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人参皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究
目的:观察人参皂甙(GS)是否具有诱导髓性白血病HL-60细胞株的凋亡作用.方法:取不同浓度的GS处理HL-60细胞,观察GS所致的细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞DNA含量的改变,并进行DNA片段分析(DNA Ladder);用Annexin V-FITC试验法分析细胞凋亡百分率.结果:人参皂甙能够抑制HL-60细胞生长,在一定剂量和时间范围内可引起细胞凋亡.结论:提示人参皂甙能特异性地诱导HL-60细胞凋亡,可为临床应用人参皂甙作为化疗药物的辅助剂治疗白血病提供实验依据.
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蝌蚪提取液对HL-60细胞相关癌基因表达的影响
目的 研究蝌蚪提取液(T871-3)对白血病细胞的作用机制。 方法 利用细胞形态学观察、细胞化学、TUNEL法等技术，并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术，观察T871-3诱导HL-60细胞分化和凋亡过程中c-myc、c-myb、bcl-2癌基因表达的变化。 结果 1.T871-3能抑制HL-60细胞分裂增殖。2.T871-3在低浓度时诱导HL-60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化，高浓度时诱导细胞凋亡。3.T871-3诱导HL-60细胞分化的过程伴随着c-myc、c-myb癌基因表达的下调，诱导HL-60细胞凋亡的过程伴随着c-myc、bcl-2癌基因表达的下调。 结论 T871-3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL-60细胞分化和凋亡的作用。
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二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞株N-ras基因表达的影响
目的: 研究二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid, EPA )是否协同视黄酸(retinoic acid, RA)影响HL-60细胞的增殖与分化功能及相应分子机制.方法: 流式细胞仪(FCM)测定细胞增殖功能;NBT还原实验鉴定HL-60细胞分化;Western blot法分析p21N-ras 表达.结果: EPA和RA联合应用能增强HL-60细胞的增殖抑制和分化效应,同时细胞内p21N-ras 表达降低.结论: EPA和RA可能通过下调节N-ras基因的蛋白质表达,发挥它们对HL-60细胞增殖与分化功能的联合效应.
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CAG方案对HL-60细胞及耐药株作用机理的研究
目的 研究小剂量阿糖胞苷和阿克拉霉素联合G-CSF(CAG方案)对HL-60细胞及其耐药株HL-60/A的作用机理.方法 以白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60/A为实验模型,模拟临床给药方式,体外加入Ara-C、ACR、G-CSF三药,作用24、48小时后收集细胞,分别进行细胞计数,细胞形态观察,MTT法检测不同药物对两种细胞株的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Annexin V,细胞分化抗原CD11b以及进行细胞周期分析.结果 经CAG作用48h后,两种细胞株数量明显减少,形态显示凋亡小体增多;早期凋亡标记AnnexinV明显增高,CD11b表达轻度升高,与CA组比较,结果有显著差异(P＜0.05).细胞周期分析显示,CAG作用24h后,与CA组比较,S期细胞比例增高(P＜0.05);48 h后比例下降,结果未见明显差异(P＞0.05).HL-60细胞与HL-60/A细胞比较,两种白血病细胞株经CAG作用48 h后,在细胞数量、细胞形态、凋亡细胞比例、CD11b表达及S期细胞比例的改变方面未见明显差异.结论 CAG方案对白血病细胞株HL-60、HL-60/A的作用机制主要是通过G-CSF促使白血病细胞进入细胞周期S期,增加小剂量Ara-C、ACR对白血病细胞的细胞毒性,以诱导细胞凋亡为主,轻度诱导分化.
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DAG方案对HL-60细胞株作用机制的体外研究
目的:从细胞水平探讨柔红霉素(DNR)和阿糖胞苷(Ara-C)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(DAG方案)能否提高抗肿瘤效果,并研究相应的作用机制.方法:以白血病细胞株HL-60为实验对象,分为DA方案组、DAG方案组和对照组3组.对照组不加任何药物;DA方案组为DNR加Ara-C;DAG方案组为DNR加Ara-C和G-CSF(G-CSF先于化疗药物前24 h加入).药物作用24、48 h后收集细胞,对各组分别进行细胞计数、细胞形态观察,并采用MTT法检测不同组别细胞株的生长抑制率,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡比例、细胞坏死比例.另对HL-60细胞单用G-CSF作用24 h后进行细胞周期分析,并行实时定量PCR以检测细胞内Ara-C相关代谢酶基因表达情况的变化.结果:化疗药物作用后,相对于对照组,DAG方案组与DA方案组细胞数量明显减少,形态显示有明显细胞核固缩现象,且可见凋亡小体形成.DAG方案组与DA方案组相比,前者细胞生长抑制率更高(作用48 h,为78.3%比72.1%)(P＜0.01).细胞凋亡分析显示,与DA方案组相比,DAG作用24 h后早期凋亡百分率增高(9.43%比7.52%),且差异有统计学意义(P＜0.05);作用48 h后,2组早期凋亡比例均下降.与对照组相比,DAG方案组与DA方案组细胞坏死百分率在药物作用24 h和48 h后均显著增高(DAG方案组分别为44.16%和57.59%:DA方案组分别为41.54%和58.22%),但2组间差异无统计学意义.相对于作用前,G-CSF单独作用HL-60 24 h,细胞周期分析显示,S期细胞比例增高[(39.91±1.16)%比(31.42+1.47)%](P＜0.05);实时定量PCR检测,细胞内Ara-C代谢酶中脱氧胞苷激酶(DCK)的基因表达增高,5'-核苷酸酶(5'-NT)基因表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而CDD的基因表达差异无统汁学意义.结论:G-CSF联合DA方案能显著提高对HL-60细胞株生长的抑制率,其作用机制主要为促肿瘤细胞坏死,轻度促细胞凋亡;联合G-CSF可促使白血病细胞进入S期的比例增高,同时使细胞内DCK基因表达增高,可能增强活性形式三磷酸阿糖胞苷(Ara-CTP)的生成,从而增强了Ara-C的细胞毒性作用.
