首页 > 文献资料
-
白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制作用与PI3K-Akt信号通路的关系
目的:探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及与PI3K-Akt信号通路的关系.方法:50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+ Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R+ Wom组).结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血45 min,再灌注120 min,测定再灌注心肌组织中NOS,NO的含量,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素的dUTP缺口末端标记(TUNEL)的方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达,利用Western blot测定Akt(又称PKB,即蛋白激酶B)及p-Akt(即磷酸化蛋白激酶B)含量.结果:与I/R组及Res+ Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Akt的磷酸化水平增高,上述各项指标差异具有统计学意义(P＜0.05),而上述变化能够被PI3K-Akt信号通路的特异性阻断剂渥曼青霉素所阻断,且其差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白藜芦醇能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,此过程有PI3K - Akt信号通路的参与.
关键词： 白藜芦醇 心肌缺血再灌注损伤 细胞凋亡 PI3K-Akt信号通路 -
趋化素样因子超家族成员5对前列腺癌侵袭行为的影响
目的 探讨趋化素样因子超家族成员5(CMTM5)对前列腺癌细胞的作用及机制.方法 利用划痕实验观察CMTM5对前列腺癌、DU145细胞迁移的影响；蛋白质印迹法检测PI3 K-AKT信号通路相关蛋白的表达；建立18只裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒,检测CMTM5过表达对裸鼠前列腺肿瘤生长的影响,应用免疫组织化学方法检测裸鼠肿瘤组织中Ki-67的表达. 结果 过表达CMTM5抑制前列腺癌DU145细胞迁移,减少了PI3K-AKT信号通路中的关键分子pAKT 、NF-kB等蛋白的表达.裸鼠体内实验结果显示,CMTM5组肿瘤体积及质量分别为(573.39±175.24)mm3及(0.55±0.11)g,对照组分别为(1482.50±327.86) mm3及(1.31±0.29)g,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CMTM5组肿瘤组织Ki-67表达明显低于对照组. 结论 过表达CMTM5抑制前列腺肿瘤的增殖及迁移能力,其机制与PI3K-AKT信号通路有关.
-
PI3K-Akt信号通路在小儿血管瘤演变中的作用
血管瘤是小儿较为常见的皮肤良性肿瘤之一,由胚胎期血管网增生所致.血管瘤是一种先天性发育异常,属于错构瘤,而非真性肿瘤.病变部位皮肤细胞增殖是血管瘤发生的主要特点之一,并具有自行消退的特性[1-2].血管瘤的自行消退机制仍处于不断探索中,但有研究显示,细胞凋亡在血管瘤自行消退过程中发挥重要作用.PI3K-Akt是目前证实在介导细胞凋亡过程中发挥重要作用的信号通路.
关键词： 小儿血管瘤 PI3K-Akt信号通路 细胞凋亡 -
新生小鼠心肌肌钙蛋白I相互作用蛋白的鉴定与功能预测
目的 采用高通量蛋白质组学筛选鉴定小鼠心肌原代细胞中可能与心肌肌钙蛋白I(cTnI)存在相互作用的蛋白质并通过生物信息学软件预测其可能参与的生物过程及信号通路.方法 取C57新生小鼠的心脏制备心肌原代细胞,提取细胞全蛋白行免疫共沉淀实验筛选出cTnI的相互作用蛋白,通过质谱分析技术对其进行鉴定;将鉴定所得蛋白质信息输入生物信息学软件分析其理化性质,预测其可能参与的生物过程及信号通路.结果 共鉴定出262种可能与cTnI存在相互作用的蛋白质,预测其可能参与的生物进程14条,KEGG生物学通路33条(P＜0.05).结论 在小鼠心肌细胞中,有262种蛋白可能与cTnI存在相互作用,其中部分蛋白可能参与心肌细胞钙离子内流及PI3K-Akt信号通路的调节.
