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淫羊藿苷通过影响MAPK信号通路抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖作用研究
研究淫羊藿苷(ICA)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,以及对增殖细胞核抗原(PCNA)表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.以ox-LDL(50 mg·L-1)诱导VSMC增殖,采用MTT法检测ICA对ox-LDL诱导VSMC增殖的抑制作用;Real-time PCR和Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内细胞周期相关蛋白PCNA基因及蛋白表达的影响;Western blot方法检测ICA对ox-LDL诱导增殖VSMC内p38MAPK,ERK1/2,JNK信号通路相关信号蛋白磷酸化的影响.结果显示,经ox-LDL(50 mg·L-)刺激后,VSMC增殖活性显著增强,细胞存活率显著提升,S期、G2/M期细胞显著增加,G0/G1期细胞显著减少;同时,PCNA基因及蛋白表达水平显著提升;不同浓度的ICA(40,20,10 μmol·L-)可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,减少S期、G2/M期细胞,增加G0/G1期细胞,降低ox-LDL诱导的PCNA基因及蛋白的表达水平,下调ox-LDL诱导的p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达,但不影响p-JNK蛋白的表达.上述结果表明,ICA对ox-LDL诱导的VSMC增殖具有抑制作用,可能通过降低PCNA表达和阻断p38MAPK和ERK1/2信号通路抑制VSMC增殖.
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丹皮酚通过抑制PI3K/AKT-NF-κB通路对LPS诱导的与平滑肌细胞共培养的大鼠血管内皮细胞的保护作用
该研究为观察丹皮酚(Pae)对脂多糖(LPS)诱导的与平滑肌细胞(SMC)共培养内皮细胞(VEC)的保护作用以及对磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,AKT)/核因子κB(nucler factor-kappa B,NF-κB)信号通路的影响.采用组织块预消化贴壁法原代培养大鼠血管内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞;用Tran-swell小室建立VEC-SMC共培养模型;LPS(100 μg· L-1,7h)诱导VEC损伤;MTT法检测VEC活性;LDH试剂盒检测细胞通透性;Western blot法检测Pae(15,30,60 μmol·L-,24 h)对LPS诱导损伤的共培养VEC的PI3K/AKT及NF-κB信号通路的表达;Western blot法检测VEC的细胞核p-P65表达的影响.研究证实不同浓度的Pae可显著性抑制LPS诱导的VEC损伤,提高细胞活性;并且Pae能够明显下调LPS诱导的PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT的表达;下调NF-κB的表达水平并降低P65蛋白的生物活性,下调p-P65蛋白的表达;下调P65的转移入核.Pae对LPS损伤的VEC有保护作用,可能通过抑制H3K/AKT及NF-κB信号通路相关信号蛋白的表达.
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大蒜素抑制胰岛素诱发血管平滑肌细胞增殖和迁移实验研究
目的:探讨大蒜素(alliein)抑制胰岛素(insulin)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移及其作用机制.方法:采用组织贴块法培养大鼠的VSMCs,并进行平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光鉴定,取3～5代细胞进行实验.建立胰岛素刺激的VSMCs模型.实验分5组:对照组、胰岛素组、大蒜素组、ERK抑制剂PD98059组、大蒜素+PD98059组.噻唑蓝(CCK8)比色法检测VSMCs的增殖;细胞计数法检测VSMCs的迁移;免疫印迹实验(Western blotting)测定total ERK,Phospho-ERK(p-ERK),PCNA蛋白表达的情况.结果:原代培养的VSMCs生长良好,光镜下呈长梭形及“峰与谷”样生长.α-SMA免疫荧光显示培养的细胞具有典型的VSMCs特征.胰岛素能刺激VSMCs的增殖和迁移,且以100 nmol·L-1浓度时效果明显.大蒜素预处理能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移,且呈剂量依赖性.PD98059、大蒜素+PD98059预处理亦能显著抑制胰岛素刺激的VSMCs的增殖和迁移.胰岛素可明显促进VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白.大蒜素能显著抑制VSMCs表达p-ERK,PCNA蛋白,且呈剂量依赖性.结论:大蒜素能显著抑制胰岛素诱导的VSMCs的增殖与迁移,其作用机制可能是抑制ERK信号通路的激活.
