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反复惊厥和大剂量抗痫药对大鼠海马pCREB的影响及草果知母汤的干预作用
目的 探讨反复惊厥发作和大剂量苯妥英钠造成大鼠认知障碍模型中磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)的变化,并观察草果知母汤的作用.方法 利用戊四唑(PTZ)诱导癫痫模型,再通过每日PTZ点燃癫痫和大剂量苯妥英钠注射造成大鼠认知功能障碍,然后分为每日发作模型组(A)、每日发作草果知母汤治疗组(B)、每日发作尼莫地平治疗组(C)、大剂量苯妥英钠组(D)、苯妥英钠草果知母汤治疗组(E)、苯妥英钠尼莫地平治疗组(F),用免疫组化和Western blotting方法检测大鼠海马组织pCREB的变化.结果 B、C组大鼠pCREB表达均有明显提高,与A组比较,差异有显著性;E、F组大鼠海马部位的pCREB的变化与D组比较差异亦有显著性.结论 草果知母汤改善癫痫每日发作和苯妥英钠所致大鼠的认知障碍可能是通过提高pCREB表达而发挥作用的.
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脑源性神经营养因子对大鼠惊厥性脑损伤的作用及调控因素
目的 观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)在活体内对海马BDNF表达的影响及其与神经元凋亡间的关系.方法 80只Wistar大鼠,选取40只作为持续惊厥状态(SC)组,制作Wistar鼠SC模型,进一步分为SC-对照亚组(脑室内不注射)、SC-NS亚组(脑室内注射生理盐水)、SC-BDNF亚组(脑室内注射BDNF)和SC-抗pCREB抗体亚组(脑室内注射抗pCREB抗体),每组各10只大鼠.余下40只大鼠作为对照(NC)组,不制备SC模型,进一步分组和处理方法同SC组.采用ELISA检测海马BDNF含量( pg·μg-1),Annexin-V检测海马细胞凋亡.结果 ①NC-BDNF亚组,注射侧海马BDNF含量为17.24±2.23,明显高于NC-对照亚组5.91±1.63;与NC-对照亚组相比,SC-对照亚组BDNF含量增高,达13.37±5.61.与SC-NS亚组相比,SC-BDNF亚组海马BDNF含量达55.40±4.11,呈显著性增高(P＜0.01),同时,该侧海马细胞凋亡发生率从(8.36±0.61)%降低至(4.10±1.00)%(P＜0.01).②NC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量为5.94±0.60,与NC-对照亚组差异无统计学意义.与SC-NS亚组(15.77±2.99)相比,SC-抗pCREB抗体亚组注射侧海马BDNF含量急剧下降,为5.53±1.11,并伴有该侧海马细胞凋亡发生率的增加,由(8.36±0.61)%增至(9.37±2.50)% .③脑室内注射将诱导注射侧海马神经细胞凋亡,而对注射对侧海马影响不大.结论 ①脑室内注射外源性BDNF可影响同侧海马内源性BDNF表达,并对神经元凋亡有一定抑制作用.②选择性阻断CREB的磷酸化,可能通过抑制BDNF的表达,导致神经细胞凋亡.
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氯胺酮抑制昆明小鼠扣带后回Fos表达
目的 探讨慢性氯胺酮使用对扣带后回c -Fos与磷酸化的转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP responsive element binding protein,CREB)的影响.方法 成年昆明小鼠,采用随机数字表法分组:腹腔注射50、100、200 mg/kg组以及生理盐水组,5d给药1次,共注射6次后4％多聚甲醛灌注固定、取脑、30μm冰冻切片,应用免疫组化法检测c-Fos和磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP responsive element binding protein,pCREB)的表达.结果 ①扣带后回和压部后皮质有一定的c -Fos与pCREB基础；②氯胺酮慢性使用扣带后回神经元的c-Fos表达减少,50 mg/kg组、100 mg/kg组、200 mg/kg组分别下降到生理盐水组的80％、43％和37％.而pCREB的表达增加,50 mg/kg组、100 mg/kg组、200 mg/kg组分别增加到生理盐水组的180％、195％和170％.结论 慢性氯胺酮使用抑制昆明小鼠扣带后回神经元c-Fos表达,其抑制可能与pCREB表达增加有关.
关键词： c-fos 磷酸化cAMP反应元件结合蛋白 磷酸化 前脑 -
吗啡对原代培养大鼠皮质神经元神经甾体水平的影响
目的 探讨吗啡慢性处理对大鼠大脑皮质神经元合成释放神经甾体水平的影响及其机制.方法 建立原代培养大鼠大脑皮质神经元吗啡依赖样模型,固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用法测定细胞培养液中神经甾体水平;免疫印迹法检测神经元中p-CREB水平.结果 与盐水对照组相比,吗啡(1 μmol·L-1)处理使PREG和DS的水平降低(P＜0.01);μ-受体激动剂DAMGO使PREG、DS和PS水平下降,AP水平增高;与吗啡单独处理组相比,μ-阿片受体拮抗剂CTAP与吗啡联合处理使PREG增加(P＜0.01).与盐水对照组相比,吗啡或DAMGO慢性处理均可增加神经元内p-CREB的水平(P＜0.01);与吗啡处理组相比,CTAP抑制吗啡诱导的p-CREB的增加.结论 μ-阿片受体参与了介导吗啡慢性处理对皮质神经元神经甾体合成释放的影响;神经元内p-CREB水平的变化反映了吗啡引起的神经元适应性改变,提示神经甾体水平的变化可能与吗啡依赖有关.