关键词： 心肌肌钙蛋白I 蛋白质组学 生物信息学 PI3K-Akt信号通路 -
EGCG通过PI3-K/Akt信号通路抗神经细胞缺氧/复氧损伤
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对神经细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响及其作用机制.方法 原代培养神经细胞,实验分4组:对照组、A/R组、EGCG预处理组(EGCG+A/R组)、EGCG+LY294002+A/R组.检测细胞存活率与乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和[Ca2+]i;Western blot法检测总-Akt和磷酸化-Akt (p-Akt)蛋白表达.结果 与对照组相比,A/R组中细胞存活率降低;LDH、[Ca2+]i与细胞凋亡增加.与A/R组相比,EGCG预处理显著降低LDH、[Ca2+]i与细胞凋亡,提高细胞存活率,表明EGCG可对抗神经细胞A/R损伤.进一步结果显示EGCG预处理后,显著增加神经细胞中p-Akt蛋白表达.然而,PI3K-Akt信号转导通路阻断剂LY294002显著抑制EGCG介导的神经保护作用与p-Akt蛋白上调.结论 EGCG对A/R介导的神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用与PI3K-Akt信号转导通路有关.
-
有氧耐力训练对大鼠骨骼肌线粒体功能及PI3K-Akt蛋白的表达影响
目的:观察有氧耐力训练大鼠骨骼肌线粒体磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PBK-Akt)信号通路的表达情况.方法:将36只大鼠随机分为3组(n=12):对照组、有氧耐力训练组和一次性力竭组.分组干预结束后,检测各组大鼠骨骼肌线粒体膜电位(MMP)水平、琥珀酸脱氢酶(SDH)和细胞色素C氧化酶(COX)活性,利用Western blot法测定组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PBK)和蛋白激酶B(PKB或Akt)的磷酸化水平.结果:与对照组相比,一次性力竭组大鼠MMP、SDH和COX活性水平、磷酸化PI3K和磷酸化Akt蛋白水平明显降低(P＜0.05);而有氧耐力训练组大鼠上述指标均显著高于一次性力竭组(P＜0.05),与对照组比无明显差异.结论:有氧耐力训练对大鼠骨骼肌线粒体具有保护作用,其机制可能与活化PI3K-Akt信号通路有关.
关键词： 有氧耐力训练 大鼠 骨骼肌 线粒体 PI3K-Akt信号通路 -
异丙肾上腺素预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激的影响
目的 探讨异丙肾上腺素预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激的影响,阐述相关保护机制.方法 将32只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、异丙肾上腺素预处理组(ISO组)和选择性β2肾上腺素能受体拮抗剂ICI118551+ISO-I/R组(ICI组),每组8只.通过结扎左冠状动脉前降支(LAD)30 min再灌注2 h建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.用苏木素伊红染色法观察大鼠心肌组织形态,蛋白印记法测定磷酸化丝/苏氨酸激酶(P Akt)的表达水平,原位末端标记法及免疫组化法分别检测心肌细胞凋亡率及心肌凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)浓度.结果 与I/R组比较,ISO组大鼠心肌损伤程度明显减轻,P-Akt的表达明显增多、心肌细胞凋亡率减低、Caspase-3表达减低、血清SOD活性增高、MDA浓度减低,差异有统计学意义(P<0.05);ICI118551可阻断ISO的作用,与ISO组相比,ICI组大鼠心肌损伤程度重,P-Akt的表达明显减少、心肌细胞凋亡率增高、Caspase-3表达增高、血清SOD活性减低、MDA浓度增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 异丙肾上腺素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与激动β2肾上腺素能受体,启动PI3K Akt信号通路相关.
-
磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶信号通路介导的血红素氧合酶-1表达在七氟醚后处理心肌保护中的作用
目的 研究七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否与血红素氧合酶-1(HO-1)表达上调有关,且这种表达上调机制与激活磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路的关系.方法 取健康雄性SD大鼠30只,体质量230~290 g,按随机数字表法分为5组(每组6只):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注损伤组(I/R组)、七氟醚后处理组(Se组)、七氟醚后处理+PI3K抑制剂渥漫青霉素(Wort-man-nin)组(Se+W组)、Wortmannin组(W组).S组:丝线穿过冠状动脉左前降支(LAD)但不结扎;其余4组均进行结扎和再灌注过程,I/R组:结扎LAD 30 min再灌注120 min;Se组:在恢复血供前1 min吸入1.0 MAC的七氟醚5 min;Se+W组:操作同七氟醚后处理组,但在给予七氟醚前,经股静脉注入PI3K抑制剂Wortmannin(15μg/kg);W组:在恢复血供前5 min经股静脉注射Wortmannin(15μg/kg).再灌注120 min时,①采腹主动脉血测肌钙蛋白(cTn-I)含量.②取大鼠心尖组织测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力.③蛋白质印迹法测待测心尖组织中Akt、p-Akt及HO-1蛋白的表达,并计算p-Akt Akt比值.结果 与S组比较,其余4组cTn-I、p-Akt Akt、HO-1及MDA含量明显升高,SOD活力降低,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组相比,Se组cTn-I、MDA含量下降明显,p-Akt Akt比值、HO-1蛋白表达、SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05);与Se组比较,Se+W组及W组血清cTnI含量、心肌组织MDA含量显著升高,心肌组织HO-1、p-Akt表达下调,p-Akt Akt降低,心肌组织SOD活力降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 七氟醚后处理通过影响HO-1表达对大鼠的心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,其机制可能与PI3K-Akt通路介导有关.
