给予等量的生理盐水腹腔注射.于末次激发24 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF),离心后进行细胞学分析.HE染色观察肺组织病理变化,免疫组织化学染色观察肥大细胞类胰蛋白酶(Tryptase)阳性表达.结果:与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中炎症细胞数和肺组织Tryptase阳性表达[平均光密度(MOD)值0.239±0.011]升高(P＜0.01);与哮喘组比较,SB203580干预组小鼠BALF中炎症细胞数和肺组织Tryptase阳性表达(MOD值0.195±0.005)降低(P＜0.01),肺组织病理学改变减轻.结论:抑制P38蛋白激酶的活性可能对抑制哮喘小鼠肺组织肥大细胞募集和活化有一定的作用.
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P38蛋白激酶和核因子κB对大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶表达的调控
目的探讨P38蛋白激酶和核因子κB(NF-κB)在脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达过程中的调控作用. 方法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组,LPS刺激组,P38蛋白激酶抑制剂SB203580干预组(SB203580+LPS组).分别采用免疫组织化学、RT-PCR、Western blot及Griess方法检测NF-κB、iNOS mRNA、核蛋白P38的表达以及培养上清NO含量.结果 LPS刺激组核蛋白P38、胞核NF-κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA的表达以及培养上清NO含量均较正常对照组显著升高(P<0.01);加入SB203580干预后上述指标均显著降低,与LPS刺激组相比差异均具有极显著性意义(P<0.01).核蛋白P38的表达与胞核NF-κB染色阳性细胞百分比、iNOS mRNA以及培养上清NO含量均呈显著正相关(r=0.862,0.569,0.715,均 P<0.01),胞核NF-κB染色阳性细胞百分比与iNOS mRNA的表达以及NO的产生亦呈显著正相关(r=0.653,0.597,均P<0.01).结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞P38活化可上调胞核NF-κB、iNOS mRNA和NO的表达;NF-κB可能是P38信号途径下游的重要位点之一.
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P38蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶-2mRNA表达的影响
目的探讨P38蛋白激酶对肺泡巨噬细胞环氧合酶-2 mRNA表达的影响.方法采用蛋白质印迹、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫分析法检测脂多糖(LPS)刺激的肺泡巨噬细胞(AM)核提取物P38蛋白激酶、环氧合酶-2(COX-2)mRNA及细胞培养上清血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的变化,并观察特异性P38蛋白激酶抑制剂SB203580对LPS作用的影响.结果 LPS能显著刺激肺泡巨噬细胞P38蛋白激酶活化,COX-2 mRNA及细胞培养上清TXB2和6-Keto-PGF1α含量随之增加(P＜0.01);SB203580能显著抑制上述作用;P38蛋白激酶的活化与COX-2 mRNA及细胞培养上清TXB2和6-Keto-PGF1α含量之间呈显著正相关(r＝0.862,0.569,o.715,均为P＜0.01).结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞P38蛋白激酶活化可能参与了对COX-2 mRNA及其炎症介质的调控.
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p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控
目的 探讨p38蛋白激酶对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制.方法 分离培养肺泡巨噬细胞.设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)+LPS组、PDTC(NF-κB抑制剂)+LPS组和SB203580+PDTC+LPS组.分别采用免疫细胞化学(SP法)和Western blot检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB抑制蛋白(I-κB)的表达.结果 与正常对照组相比,LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,而I-κB的表达显著降低(均P＜0.01).SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB,p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比,并显著增强I-κB的表达(均P＜0.05).同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞,与LPS刺激组相比,p38蛋白激酶和NF-κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低(P＜0.05),I-κB的表达显著增强(P＜0.05),但分别与SB203580+LPS和PDTC+LPS组相比,差异均无显著性意义(均P＞0.05).结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF-κB活化;p38蛋白激酶可能通过调节I-kB降解而调控NF-kB的活化,NF-κB可能是p38信号途径下游的重要位点.
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地塞米松对哮喘患者外周血单个核细胞p38MAPK表达的影响
目的探讨支气管哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs)p38MAPK表达的变化及地塞米松(DEX)对其的影响.方法分离培养哮喘患者和正常健康者的PBMCs.分别采用蛋白质印迹和ELISA方法检测PBMCs核蛋白p38MAPK的表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度.结果哮喘对照组PBMCs核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度较正常对照组显著升高(P<0.001),DEX处理组核蛋白p38MAPK表达及细胞上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度较哮喘对照组显著降低(P<0.01).通过直线相关分析发现,PBMCs核蛋白p38MAPK表达与培养上清液中IL-4、IL-5蛋白质含量之间均呈显著正相关(r分别=0.71、0.64,P均<0.01).结论 p38MAPK可能参与支气管哮喘的病理生理过程.DEX可能通过作用于p38MAPK这一靶点发挥其抗炎效应.
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黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38 MAPK表达的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化以及黄芪对其之影响.方法 静脉注射LPS复制大鼠ALI模型.随机分成3组:正常对照组、ALI组和黄芪组.采用蛋白质印迹检测肺组织磷酸化p38 MAPK的表达,并观察大鼠动脉血氧分压(PaO2)、肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白、血清TNF-α的变化以及肺组织病理学改变.结果 LPS诱导大鼠ALI时肺组织磷酸化p38 MAPK的表达较正常对照组显著增加(P<0.01).黄芪注射液可显著抑制大鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达,降低W/D、BALF白蛋白以及血清TNF-α含量,使下降的PaO2回升,减轻肺组织病理学损伤.结论 ALI时肺组织p38 MAPK磷酸化表达增加;黄芪注射液对内毒素性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制磷酸化p38 MAPK的表达有关.
