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大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的 探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制.方法 采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、1 00、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20 μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20 μmol/L(Allicin+ SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制.结果 与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P ＜0.05,P＜0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P＜0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P ＜0.05,P＜0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20 μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P＜0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P ＜0.01,P＜0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P＜0.01).结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖.
关键词： PM2.5 大蒜素 p38 MAPK信号通路 血管平滑肌细胞 -
ARE——基因表达转录后调控的重要元件之一
位于一些基因3'端非翻译区的富含A、U元件(AREs)是目前公认的能够在转录后水平调节mRNA稳定性的元素之一.它兼具介导相关因子mRNA衰变及增强某些mRNA稳定性的作用,ARE结合蛋白及P38 MAPK信号传导通路在此过程中作用关键,miRNA与其也有密切联系.
关键词： AU元件 mRNA稳定性 ARE结合蛋白 p38 MAPK信号通路 miRNA -
p38 MAPK抑制物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响
目的 探讨p38 MAPK抑制物SB20358(SB)对心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响.方法 选择45只250～ 300 g雄性SD大鼠,通过阻断其左冠状动脉前降支(LAD) 30 min再灌注180 min制备I/R损伤模型.随机分3组(n=15):溶剂对照组(Vehicle组)、低剂量SB预处理组(SB-L组)和高剂量SB预处理组(SB-H组);同时选取15只同周龄SD大鼠仅穿线但不结扎(Sham组).SB-L组和SB-H组分别于LAD结扎前30 min注射50 μg/kg、100 μg/kg SB,其余两组注射等体积的生理盐水.分别在术前(T0)、缺血30 min后(T1)、再灌注60 min(T2)、120 min(T3)及180 min后(T4)检测各组血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)水平及I/R后的心功能情况[舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩期平均压(LVSP)、短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)],处死大鼠并通过TTC染色分析缺血程度和梗死程度,将心脏组织包埋并采用HE染色观察各组的心肌形态学变化,同时采用Western blot检测心肌梗死区p38及其磷酸化形式的p-p38的蛋白水平.结果 与Sham组相比,Vehicle组除T0外的I/R其余时间点的TNF-α水平均升高,LVSP、FS和EF均降低,LVEDP、心肌p-p38/p38值及缺血和梗死程度均升高(P＜0.05),心肌肌纤维出现断裂溶解及坏死,心肌间质出现水肿且间隙增大,出现坏死灶;给予SB处理后可减轻以上异常指标及心肌病理改变,与Vehicle 组的差异均有统计学意义,但仍与Sham组有差异(P＜0.05).SB-H组的改善效果优于SB-L组(P＜0.05).结论 SB对大鼠心肌I/R损伤有改善作用,可降低心肌缺血及梗死程度,改善心功能和炎症反应并抑制p38 MAPK信号通路活化.
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p38 MAPK信号通路在眼科疾病中的作用
p38 MAPK信号通路通过蛋白质磷酸化机制,介导细胞间的信息传递,对全身多种疾病的发生、演变起重要作用.眼科疾病同样是p38 MAPK信号通路作用的一个重要“靶点”.p38 MAPK信号通路通过炎性反应、免疫损伤、氧化应激、细胞凋亡等机制,诱导结膜上皮细胞释放炎性因子、参与晶状体上皮细胞代谢和视网膜神经节细胞的凋亡,并介导视网膜炎性反应、参与视网膜新生血管形成.p38 MAPK信号通路与干眼、白内障、青光眼及眼底疾病等多种眼科疾病关系密切,这为眼科疾病的有效诊治提供新的思路和方法.
关键词： p38 MAPK信号通路 眼科疾病 作用机制 -
左归丸含药血清通过p38 MAPK信号通路诱导MC3T3-E1成骨细胞的分化
目的 探讨p38MAPK信号通路对左归丸含药血清干预MC3I3-E1成骨细胞分化的影响.方法 制备大鼠含药血清,选用p38特异阻滞剂SB203580,实验分为空白对照组、SB203580组、左归丸组、左归丸加SB203580组、倍美力组、倍美力加SB203580组.孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Westem印迹法分析ALP蛋白表达水平；孵育7d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性；孵育14d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况.结果 与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3-E1成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P＜0.01)；与左归丸组比较,左归丸加SB203580组显著抑制左归丸含药血清对MC3T3-E1成骨细胞的分化的促进作用,明显下调ALP蛋白表达水平(P＜0.01).结论 左归丸含药血清可能部分通过p38MAPK信号通路干预MC3T3-E1成骨细胞分化.
