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17β雌二醇对丙泊酚诱导皮层神经元凋亡的影响
目的：探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元，随机分为三组：溶剂对照组（给予等溶剂20％脂肪乳），丙泊酚组（丙泊酚终浓度为500μmol／L），17β雌二醇＋丙泊酚组（17β雌二醇终浓度为0．1μmol／L，丙泊酚终浓度为500μmol／L）。上述药物处理皮层神经元12 h后，用Hoechst 33258核染色法和TUNEL法检测皮层神经元调亡，Western－blot法测定神经元Bcl－2，Bax和cleaved caspase－3蛋白的水平。结果与溶剂对照组比较，丙泊酚组神经元凋亡率显著性增加（P＜0．01），Bcl－2蛋白水平显著性下降（P＜0．01），Bax蛋白水平显著性增加（P＜0．01），Bcl－2／Bax显著性降低（P＜0．01），cleaved caspase－3蛋白水平显著性增加（ P＜0．01）。与丙泊酚组比较，17β雌二醇＋丙泊酚组神经元凋亡率显著性下降（ P＜0．01），Bcl－2蛋白水平显著性增加（P＜0．01）， Bax蛋白水平显著性下降（P＜0．01），Bcl－2／Bax显著性增加（P＜0．01），cleaved caspase－3蛋白水平显著性下降（P＜0．01）。结论17β雌二醇可通过影响Bc1－2和Bax蛋白水平抑制皮层神经元凋亡，产生保护作用。
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丙泊酚诱导大鼠原代培养皮层神经元凋亡
目的：探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7 d 的大鼠皮层神经元,随机分为两组：对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12 h 后,采用 MTT 法检测两组神经元存活率,Hoechst33258核染色法检测神经元的凋亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位,Western blot 法检测神经元 cyt-c 和cleaved-caspase-3蛋白含量。结果丙泊酚组皮层神经元存活率(54.4%±6.4%),明显低于对照组(99.8%±4.1%)(P <0.05)；神经元凋亡率(46.5%±5.3%),明显高于对照组(7.2%±0.9%)(P<0.05),线粒体膜电位(59.6%±4.3%)明显低于对照组(99.9%±5.7%)(P <0.05)；cyt-c 蛋白含量(0.38±0.03),明显高于对照组(0.15±0.02)(P <0.05),cleaved-caspase-3蛋白含量(0.46±0.04)明显高于对照组(0.13±0.02)(P <0.05)。结论丙泊酚可诱导发育期原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与抑制线粒体膜电位,增加 cyt-c 和 cleaved-caspase-3蛋白含量有关。
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17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响
目的：17β雌二醇的神经保护作用受到广泛关注，文中旨在探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元，随机分为3组：对照组（给予等体积20％脂肪乳），丙泊酚组（500μmol／L丙泊酚），丙泊酚＋17β雌二醇组（500μmol／L丙泊酚，0．1μmol／L 17β雌二醇）。药物处理12 h后，在光镜下观察各组神经元的形态变化，MTT法检测神经元存活率的变化，流式细胞仪检测神经元的调亡，罗丹明染色检测线粒体膜电位的变化。结果与对照组比较，丙泊酚组光镜下神经元数量明显减少，胞体立体感消失，细胞轮廓不清，神经元轴突断裂。与丙泊酚组神经元形态变化比较，丙泊酚＋17β雌二醇组明显改善。丙泊酚组神经元存活率、线粒体膜电位[（52．3±5．2）％、（59．1±5．3）％]较对照组[（99．9±3．6）％、（99．6±5．8）％]、丙泊酚＋17β雌二醇组[（90．1±7．2）％、（89．2±7．1）％]均显著下降（P＜0．01）。丙泊酚组神经元凋亡率[（43．4±4．6）％]较对照组[（3．1±0．2）％]、丙泊酚＋17β雌二醇组[（22．3±3．2）％]均显著增加（P＜0．01）。结论17β雌二醇可能通过抑制神经元线粒体膜电位的下降对丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡产生保护作用。
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右美托咪定诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响
目的：右美托咪定神经保护作用受到广泛关注，文中旨在探讨右美托咪定对氯胺酮诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元细胞，随机分为溶剂对照a组（等渗盐水）、氯胺酮a组（氯胺酮终浓度为100μmol／L）、氯胺酮＋右美托咪定组[（100μmol／L氯胺酮＋浓度分别为0．001、0．01、0．1、1μmol／L的右美托咪定，分为0．001μmol／L亚组、0．01μmol／L亚组、0．1μmol／L亚组、1μmol／L亚组）]，处理24h后，用MTT法检测神经元存活率的变化。此外，再将神经元细胞随机分为溶剂对照b组（等渗盐水）、氯胺酮b组（氯胺酮终浓度为100μmol／L）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．1μmol／L右美托咪定＋100μmol／L氯胺酮）、LY294002预处理组（100μmol／L氯胺酮＋0．1μmol／L右美托咪定＋10μmol／L的LY294002），处理24 h后，用Hoechst33258核染色法检测神经元调亡，Western blot法测定神经元pAkt和cleaved-caspase-3蛋白水平。结果0．001μmol／L亚组、0．01μmol／L亚组、0．1μmol／L亚组、1μmol／L亚组的神经元存活率分别为（56．4±7．21）％、（60．5±4．2）％、（69．6±6．1）％、（84．5±7．3）％、（81．5±6．2）％，其中0．1μmol／L亚组右美托咪定产生的保护作用好（P＜0．05）。 LY294002预处理组、氯胺酮b组神经元凋亡率[（36．8±4．4）、（43．4±4．5）％]较溶剂对照b组、右美托咪定＋氯胺酮组[（7．5±1．1）、（16．4±3．6）％]显著增加（P＜0．01）。 LY294002预处理组、氯胺酮b组的pAkt蛋白水平（0．26±0．02、0．15±0．01）较溶剂对照b组（0．61±0．05）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．50±0．04）显著降低（P＜0．01）。LY294002预处理组、氯胺酮b组的cleaved-caspase-3蛋白水平（04．0±0．02、0．65±0．03）较溶剂对照b组（0．10±0．02）、右美托咪定＋氯胺酮组（0．12±0．01）显著增加（P＜0．01）。结论右美托咪定可对抗氯胺酮引起的原代培养皮层神经元凋亡，其机制可能与激活PI3 K-Akt 信号通路有关。