关键词： 七氟醚后处理 心肌保护 血红素氧合酶-1 PI3K-Akt信号通路 -
IGF-1对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对β-淀粉样蛋白25-35(amyloid-beta protein,Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及可能的信号机制. 方法 以10 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞作为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型.实验分为对照组、Aβ25-35处理组、IGF-1+ Aβ25-35处理组.条件孵育24h,采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)检测细胞存活率,Western blot检测各组细胞磷酸化-Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白表达水平. 结果 MTT法检测显示,10 μmol/L Aβ25-35孵育24 h,PC12细胞存活率为(39.8±3.7)％,与对照组[(100.0±2.3)％]相比显著下降(P＜0.05).IGF-1+ Aβ25-35处理组,PC12细胞存活率为(56.4±4.2)％,与Aβ25-35处理组[(39.8±3.7)％]相比显著增高(P＜0.05).Western blot显示,IGF-1+Aβ25-35处理组p-Akt蛋白表达水平(0.794 ±+0.037)高于Aβ25-35处理组(0.493±0.050),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论 IGF-1能抑制Aβ25-35所导致的PC12细胞凋亡,其保护作用可能与上调Akt磷酸化的表达有关.
关键词： 胰岛素样生长因子1 淀粉样蛋白 细胞凋亡 PI3K-Akt信号通路 -
硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制
目的:探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt (p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制.方法:60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20).正常对照组小鼠连续3d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID50)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200 μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100μg·kg-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14 d.接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果:与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P＜0.01).硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻.硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P＜0.01).与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P＜0.01).结论:硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关.
-
PI3K与尼古丁抑制小胶质细胞增殖的相关性研究
目的 观察PI3K-Akt信号通路在尼古丁抑制小胶质细胞增殖中的作用.方法 培养的小胶质细胞系(BV-2)中分别加入不同浓度的尼古丁(Ni)、谷氨酸(GLU),分为谷氨酸组、尼古丁组以及谷氨酸和尼古丁共同添加组,培养24h,采用MTT方法检测小胶质细胞存活率,Western Blot方法检测PI3K相关蛋白(P85)的表达情况.结果 通过MTT检测发现:(1)500μmol/L浓度的谷氨酸促进小胶质细胞OD值增高(2)尼古丁能够使小胶质细胞OD值降低(3)不同浓度的尼古丁能够抑制500μmol/L谷氨酸诱导的小胶质细胞OD值的升高,10μmol/L效果显著.通过Western Blot实验观察到:(1)谷氨酸(浓度500μmol/L)使小胶质细胞PI3K-Akt信号通路的P85蛋白表达增多(2)尼古丁(浓度10μmol/L)抑制小胶质细胞PI3K-Akt信号通路的P85蛋白表达(3)在尼古丁存在的条件下,谷氨酸未能使小胶质细胞PI3K-Akt信号通路的P85蛋白表达增多.结论 (1)尼古丁可以抑制谷氨酸诱导的小胶质细胞的增殖(2)PI3K-AKT信号通路参与尼古丁抑制小胶质的细胞增殖.