关键词： 阿片受体 吗啡 神经甾体 神经元 磷酸化cAMP反应元件结合蛋白 -
噻萘普汀与碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马pCREB表达的影响
目的 研究噻萘普汀与碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马磷酸化Camp反应元件结合蛋白(Pcreb)表达的影响.方法 将大鼠随机排列法分为抑郁模型组、噻萘普汀组、碳酸锂组和对照组.模型组、噻萘普汀组和碳酸锂组给予21 d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间噻萘普汀组每天灌胃噻萘普汀(50mg/kg),碳酸锂组每天灌胄碳酸锂(60mg/kg),模型组和对照组每天灌胃等体积的生理盐水.行为学检测应用open-field法和液体消耗实验.采用Western-blotting法检测各组大鼠海马Pcreb的表达情况.结果 应激后模型组水平穿越格数[(23.2±23.0)格]、竖立次数[(8.1±7.2)次]、修饰次数[(3.6±3.5)次]、糖水消耗百分比[(55.4±11.7)%]均显著低于对照组[分别为(46.0±18.9)格、(20.3±11.3)次、(8.4±2.7)次、(68.5±8.2)%;均P＜0.01].应激后噻萘普汀组水平穿越格数[(28.1±23.0)格]、竖立次数[(12.1±9.4)次]和修饰次数[(5.5±3.2)次]低于对照组(P＜0.05),与模型组差异无显著性;糖水消耗百分比[(62.7±10.6)%]与对照组差异无显著性,但高于模型组(P＜0.05).应激后碳酸锂组水平穿越格数和糖水消耗百分比低于对照组(P＜0.05),竖立次数和修饰次数低于对照组(P＜0.01),各项数值均高于模型组,但差异无显著性(P＜0.05).在Western-blotting法检测中,模型组大鼠海马Pcreb的表达水平显著低于对照组(P＜0.01);噻萘普汀组大鼠海马Pcreb的表达水平与对照组差异无显著性(P＞0.05),但显著高于模型组(P＜0.01);碳酸锂组大鼠海马Pcreb的表达水平显著低于对照组(P＜0.01).高于模型组(P＜0.01).结论 噻萘普汀可以逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中Pcreb表达的降低;碳酸锂可以部分逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中Pcreb表达的降低.
关键词： 磷酸化cAMP反应元件结合蛋白 慢性应激 海马 噻萘普汀 碳酸锂 -
缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马p-CREB阳性神经元数量的影响
目的 探讨佳剂量缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠行为及其大脑海马磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP responsive element-binding protein,p-CREB))阳性神经元的影响.方法 将35只大鼠随机均分为正常对照组、未用药模型组、阴性对照模型组、阳性对照模型组、低剂量缬草模型组、中剂量缬草模型组和高剂量缬草模型组.在用药期间,每周测试大鼠体质量、自来水及1% 糖水摄取量1次.用药后,计数大脑海马神经元数量,确定缬草佳剂量.然后根据前述方法,在灌药结束后灌注和固定所有大鼠.采用中性红染色、免疫组化等方法对大鼠海马p-CREB和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)阳性神经元进行检测. 结果高剂量(100 mg·kg-1·d-1)缬草能促使抑郁大鼠1%糖水摄取量恢复至正常水平,还可使抑郁大鼠大脑海马神经元以及p-CREB阳性神经元数量恢复到正常水平.正常对照组大鼠大脑海马神经元的BDNF染色较浅淡,其余各组大鼠大脑海马神经元的BDNF阳性染色没有明显差异. 结论本研究高剂量(100 mg·kg-1·d-1)缬草可能是治疗慢性应激导致大鼠抑郁症的佳剂量.缬草可以改善抑郁大鼠的行为活动,恢复大脑海马神经元以及p-CREB阳性神经元数量到正常水平.
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海马神经元无镁致痫性损伤对CREB磷酸化水平的影响
目的:观察原代培养的海马神经元经无镁人工脑脊液诱发癫痫样放电后,cAMP反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)磷酸化表达水平的变化.方法:将所培养的神经元随机分成癫痫组和对照组,癫痫组中的神经元培养至第10天时,经无镁人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)处理3h建立癫痫样放电模型,对照组中的神经元培养至第10天时,使用正常人工脑脊液处理3h.使用Western blot检测p-CREB和β-actin的表达,免疫荧光双重标记磷酸化CREB(p-CREB)和神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的表达.结果:Western blot显示p-CREB水平在癫痫样放电后2h即较对照组增强且在6h达到高峰,在12h和24 h都维持在增强水平,差异皆有统计学意义(P＜0.01).取癫痫样放电后6h的神经元行免疫荧光检测,其荧光强度绝对值较对照组明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:p-CREB水平在海马神经元无镁致痫性损伤后增强,可能在癫痫样放电中起到重要作用.
关键词： 癫痫 海马神经元 磷酸化cAMP反应元件结合蛋白 -
右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡
目的 探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制.方法 体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予500 μmol/L丙泊酚和(或)不同浓度右美托咪定处理12 h后,分为丙泊酚组、右美托咪定+丙泊酚组,对照组给予同溶剂的20％脂肪乳,用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,蛋白质印迹法(Western blotting)测定神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平.结果 与对照组比较,丙泊酚组神经元存活率明显下降,神经元凋亡率明显增加,pCREB蛋白水平明显降低,Cyt-C蛋白水平明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.01).与丙泊酚组比较,右美托咪定+丙泊酚组神经元存活率明显增加,神经元凋亡率明显下降,pCREB蛋白水平明显增加,Cyt-C蛋白水平明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与增加pCREB蛋白水平,降低Cyt-C蛋白水平有关.