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大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖的研究进展
大黄素(emodin)具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等多种药理作用,同时大黄素也能抑制血管平滑肌细胞的增殖.国内外的多项研究都已证实大黄素能明显抑制血管平滑肌细胞的增殖,抑制细胞的迁移,促进细胞凋亡,并从多个方面对其进行了相关机制的探讨.同时,结合临床的转化性研究和应用探索也已展开.现就大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖的研究进展做一综述.
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糖尿病中血管平滑肌细胞表型转化机制及中医药干预
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的增殖和迁移是动脉粥样硬化斑块形成、高血压等糖尿病血管并发症的共同病理特征,而VSMC表型转化是VSMC增殖和迁移的基础,因此研究糖尿病中VSMC表型调节及机制,对防治糖尿病血管并发症具有重要意义.该文拟介绍VSMC表型转化机制及糖尿病中VSMC表型的改变,并综述中药复方及单体干预VSMC表型转化的研究进展,为糖尿病血管并发症的中医药防治提供参考.
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大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的 探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制.方法 采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、1 00、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20 μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20 μmol/L(Allicin+ SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制.结果 与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P ＜0.05,P＜0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P＜0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P ＜0.05,P＜0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20 μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P＜0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P ＜0.01,P＜0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.01).结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖.
关键词： PM2.5 大蒜素 p38 MAPK信号通路 血管平滑肌细胞 -
川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖及胶原合成的作用机制研究
目的 研究川芎嗪抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的作用机制,为中药有效预防血管再狭窄提供实验依据.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为:阴性对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组(AngⅡ10-6 mol/L)、低剂量组(川芎嗪20 μmol/L加AngⅡ]、中剂量组(川芎嗪40 μmol/L加AngⅡ)及高剂量组(川芎嗪80 μmol/L加AngⅡ).MTT法检测细胞增殖率;Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测Wnt通路相关蛋白Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1及胶原Ⅰ(ColⅠ)、胶原Ⅲ(ColⅢ)蛋白、基因表达.结果 与阴性对照组比较,AngⅡ组细胞增殖率明显升高(P <0.05).与AngⅡ组比较,中、高剂量组细胞增殖率明显降低(P <0.05).与阴性对照组比较,AngⅡ组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显上调(P <0.05).与AngⅡ组比较,中、高剂量组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显下调(P <0.05).上述指标在低、中、高剂量组均具有浓度依赖性.结论 川芎嗪通过下调Wnt信号通路在一定程度上抑制了AngⅡ诱导的VSMCs的增殖及胶原分泌.
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平肝潜阳方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及DNA甲基化水平的影响
目的 观察平肝潜阳方对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的抑制作用及DNA甲基化水平的影响.方法 采用组织贴块法培养VSMCs,制备平肝潜阳方含药血清.将培养细胞分为正常组(原代培育的VSMCs)、模型组、叶酸组及平肝潜阳方组(下称中药组).以AngⅡ作为诱导复制VSMCs增殖及迁移模型,在AngⅡ诱导VSMCs培育24 h后,叶酸组加入40μg/m L叶酸干预48 h,中药组加入5％中药血清干预48 h.采用CCK-8(Cell Counting Kit)试剂盒绘制VSMCs生长曲线,MTT法测定VSMCs增殖活性,体外细胞划痕实验检测细胞迁移情况,以抗5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化水平;Real-time q-PCR方法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平.结果 AngⅡ在10-6 mol/L浓度下诱导24 h后可促进VSMCs生长.与正常组比较,模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加,DNA甲基化水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs生长、细胞增殖活性及迁移数量均明显降低,DNA甲基化水平升高(P＜ 0.05,P＜0.01);与正常组比较,模型组VSMCs DNMT1 mRNA表达水平降低(P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs DNMT1 mRNA表达明显增强(P＜0.01).结论 平肝潜阳方可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,可导致基因组DNA高甲基化,其DNA甲基化水平改变可能与DNMT1表达有关.