关键词： 左归丸 成骨细胞 p38 MAPK信号通路 碱性磷酸酶 矿化沉积 -
虫草益肾颗粒对人肾小球系膜细胞 megsin及p38 MAPK信号转导通路的影响
目的：探讨虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞（ HMC ）增殖影响中megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的调控作用。方法：体外采用高糖（30 mmol／L）刺激HMC，分别加入不同浓度的虫草益肾颗粒（高、中、低）及福辛普利含药大鼠血清进行干预，收集细胞。采用Western印迹及实时定量PCR法分别检测p38MAPK、p－p38MAPK、megsin蛋白的表达。结果：虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC 增殖均有抑制作用，且高糖刺激后HMC 细胞p38 MAPK、p －p38MAPK、megsin的表达均较正常组增多（均P＜0．05）；虫草益肾颗粒高、中剂量组干预后均可致其表达下降（均P＜0．05）；其抑制作用与福辛普利组作用效果相近。结论：虫草益肾颗粒具有抑制高糖环境下HMC增殖的作用，抑制高糖诱导的p38 MAPK、p－p38 MAPK和megsin的表达，其作用机制可能与虫草益肾颗粒抑制p38 MAPK信号活化及megsin表达有关。
关键词： 虫草益肾颗粒 人肾小球系膜细胞 p38 MAPK信号通路 Megsin -
乳癌术后方对HER2过表达乳腺癌小鼠复发转移中HER2信号传导通路及相关基质蛋白表达的影响
目的 探讨乳癌术后方对HER2介导的p38 MAPK、PI3K-Akt信号通路及其对HER2过表达乳腺癌细胞运动和黏附能力的影响,评价乳癌术后方抗HER2过表达乳腺癌复发转移的作用机制.方法 选取30周龄左右发瘤相当的HER2/neu转基因自发乳腺癌小鼠,行原发肿瘤切除术,术后随机分为对照组、中药组(乳癌术后方组)、西药组(曲妥珠单抗组)、联合组(乳癌术后方+曲妥珠单抗组),干预4个月.评价肿瘤的复发率、瘤积抑制率及肺转移抑制率；并采用Western blot法检测干预结束后各组小鼠复发肿瘤组织中HER2相关信号通路中Total-Akt、p-Akt、p38、p-p38的表达及与细胞运动和黏附相关的基质蛋白细胞间黏附分子(E-cadherin)、上皮-间质转化标记物波形蛋白(Vimentin)的表达情况.结果 ①各组小鼠肿瘤复发率差异无统计学意义(P＞0.05).对照组治疗结束时平均瘤积为11.11 cm3,中药组为5.56 cm3,组间差异有统计学意义(P=0.037)；对照组平均肺转移结节数为16个,中药组为10个,中药组肺转移抑制率达37.85％,但组内差异无统计学意义(P＞0.05).②中药组、西药组、联合组p-p38及p-Akt表达含量较对照组明显下调(P＜0.05)；对照组与联合组E-cadherin几乎不表达,中药组与西药组E-cadherin表达显著增加(P＜0.05).各组复发肿瘤组织中Vimentin表达水平相似.结论 乳癌术后方能够抑制HER-2/neu转基因小鼠术后乳腺复发肿瘤瘤积的增长,阻断HER2介导的p38 MAPK及PI3K-Akt信号通路,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用；乳癌术后方能够上调细胞间黏附分子E-cadherin的表达,其可能通过增加细胞间的黏聚力,维持乳腺上皮细胞的完整性,发挥抗复发转移作用.
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游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞AQP1的表达调节及其作用机制
目的 研究混合游离脂肪酸(FFA)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)中水通道蛋白1(AQP1)的表达调节及其作用机制.方法 Western blotting检测FFA处理不同时间后大鼠PMVECs内AQP1蛋白表达变化;Western blotting和real-time PCR检测不同浓度的FFA处理后大鼠PMVECs内AQP1蛋白和mRNA表达变化;用SB203580抑制p38 MAPK通路,Western blotting检测FFA处理对AQP1表达的影响.结果 FFA处理6、12h后大鼠PMVECs内AQP1蛋白表达量显著高于空白组(P =0.000,P=0.003).FFA (200 μmol/L)组和FFA(500 μmol/L)组AQP1蛋白表达量显著高于空白对照组(P =0.007,P=0.002).FFA(100 μmol/L)组、FFA(200μmol/L)组和FFA(500 μmol/L)组AQP1 mRNA表达量显著高于空白对照组(P=0.000).SB203580预处理可抑制FFA诱导的大鼠PMVECs内AQP1蛋白表达量的增加(P =0.016).结论 FFA可以上调AQP1的表达,对脂肪栓塞中AQP1介导的肺内水转运过程有一定程度的影响,其调控机制可能与p38MAPK信号通路活化有关.