关键词： 脑卒中 尼古丁 小胶质细胞 PI3K-Akt信号通路 -
miR-1与糖尿病心肌肥大的相关性
目的 探讨糖尿病心肌病心肌肥大与miR-1表达量之间的关系.方法 给C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),建立糖尿病心肌病心肌肥大模型,8周后取心脏组织并称其重量,提取RNA并逆转录,用qRT PCR检测miR-1的表达,检测糖尿病模型小鼠心脏组织中的相关靶基因BNP和ANP并确定糖尿病心肌病心肌肥大模型建立成功.培养大鼠心肌细胞H9C2细胞,对细胞进行高糖和低糖处理,24h后收集细胞,提取RNA并逆转录,用qRT PCR检测miR-1的表达.收集正常人血清,1型和2型糖尿病病人血清以及1型糖尿病心肌肥大病人血清,检测血清中miR-1的表达.Western blot检测高糖和低糖处理24h的H9C2细胞中p-Akt和AKT的表达.向H9C2细胞中加入Akt抑制剂LY294002,qRT PCR检测miR-1的表达量.结果 qRT PCR检测发现糖尿病心肌肥大小鼠心脏组织中的miR-1的表达降低,高糖处理的H9C2细胞中miR-1的表达降低,1型糖尿病心肌肥大病人血清中的miR-1的表达降低.Western blot检测发现高糖处理的H9C2细胞中p-Akt和AKT的表达升高,当加入Akt抑制剂LY294002时,qRT PCR检测发现miR-1的表达量升高.结论 糖尿病心肌肥大时,miR-1起到了关键作用,并且糖尿病心肌肥大的心脏组织中PI3K-Akt信号通路明显抑制了miR-1的表达.
关键词： 糖尿病心肌肥大 PI3K-Akt信号通路 微小RNA-1 -
乳癌术后方对HER2过表达乳腺癌小鼠复发转移中HER2信号传导通路及相关基质蛋白表达的影响
目的 探讨乳癌术后方对HER2介导的p38 MAPK、PI3K-Akt信号通路及其对HER2过表达乳腺癌细胞运动和黏附能力的影响,评价乳癌术后方抗HER2过表达乳腺癌复发转移的作用机制.方法 选取30周龄左右发瘤相当的HER2/neu转基因自发乳腺癌小鼠,行原发肿瘤切除术,术后随机分为对照组、中药组(乳癌术后方组)、西药组(曲妥珠单抗组)、联合组(乳癌术后方+曲妥珠单抗组),干预4个月.评价肿瘤的复发率、瘤积抑制率及肺转移抑制率；并采用Western blot法检测干预结束后各组小鼠复发肿瘤组织中HER2相关信号通路中Total-Akt、p-Akt、p38、p-p38的表达及与细胞运动和黏附相关的基质蛋白细胞间黏附分子(E-cadherin)、上皮-间质转化标记物波形蛋白(Vimentin)的表达情况.结果 ①各组小鼠肿瘤复发率差异无统计学意义(P＞0.05).对照组治疗结束时平均瘤积为11.11 cm3,中药组为5.56 cm3,组间差异有统计学意义(P=0.037)；对照组平均肺转移结节数为16个,中药组为10个,中药组肺转移抑制率达37.85％,但组内差异无统计学意义(P＞0.05).②中药组、西药组、联合组p-p38及p-Akt表达含量较对照组明显下调(P＜0.05)；对照组与联合组E-cadherin几乎不表达,中药组与西药组E-cadherin表达显著增加(P＜0.05).各组复发肿瘤组织中Vimentin表达水平相似.结论 乳癌术后方能够抑制HER-2/neu转基因小鼠术后乳腺复发肿瘤瘤积的增长,阻断HER2介导的p38 MAPK及PI3K-Akt信号通路,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用；乳癌术后方能够上调细胞间黏附分子E-cadherin的表达,其可能通过增加细胞间的黏聚力,维持乳腺上皮细胞的完整性,发挥抗复发转移作用.
-
骨唾液酸蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞P13K-AKT信号通路的影响
目的:探讨骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞P13K-AKT信号通路的影响.方法:BSP基因沉默的乳腺癌MDA-MB-231细胞(简称231 BO-BSP27)经重组人BSP(recombinant human BSP,rhBSP)和P13K-AKT抑制剂LY294002处理后,Western blotting检测磷酸化AKT水平的变化,实时定量PCR检测caspase-3、cyclin Dl mRNA表达水平,MTT法检测细胞增殖能力.结果:与BSP基因未沉默的对照组231 BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默的231 BO-BSP27细胞BSP蛋白表达明显下调(74.32±2.18)%(P<0.01);AKT磷酸化水平明显下降(33.30±2.61)%(P<0.01),而caspase-3和cyclin Dl mRNA表达分别上升和下降(1.000±0.000vs1.733±0.039,1.000±0.000vs0.370±0.012;均P<0.01);231 BO-BSP27细胞增殖能力显著下降(P<0.05).外源添加rhBSP蛋白分别上调231 BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化水平(17.86±2.27)%和(33.78±1.51)%(均P<0.01),231 BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达降低(1.000±0.039vs0.541±0.091,P<0.01)、cyclin Dl mRNA表达升高(1.000±0.000vs2.921±0.032,P<0.01),促进231 BO-Scrambled和231 BO-BSP27细胞的增殖(均P<0.01).LY294002则能逆转rhBSP对231BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化激活作用(P<0.05),使231BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达升高(P<0.01)、cyclin Dl mRNA表达降低(P<0.01),使该两种细胞增殖能力下降(均P<0.01).结击:BSP通过P13K-AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3和cyclin Dl的表达,并影响细胞的增殖.