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丹参对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响
目的:探讨丹参(SAL)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶(MMP)和骨桥蛋白(OPN)基因表达的影响,以提示SAL抑制VSMC增殖和迁移的作用机理.方法:应用Northern、Western印迹和斑点杂交检测SAL对MMP-2、MMP-9和OPN表达的影响;采用3H-TdR掺入实验,检测VSMC增殖活性.结果:SAL或复方丹参(SALC)注射液对ox-LDL诱导的MMP-2和MMP-9表达以及OPN的合成与分泌具有明显的下调作用,且可显著抑制VSMC的DNA合成;将ox-LDL与SAL或SALC注射液共孵育1h后再处理VSMC,ox-LDL对上述基因表达和VSMC增殖的诱导作用基本消失.结论:SAL抗VSMC增殖与迁移的作用与其调整基质代谢有关.
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黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响
目的:探讨黄芪、当归对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)粘着斑激酶(FAK)表达和细胞凋亡的影响.方法:应用RT-PCR、Western blot检测黄芪、当归对FAK表达的影响;应用Greiss试剂检测VSMC培养液中NO-2含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性.结果:黄芪、当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达,增加细胞培养液中的NO-2含量,诱导caspase-3表达,下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡.结论:黄芪、当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成、抑制FAK表达、诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关.
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动脉粥样硬化大鼠"痰瘀"病理演变与VSMC肌动蛋白表达的相关性研究
目的探讨动脉粥样硬化模型大鼠随着造模时间的推移"痰瘀"演变规律.方法采用高脂饲料喂饲法复制大鼠动脉粥样硬化模型,用生化法及免疫组化方法动态检测血脂、血液流变学、血糖、胰岛素及血管平滑肌细胞(VSMC)肌动蛋白表达的变化.结果随着动脉粥样硬化大鼠由痰到瘀症状的变化(即血脂、血液流变学、血糖、胰岛素及胰岛素敏感指数等指标均随病情加重而变化),VSMC肌动蛋白表达逐渐增加.结论 VSMC肌动蛋白表达是动脉粥样硬化大鼠由痰到瘀的分子机制.
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活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:观察活血潜阳胶囊对血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法:贴块法行SD大鼠胸主动脉VSMC分离培养.倒置相差显微镜、透射电镜、α-SM-actin鉴定.以血清药理学方法进行实验,采用通法采集药物血清,10-6mol/L ATⅡ为刺激因子,卡托普利(Captopril)为对照,活血潜阳胶囊药物血清分为10%、7.5%、5%、2.5%共4个浓度.采用结晶紫染色法观察细胞生长曲线,测定氚标-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入量了解DNA合成的变化,并用透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果:(1)经活血潜阳胶囊处理后,细胞增殖速度明显下降,生长曲线下移,3H-TdR掺入量减少,DNA合成明显受到抑制,其作用与Captopril相当,且在一定范围内有剂量依赖性.(2)活血潜阳胶囊可以改善ATⅡ引起的细胞超微结构改变,使VSMC仍保持收缩型的特征,与Captopril的作用相似.结论:活血潜阳胶囊能抑制ATⅡ引起的VSMC增生和结构改变,从细胞水平初步探讨了活血潜阳胶囊改善高血压血管重构的机理.
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丹参酮ⅡA对增殖的大鼠血管平滑肌细胞中钙调神经磷酸酶活性的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA(TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响机制.方法 组织贴块法培养VSMCs并用AngⅡ诱导建立其增殖模型, 用酶促反应定磷法观察不同浓度的TSN对血管平滑肌细胞中钙调神经磷酸酶(CaN)活性的影响;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察CaN mRNA表达水平的变化和应用免疫细胞化学方法观察增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的变化.结果 与正常对照组比较, AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖, 细胞增殖活度明显升高(P<0.05);TSN各组CaN活性、CaN mRNA和PCNA表达水平随TSN的浓度增加而显著下降(P<0.05, P<0.01).结论 TSN具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用, 并呈浓度依赖性.其机制可能与TSN下调VSMC中CaN活性、抑制了CaN mRNA 和PCNA的表达有关.