关键词： 脂肪栓塞 肺水肿 游离脂肪酸 水通道蛋白1 大鼠肺微血管内皮细胞 p38 MAPK信号通路 -
蛇床子素对髓核致炎神经根痛大鼠脊髓背角p38MAPK表达的影响
目的 研究蛇床子素(osthole,Ost)对髓核致炎神经根痛大鼠脊髓背角p38 MAPK信号相关通路表达的影响.方法 ♂成年SD大鼠156只随机分为5组:Blank组(n=36)、Sham组(n=36)、手术模型组(NP,n=36)、DMSO组(n=24)、蛇床子素组(Ost组,n=24),检测所有大鼠术前1d,术后1、2、6、7、12、14、21、28 d的50％机械痛阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT).DMSO组和Ost组于术后d2经硬膜外腔分别注射100 mL·L-1 DMSO和20 g·L-1蛇床子素,体积均为50μL.分别于术后7、14 d取出术侧腰段脊髓背角,Western blot检测p-p38、IL-18、IL-18R蛋白的表达,qPCR检测IL-18 mRNA表达.结果 与Blank组相比,Sham组在术后1 d 50％ MWT降低(P＜0.05),而NP组、DMSO组及Ost组术后各时点的50％ MWT降低(P＜0.05);术后d 7 p-p38、IL-18蛋白及IL-18 mRNA表达上调(P＜0.05),而IL-18R蛋白在术后d 14表达上调(P＜0.05);硬膜外给予蛇床子素后,与DMSO组相比,Ost组各个时间点的50％ MWT升高,持续至术后28 d(P ＜0.05),同时,术后d7伴有p-p38、IL-18蛋白及IL-18 mRNA表达下降;术后d 14,IL-18R蛋白表达降低(P＜0.05);p-p38蛋白相对浓度和IL-18 mRNA含量进行相关性分析,Spearman秩相关系数R =0.9(P ＜0.05).结论 髓核致炎大鼠脊髓背角p-p38蛋白及IL-18可能参与了早期炎性痛形成,而IL-18R在疼痛的维持中发挥作用,蛇床子素长期有效缓解髓核致炎大鼠神经根痛,可能与抑制p38 MAPK信号相关通路有关.
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沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)调控p38MARK信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制
目的 探讨沉默信息调节因子相关酶1(silment information regulator factor related enzymes 1,SIRTl)对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用及其机制.方法 取健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠60只,应用随机数字表法分为正常对照组(正常组)、糖尿病组(病变组)、SIRT1激动剂白藜芦醇治疗组(治疗组).病变组和治疗组大鼠按60 mg·kg-1单次腹腔注射链脲佐菌素以诱导糖尿病大鼠模型;正常组按60 mg· kg-1腹腔注射枸橼酸钠缓冲液.72h后取鼠尾静脉血检测血糖,血糖值＞16.7 mmol·L-1定为糖尿病大鼠.自造模成功后第2天起治疗组每天每只鼠给予白藜芦醇20 g·kg-1灌胃,正常组和病变组每天每只鼠给予亚甲砜灌胃.8周后进行视网膜免疫组织化学染色,TUNEL法检测视网膜RGCs凋亡,Western blot检测SIRT1、p38 MAPK、Caspase-3蛋白的表达.结果 正常组、病变组、治疗组8周后RGCs凋亡指数分别为:(0.848±0.131)％、(19.038±1.327)％、(10.461±1.089)％,三组间差异有统计学意义(F=670.497,P=0.000).进一步两两比较:正常组RGCs凋亡指数与病变组、治疗组间差异均有统计学意义(均为P=0.000);治疗组与病变组间差异亦有统计学意义(P =0.000).与正常组(0.132±0.003)相比,病变组(0.060±0.028)和治疗组(0.073±0.026)大鼠视网膜SIRT1蛋白表达降低,总体差异有统计学意义(F=1310.663,P=0.000).进一步两两比较,病变组和治疗组与正常组间,以及病变组与治疗组间差异均有统计学意义(均为P =0.000).病变组(l.121±0.082,0.266±0.005)和治疗组(0.574±0.012,0.190±0.060)大鼠视网膜p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达较正常组(0.402±0.012,0.156±0.006)明显增加,总体差异有统计学意义(F =604.500、1056.709,P=0.000、0.000).进一步两两比较:p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达在正常组与病变组间、正常组与治疗组间以及病变组与治疗组间差异均有统计学意义(均为P=0.000).结论 在糖尿病视网膜病变模型中,SIRT1表达上调,抑制RGCs的凋亡,对糖尿病视网膜病变RGCs起保护作用.其抗凋亡作用机制可能与其抑制p38 MAPK的表达相关.p38 MAPK信号通路是糖尿病视网膜病变中SIRT1介导的神经保护作用的重要通路之一.