关键词： 骨唾液酸蛋白 乳腺癌细胞 LY294002 PI3K-Akt信号通路 -
Akt、Bad在大鼠肝缺血再灌注中的变化及作用
目的:研究PI3K-Akt信号转导系统成员Akt1、Bad在大鼠肝缺血再灌注(IR)后的激活规律,探讨该通路在IR损伤中的作用.方法:将60只SD雄性大鼠随机分成4组:空白对照组(Sham)、缺血再灌注组(IR)、溶剂对照组(DMSO)、阻断剂组(LY),于复灌0、0.5、1、2、4 h各不同时间点取材,应用免疫组化和免疫印迹法测定肝组织中Akt1、p-Akt1等信号蛋白的表达;H-E染色观察肝组织显微结构;同时测定血清肝功酶水平.结果:IR组大鼠在各复灌时间点上都显示明显肝细胞损伤,并随复灌时间延长加重;肝细胞胞质内有p-Akt1(Thr-308)表达,并在复灌0.5 h达到高峰.应用PI3K特异性阻断剂LY294002后,大鼠p-Akt1(Thr-308)表达在复灌0.5 h较IR组明显减少(P<0.01),但血清肝功酶指标在复灌4 h才明显升高(P<0.01);同时,LY294002使Akt1下游底物Bad(Ser-136)磷酸化水平降低、细胞损伤加重.结论:在缺血再灌注过程中 PI3K-Akt信号转导通路的激活对肝脏起到了一定的保护作用.
关键词： 再灌注损伤 PI3K-Akt信号通路 肝 -
右美托咪定诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响
目的：右美托咪定神经保护作用受到广泛关注，文中旨在探讨右美托咪定对氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元细胞，随机分为溶剂对照a组（等渗盐水）、氯胺酮a组（氯胺酮终浓度为100μmol／L）、氯胺酮＋右美托咪定组[（100μmol／L氯胺酮＋浓度分别为0．001、0．01、0．1、1μmol／L的右美托咪定，分为0．001μmol／L亚组、0．01μmol／L亚组、0．1μmol／L亚组、1μmol／L亚组）]，处理24h后，用MTT法检测神经元存活率的变化。此外，再将神经元细胞随机分为溶剂对照b组（等渗盐水）、氯胺酮b组（氯胺酮终浓度为100μmol／L）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．1μmol／L右美托咪定＋100μmol／L氯胺酮）、LY294002预处理组（100μmol／L氯胺酮＋0．1μmol／L右美托咪定＋10μmol／L的LY294002），处理24 h后，用Hoechst33258核染色法检测神经元调亡，Western blot法测定神经元pAkt和cleaved-caspase-3蛋白水平。结果0．001μmol／L亚组、0．01μmol／L亚组、0．1μmol／L亚组、1μmol／L亚组的神经元存活率分别为（56．4±7．21）％、（60．5±4．2）％、（69．6±6．1）％、（84．5±7．3）％、（81．5±6．2）％，其中0．1μmol／L亚组右美托咪定产生的保护作用好（P＜0．05）。 LY294002预处理组、氯胺酮b组神经元凋亡率[（36．8±4．4）、（43．4±4．5）％]较溶剂对照b组、右美托咪定＋氯胺酮组[（7．5±1．1）、（16．4±3．6）％]显著增加（P＜0．01）。 LY294002预处理组、氯胺酮b组的pAkt蛋白水平（0．26±0．02、0．15±0．01）较溶剂对照b组（0．61±0．05）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．50±0．04）显著降低（P＜0．01）。LY294002预处理组、氯胺酮b组的cleaved-caspase-3蛋白水平（04．0±0．02、0．65±0．03）较溶剂对照b组（0．10±0．02）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．12±0．01）显著增加（P＜0．01）。结论右美托咪定可对抗氯胺酮引起的原代培养皮层神经元凋亡，其机制可能与激活PI3 K-Akt 信号通路有关。