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热休克蛋白90抑制剂DMAG对白血病细胞株HL-60的作用
目的 研究热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(DMAG)对白血病细胞株HL-60的抑制作用及相关机制.方法 通过MTT法、流式细胞术检测HL-60细胞在DMAG作用下增殖及凋亡情况;流式细胞术检测HL-60细胞周期的改变;流式细胞术及Westen blot法检测HL-60细胞Raf蛋白含量;RT-PCR法检测raf-mRNA表达量的变化.结果 DMAG能抑制HL-60细胞的生长,并诱发凋亡.细胞周期分析显示,DMAG作用后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.DMAG能降低HL-60细胞Raf蛋白的含量,但raf-mRNA表达量无明显变化.结论 DMAG能引起HL-60细胞的凋亡,抑制其生长.DMAG引起HL-60细胞凋亡的机制与降低Raf蛋白含量有关.
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环孢菌素A诱导人白血病HL-60细胞株凋亡机制的研究
目的:观察环孢菌素A对人白血病HL-60细胞株凋亡的影响及其作用机制.方法:采用瑞氏染色、流式细胞仪、TUNEL法观察环孢菌素A对HL-60细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响HL-60细胞凋亡时bcl-2基因表达的改变情况.结果:20 mg/L环孢菌素A作用6 h可诱导HL-60细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪显示凋亡峰.细胞周期分析发现,环孢菌素A可使HL-60细胞生长阻滞于G0-G1期.环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组(P＜0.01).环孢菌素A处理组的bcl-2蛋白阳性率低于对照组(P＜0.01).结论:环孢菌素A可诱导HL-60细胞株凋亡,其机制可能是通过下调bcl-2基因表达.
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凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K2诱导HL-60细胞凋亡中的作用
目的 探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制.方法 采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达.结果 40μmol·L-1VK2作用HL-60细胞72h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性 (P＜0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P＜0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bcl-2表达明显下调(P＜0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P＞0.05).结论 VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bcl-2mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一.
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环孢菌素A对HL-60和K562细胞增殖的影响
目的探讨环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的影响.方法应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)观察环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的抑制率,应用电镜进行凋亡的检测.结果癌细胞在环孢菌素A作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现时间剂量效应关系.同时发现环孢菌素A能诱导HL-60、K562细胞凋亡.结论环孢菌素A可以通过诱导细胞凋亡而抑制HL-60和K562细胞增殖.
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Bcl-2反义核酸联合化疗药对HL60细胞及原代白血病细胞的作用
目的 应用Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODNs,ASPO)靶向诱导20例原代急性白血病细胞凋亡,并与多种常用化疗药联合,观察ASPO对原代急性白血病细胞及HL60细胞系的协同效应.方法 ①应用MTT比色法分析ASPO与常用化疗药物配伍协同作用特点;②细胞免疫化学染色检测 P26 Bcl-2蛋白表达;③台盼蓝拒染试验检测白血病细胞倍增时间;④丫啶橙(AO)染色, 流式DNA Content分析细胞凋亡率,电镜及DNA电泳观察凋亡细胞形态及分子水平的变化.结果① ASPO与除DNR,NVT外的7种(HHRT,VCR、MTX、Ara-c、 VP16、ACR、DEX)化疗药物均有联合增强或相加作用.② 12例Bcl-2蛋白抑制率大于0.4为A组,8例小于0.4为B组.A组的凋亡率和B组的凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),且A组的凋亡率高于B组(P<0.05).③原代急性白血病细胞ASPO组,Ara-c组和ASPO+Ara-c组,72 h细胞生长抑制检测发现ASPO+Ara-c组的细胞抑制率高于单用ASPO与单用Ara-c的细胞抑制率之和(P<0.01);④ A组的ASPO对细胞的抑制与细胞生长的倍增时间102.89±37.97呈正相关γ=0.577(P<0.05).结论 Bcl-2 ASPO能特异抑制白血病细胞(系)的Bcl-2蛋白表达;Bcl-2 ASPO 对倍增时间慢、BCL-2 蛋白表达高的原代白血病细胞作用效果好;Bcl-2的ASPO与多种化疗药物联合有潜在临床应用前景.