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黄芩苷对哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路影响初探
目的：初步探讨黄芩苷防治支气管哮喘的作用机理。方法用卵蛋白致敏大鼠制备支气管哮喘动物模型，经黄芩苷干预治疗，运用免疫组化法及 Western Blot 法检测各组大鼠肺组织匀浆中 p38 MAPK 磷酸化蛋白表达量。结果两种检测方法均显示，p38 MAPK 磷酸化蛋白水平在模型组中有明显的增加，地塞米松组、黄芩苷高剂量组和低剂量组的 p38 MAPK 磷酸化蛋白水平均低于模型组（P ＜0．05）。结论黄芩苷能有效治疗哮喘的作用与抑制哮喘大鼠 p38 MAPK 信号通路的表达密切相关。
关键词： 黄芩苷 哮喘 p38 MAPK信号通路 -
晚期氧化蛋白产物调节人肾小管上皮细胞自噬的研究
目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对人肾小管上皮细胞(HK-2)自噬的影响.方法 AOPPs刺激HK-2细胞,采用RT-qPCR和Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1和p62的表达;Western blot检测p38 MAPK通路的激活;加入p38 MAPK抑制剂(SB203580)与AOPPs共处理,观察自噬的改变,加入自噬诱导剂雷帕霉素与AOPPs共处理,并用RT-qPCR和Western blot检测细胞周期抑制蛋白p27的表达,用BCA法检测细胞总蛋白,观察细胞肥大的改变.结果 AOPPs下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1,上调p62的表达,并激活p38 MAPK通路;与AOPPs单独处理组相比,SB203580与AOPPs共处理组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin升高而p62降低;雷帕霉素与AOPPs共处理组p27的表达和细胞总蛋白下调.结论 AOPPs通过激活p38 MAPK通路抑制HK-2细胞自噬,自噬抑制参与HK-2细胞肥大.
关键词： 自噬 p38 MAPK信号通路 晚期氧化蛋白产物 -
山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞增殖的影响
目的 探讨山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞(HBZY-1)增殖、纤维化的影响,并研究其相关的作用机制.方法 将HBZY-1细胞分为正常糖浓度组[葡萄糖(Glu)5.5 mmol/L]即对照组、高糖(Glu 25 mmol/L)组、10 μmol/L山奈酚十高糖组和30 μmol/L山奈酚十高糖组.分组处理细胞后,采用MTT实验检测正常糖浓度和高糖下山奈酚对HBZY-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组细胞周期变化;Real-time PCR检测各组细胞纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF) mRNA的表达,Western blot检测FN、CTGF、细胞周期相关蛋白以及p38 MAPK信号通路蛋白的表达.结果 山奈酚(10、30 μmol/L)对正常糖浓度培养的HBZY-1细胞增殖影响不大(P＞0.05),高糖能够增强细胞的增殖能力(P＜0.05),而山奈酚(10、30 μmol/L)可抑制高糖引起的增强细胞增殖作用(P＜0.05).高糖能减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,并降低细胞周期相关蛋白p21Cip1以及p27KiP1蛋白表达,山奈酚(10、30 μmol/L)能够阻止高糖引起的细胞周期改变以及细胞周期相关蛋白表达的下调.山奈酚(10、30 μmol/L)同时能够抑制高糖引起的细胞FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平的上调.高糖能够增加磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白水平,而山奈酚(10、30 tμmol/L)处理能够剂量依赖性的抑制高糖诱导的p-p38MAPK蛋白的表达上调.结论 山奈酚对高糖诱导的HBZY-1细胞增殖起抑制作用,其作用机理可能是通过调控p38 MAPK信号通路,对高糖培养下的HBZY-1细胞起到保护作用.
关键词： 山奈酚 高糖 大鼠肾系膜细胞 p38 MAPK信号通路 -
丝裂原活化蛋白激酶信号通路与白血病的研究新进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路可参与凋亡、分化、自噬等多种细胞活动,人类细胞中主要有细胞外信号调节激酶(Erk)、p38 MAPK、c-Jun N端激酶(JNK)3条通路,每条信号通路都具有高度特异性,有其独立的功能.MAPK信号通路与白血病的发生、发展密切相关,其对白血病细胞的作用主要通过与细胞凋亡、介导细胞耐药、调控细胞自噬分化等方面有关.现就MAPK信号通路与白血病的相关研究进展进行综述.
关键词： JNK信号通路 p38 MAPK信号通路 ERK信号通路 白血病