关键词： 氯胺酮 右美托咪定 原代培养皮层神经元 凋亡 PI3K-Akt信号通路 -
丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元BDNF 和 p75 NTR水平的影响
目的：探讨丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元，随机分为两组：溶剂对照组（给予相同容积的20％脂肪乳剂），丙泊酚组（丙泊酚终浓度为500μmol／L），上述药物处理皮层神经元12 h后，用光学显微镜观察两组皮层神经元的形态学变化，MTT法检测神经元存活率的变化，Western blot法检测神经元脑源性神经营养因子（ BDNF）、p75神经营养因子受体（p75NTR）以及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白水平的变化。结果与溶剂对照组比较，丙泊酚组光镜下观察显示皮层神经元数量明显减少，胞体立体感消失，细胞轮廓不清，神经元轴突断裂。神经元存活率显著性下降（P＜0.01），BDNF和Bcl-2蛋白水平显著性下降（P＜0.01）， p75NTR蛋白水平显著性增加（ P＜0.01）。结论丙泊酚可引起发育期原代培养皮层神经元损伤，其机制可能与下调BDNF、Bcl-2和上调p75 NTR蛋白水平有关。
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氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡
目的：探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,用 MTT 法检测不同浓度氯化锂(0．1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组：溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0．1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot 法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β( pGSK-3β)和裂解半胱天冬酶-3( cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0．01),神经元凋亡率显著增加(P<0．01),pGSK-3β蛋白水平显著下降(P<0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0．01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P <0．01),神经元凋亡率显著下降(P <0．01),pGSK-3β蛋白水平显著增加(P <0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P <0．01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pGSK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。
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右美托咪定对丙泊酚诱导的大鼠原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制
目的 探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制.方法 原代培养7d的大鼠皮层神经元,随机分为4组:溶剂对照组(给予等溶剂的20％脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),右美托咪定+丙泊酚组(终浓度分别为0.1 μmol/L,500 μmol/L)和LY294002预处理组(右美托咪定终浓度为0.1 μmol/L,丙泊酚终浓度为500 μmol/L,LY294002终浓度为10 μmol/L).上述药物处理12h后,用MTT法检测各组神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,Western blot法测定神经元pAkt和bcl-2蛋白水平.结果 与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降[(53.4±4.2)％ vs (99.9±6.3)％;P＜0.01],神经元凋亡率显著增加[(44.6±4.3)％ vs(5.8±0.4)％;P＜0.01],pAkt[(0.41±0.03) vs (0.86±0.07)]和bcl-2[(0.15±0.02) vs (0.72±0.03)]蛋白水平显著降低(均P＜0.01).与丙泊酚组比较,右美托咪定+丙泊酚组神经元存活率(86.4±5.3)％显著增加(P＜0.01),神经元凋亡率(23.1±3.5)％显著下降(P＜0.01),pAkt蛋白水平(0.8±0.03)和bcl-2蛋白水平(0.52±0.05)显著增加(P＜0.01).PI3K抑制剂LY294002抑制了右美托咪定的神经保护作用,与右美托咪定+丙泊酚组比较,LY294002预处理组神经元存活率(64.3±5.1)％显著下降(P＜0.01),神经元凋亡率(38.8±4.9)％显著增加(P＜0.01),pAkt蛋白水平(0.52±0.04)和bcl-2蛋白水平(0.31±0.02)显著降低(P＜0.01).结论 右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K-Akt-Bcl-2信号通路有关.
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右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡
目的 探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制.方法 体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予500 μmol/L丙泊酚和(或)不同浓度右美托咪定处理12 h后,分为丙泊酚组、右美托咪定+丙泊酚组,对照组给予同溶剂的20％脂肪乳,用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,蛋白质印迹法(Western blotting)测定神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平.结果 与对照组比较,丙泊酚组神经元存活率明显下降,神经元凋亡率明显增加,pCREB蛋白水平明显降低,Cyt-C蛋白水平明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01).与丙泊酚组比较,右美托咪定+丙泊酚组神经元存活率明显增加,神经元凋亡率明显下降,pCREB蛋白水平明显增加,Cyt-C蛋白水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与增加pCREB蛋白水平,降低Cyt-C蛋白水平有关.