关键词： 氯胺酮 右美托咪定 原代培养皮层神经元 凋亡 PI3K-Akt信号通路 -
基于微流控芯片技术橙皮苷抗肺肿瘤作用机制研究
目的 探究橙皮苷诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用机制.方法 基于微流控芯片技术采用Hoechst 33342/PI染色法检测橙皮苷对肺癌细胞A549凋亡坏死的影响;流式细胞术检测橙皮苷对肺癌细胞周期及凋亡的影响;实时荧光定量PCR技术检测相关基因VEGF、PI3K及PTEN的表达;Western blot 技术检测橙皮苷诱导肺癌细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、PTEN及凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白Cyclin B1的表达. 结果 橙皮苷作用于细胞G0/G1期及S期,阻滞细胞分裂,并呈现浓度依赖性诱导肺癌细胞凋亡,其细胞凋亡坏死率由正常对照组的(6.7±0.6)%增至(27.9±1.1)%;经橙皮苷诱导后的肺癌细胞中VEGF和PI3K基因表达相对降低,抑癌基因PTEN表达相对增加.Western blot 结果显示,经橙皮苷诱导的肺癌细胞中凋亡蛋白Bcl-2及周期蛋白Cyclin B1相对表达降低,PI3K-Akt信号通路蛋白Akt表达量与对照组比较明显减少,PI3K蛋白表达量相对增加,PTEN表达量无明显变化.结论 橙皮苷可能是通过干扰PI3K-Akt信号通路,阻碍肿瘤细胞的分裂并促进凋亡蛋白的产生,从而诱导肺癌细胞 A549 凋亡.
-
瑞芬太尼预处理对心力衰竭大鼠心肌的保护作用
目的 探讨瑞芬太尼预处理对阿霉素心衰大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤的作用.方法 60只成年♂ SD大鼠(250±20)g,尾静脉注射阿霉素2μg·g-1,每周1次,共6周,制成阿霉素心衰大鼠模型.随机将阿霉素心衰大鼠分为6组:对照组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)、10μg·L-1瑞芬太尼预处理组(RPC 1组)、30 μg·L-1瑞芬太尼预处理组(RPC 2组)、60 μg·L-1瑞芬太尼预处理组(RPC3组).采用Langendorff离体大鼠心肌灌注模型.除Sham组为持续灌注165 min外,所有心脏予以30 min缺血,90 min再灌注.IPC组在缺血前结扎左冠状动脉5 min,松开5 min,共3个循环.RPC组在缺血前给予含浓度分别为10、30、60μg·L-1的瑞芬太尼的K-H液灌注5 min后改用不含瑞芬太尼的K-H液灌注5 min,共3个循环.记录各组心脏在平衡末、再灌5 min、再灌30 min、再灌90min时的心率(HR)、左室发展压(LVDP)和左室压力升高或降低大速率(±dp/dtmax)、冠脉流量(CF)并测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.再灌末TTC法计算心肌缺血梗死区(IS/AAR).Western blot半定量检测p-Akt和 方向:麻醉药理学,通讯作者,Tel:0551-3869480,E-mail:zhangye_hassan@sina.com 总Akt的含量.结果 平衡灌注末各组间心功能指标(基础值)差异未见统计学意义(P>0.05).再灌5、30、90 min时,RPC 2组和RPC 3组的LVDP、±dp/dtmax、CF较 I/R组高,LDH值较I/R组低(P<0.05).灌注结束后,见RPC 2组、RPC 3组的IS/AAR较I/R小,p-Akt表达水平升高(P<0.05),而IPC组和RPC 1组的各项指标较I/R组无差异.结论 RPC在一定程度上减轻阿霉素心衰大鼠心肌缺血/再灌注损伤,而缺血预处理对阿霉素心衰大鼠心肌缺血/再灌注损伤无明显保护作用.