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益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响
目的:观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制.方法:采用3H-TdR和3H-Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化.结果:益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖.中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化.结论:益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑.
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大黄虫丸拆方对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响
目的 研究大黄虫丸拆方对动脉粥样硬化(AS)模型家兔胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与凋亡的影响.方法 采用免疫性内皮损伤合并高脂饲料喂养的方法建立家兔AS模型,通过SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在VSMC中的表达,缺口末端标记法(TUNEL)观察VSMC的凋亡情况.结果 与模型对照组比较,大黄虫丸拆方各功效组分均可使AS模型家兔胸主动脉VSMC中PCNA阳性细胞显著减少(P＜0.01),而凋亡阳性细胞数显著增加(P＜0.01).结论 大黄虫丸各功效组分通过抑制VSMC增殖、诱导其凋亡,从而调节VSMC增殖和凋亡之间的平衡,发挥抗AS作用,其中拆方1号是主要组分.
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中药抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的研究进展
本文总结了近年来直接抑制某些生长因子诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,或者利用电镜、免疫组化、印迹法及原位杂交方法直接测量增殖VSMC中生长因子的mRNA或其受体的表达,观察中药及复方对生长因子诱导的VSMC增殖抑制作用的研究.
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昆明山海棠提取物对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响
目的探讨昆明山海棠提取物(THW 4)对离体血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响.方法培养家兔主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的 THW 4进行处理,用MTT法测定细胞生长曲线,以Annexin V FITC/PI双标记、透射电镜、原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 THW 4可以明显抑制VSMC增殖,呈剂量和时间依赖性,作用48h的半有效抑制浓度(IC 50 )为15.6μg/L;VSMC在含10～100μg/L THW 4的培养液中孵育56h,可检测到细胞早期凋亡,且凋亡率随THW 4浓度增加而升高;延长孵育时间至72h,透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态学改变,原位末端标记法显示DNA片段化增多,有核碎裂、固缩等改变;细胞周期时相分布显示THW 4主要阻滞VSMC于G2/M期.结论 THW 4能有效抑制体外培养的VSMC增殖及诱导其凋亡,提示THW 4可能会作为防治血管成形术后再狭窄的候选药物.
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糖通方对体外培养糖尿病大鼠髂动脉血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 用血清药理学与分子生物学相结合的方法,探讨糖通方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用.方法 选择纯种新西兰家兔,每天灌服不同剂量(18、13、8 mL/kg)的糖通方中药制剂,制备含有不同药物浓度的兔血清;用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞(VSMC)并用不同浓度含药血清进行干预;用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-TDR)掺入量,检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞周期.结果 各糖通方含药血清组呈浓度依赖性地表现为3H-TDR掺入量显著减少,3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组(P<0.01);流式细胞仪测定各含药血清组处于S和G2/M期细胞百分比显著低于正常血清对照组(P<0.01).结论 糖通方含药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖,且抑制效应呈浓度依赖性.
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炎症在动脉粥样硬化血栓形成疾病中的作用
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是血管系统疾病的主要病理基础,粥样斑块是动脉内膜的局部非对称性增厚, 主要由血液来源的炎性细胞、免疫细胞及血管壁的血管平滑肌细胞、内皮细胞等细胞成分, 结缔组织成分, 脂质和碎片等组成[1].
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论冠脉介入术后再狭窄的中医药防治思路
冠脉介入术后再狭窄的中医药防治当关注如下几点:(1)根据病因病机辨证分型论治;(2)中药现代药理与冠脉介入后再狭窄的病理;(3)抑制血管平滑肌细胞增殖;(4)降纤、抗凝、改善血液理化特性;(5)降低血小板数量,抑制血小板聚集和释放;(6)调整血管内皮细胞功能;(7)抑制原癌基因;(8)抑制细胞基质;(9)抑制炎症反应细胞因子释放.