-
七氟烷预处理对成年及幼年大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用的对比研究
目的 观察比较七氟烷预处理对成年及幼年大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用及可能机制.方法 36 只成年♂ SD 大鼠随机分为3组:对照组(sham 1组),缺血/再灌注组(I/R 1组),七氟烷预处理组(S 1组);36只幼年♂ SD大鼠随机分为3组:对照组(sham 2组),缺血/再灌注组(I/R 2组),七氟烷预处理组(S 2组).采用 Langendorff 离体大鼠心肌灌注模型.对照组,自然灌流120 min;缺血/再灌注组,平衡灌注30 min,缺血30 min,复灌60 min;七氟烷组,平衡灌注15 min,含七氟烷的K-H 液10 min,洗出5 min,缺血30 min,再灌注60 min.记录各组心脏在平衡末及复灌15 min的左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室压力升高或降低大速率(±dp/dtmax)、心率(HR).复灌15 min时,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫印迹法(Western blot)半定量检测p-Akt和总Akt的含量;复灌末TTC法计算心肌梗死面积百分比.结果 平衡灌注末各组间心功能指标(基础值)差异未见统计学意义(P>0.05).灌注结束时,S 1组较I/R 1组以及S 2组较I/R 2组心功能明显改善,心肌梗死面积减少和凋亡指数降低(P<0.05),同时p-Akt表达水平升高(P<0.05).结论 1 MAC的七氟烷预处理可能通过增强 Akt的磷酸化来减轻成年及幼年大鼠的心肌缺血/再灌注损伤.
-
S100 A6基因作用对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响及其机制
目的 观察S100A6基因转染、抑制对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 将宫颈癌Hela细胞分为观察1组、对照1组和空白1组.观察1组转染pcDNA3.0-S100A6真核表达载体,对照1组转染pcDNA3.0空载体质粒,空白1组不转染.将宫颈癌CaSki细胞分为观察2组、对照2组及空白2组.观察2组转染S100A6 siRNA,对照2组转染无关序列,空白2组不转染.转染24 h后收集各组细胞.①采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞S100A6 mRNA相对表达量;②采用细胞迁移实验观察各组细胞迁移能力(以穿膜细胞数表示);③采用Western blotting法检测各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin)和PI3K-Akt信号通路相关蛋白(p-AKT、t-AKT、Snail、Twist)表达量;④继续培养24、48、72 h,采用CCK-8法观察各组细胞增殖能力(以OD450表示).结果 ①转染24 h观察1组、对照1组、空白1组Hela细胞S100A6 mRNA相对表达量分别为3.87 ±0.86、1.04 ±0.08、0.97 ±0.11,观察1组Hela细胞S100A6 mRNA相对表达量与对照1组和空白1组相比,P均<0.05;观察2组、对照2组、空白2组CaSki细胞S100A6 mRNA相对表达量分别为0.43 ±0.07、1.12 ± 0.09、0.98 ±0.12,观察2组CaSki细胞S100A6 mRNA相对表达量与对照2组和空白2组相比,P均<0.05.②转染24 h行细胞迁移实验,观察1组、对照1组、空白1组穿膜细胞数分别为(48.26 ±4.89)、(21.31 ±4.27)、(20.12 ±6.23)个,观察1组穿膜细胞数与对照1组和空白1组相比,P均<0.05;观察2组、对照2组、空白2组穿膜细胞数分别为(81.36 ±8.33)、(147.49 ±6.98)、(142.23 ±9.16)个,观察2组穿膜细胞数与对照2组和空白2组相比, P均<0.05.③转染24 h,与对照1组和空白1组相比,观察1组Hela细胞E-cadherin 蛋白表达量较低(P均<0.05),N-cadherin、p-AKT、Snail、Twist蛋白表达量较高(P均<0.05);与对照2组和空白2组相比,观察2组CaSki细胞E-cadherin蛋白表达量较高(P均<0.05),N-cadherin、p-AKT、Snail、Twist蛋白表达量较低(P均<0.05).④转染24 h后继续培养24、48 h,三组细胞OD450相比,P均>0.05.继续培养72 h,观察1组Hela细胞OD450高于对照组和空白组(P均<0.05),观察2组CaSki细胞OD450低于对照2组和空白2组(P均<0.05).结论 S100A6促进宫颈癌细胞增殖和迁移,这可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而促宫颈癌细胞EMT实现的.
关键词： S100A6蛋白 宫颈癌 上皮间质转化 PI3K-Akt信号通路