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FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖凋亡及cyclin D1、cyclin A表达的影响
目的 探讨FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖、凋亡及cyclin D1、cyclin A表达的影响.方法 体外构建FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染HL-60细胞,RT-PCR、流式细胞术(FCM)鉴定FLT3的表达;CCK-8法检测细胞增殖活力;FCM检测细胞周期;Annexin V染色法检测凋亡;RT-PCR及Western blot检测cyclin D1,cyclin A在mRNA、蛋白水平的表达.结果 FLT3-shRNA转染可下调FLT3的表达,它对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达(81.66±10.25)%,(76.76±11.23)%.FLT3表达下降后细胞增殖活力受到抑制,转染48 h抑制率达(31.66±2.97)%,72 h达(33.10±3.43)%;细胞生长曲线低平,缺乏指数增殖特征.与对照组比,转染48 h细胞周期重新分布,G0/G1期(58.48±6.17)%的明显上升,S期(27.72±5.10)%下降;细胞早期凋亡率(8.95±0.88)%上升;细胞内cyclin D1的mRNA、蛋白表达下降,cyclin A的表达无明显改变.结论 FLT3靶向RNA干扰通过下凋cyclin D1表达有效地抑制细胞增殖,具有潜在的临床应用价值.
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大蒜素对人白血病HL-60细胞生长和凋亡的影响
目的:探讨大蒜素对人白血病HL-60细胞生长抑制和诱导凋亡作用.方法:MTT比色分析法检测大蒜素对HL-60细胞生长的抑制作用,光镜观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术分析大蒜素对HL-60细胞凋亡的影响.结果:20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L大蒜素均能抑制HL-60细胞生长,其抑制作用呈剂量-效应关系,40 mg/L大蒜素能诱导HL-60细胞出现典型凋亡形态学变化.大蒜素诱导HL-60细胞有凋亡现象和阻滞细胞周期于G2/M期.结论:大蒜素对人白血病HL-60细胞生长有抑制作用,其抑制作用与诱导HL-60细胞凋亡和阻抑细胞周期有关.
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DC与CIK共培养后对白血病细胞杀伤活性的研究
目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与同源树突状细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对K562、HL-60白血病细胞细胞毒作用的影响.方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC),置于37℃,5%CO2培养箱培养2 h,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1:5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤K562和HL-60白血病细胞株的活性.结果DC-CIK共培养后增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P＜0.05);培养第14天,CIK中CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的比率分别为58.6%±7.3和26.5%±6.2,DC-CIK的CD3+CD8+、CD3+CD56+的比率分别为72.5%±4.2和38.4%±6.1,表达差异显著(P＜0.05);在2.5:1～20:1的效靶比范围内,DC-CIK对K562、HL-60细胞的杀伤活性较单纯CIK细胞组的杀伤活性要高(P＜0.05).结论DC与CIK共培养细胞是增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞.
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猪苓多糖对HL-60和K562癌细胞株的诱导分化作用
猪苓多糖是由中药猪苓中提取的一种多糖,研究证实其具有抑制肿瘤生长和增强肿瘤患者机体免疫功能的作用,与化学药物伍用可增强疗效和减轻副作用.2002年12月至2003年9月,我们观察了猪苓多糖对HL-60、K562癌细胞株的体外诱导分化作用.现将结果报告如下.
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rhTNF-α对HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达的影响
目的 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)对白血病细胞的作用及其机制,寻求白血病免疫疗法的理论依据.方法 以早幼粒白血病细胞株HL-60细胞为研究对象,利用苏木素染色及免疫细胞化学的方法 ,观察rhTNF-α对HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达的影响.结果 10 U/ml、100U/ml和500U/ml rhTNF-α与HL-60细胞共同培养2～24 h,除10 U/ml培养2 h组外余各组凋亡细胞数均明显高于空白对照组(P＜0.05),bcl-2基因阳性表达细胞数均明显低于空白对照组(P＜0.05),二者呈明显负相关.随rhTNF-α浓度增高,其作用增强,8 h为作用的高峰时间.结论 rhTNF-α能促进HL-60细胞的凋亡;抑制凋亡调控基因bcl-2的表达可能是TNF-α促进HL-60细胞凋亡的机制之一.
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昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的实验研究及CD11b在HL-60细胞株的表达
目的研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的影响及CD11b在HL-60细胞株的表达.方法用MTT法测定不同浓度LAMS对HL-60细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率,免疫组化法测定MMS对HL-60细胞株NP-κB家族P65亚单位的作用及CD11b表达.结果HL-60细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关;HL-60细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高;在LAMS浓度为0.75μg/ml作用下,P65在12h表达呈强阳性,24h几乎不表达,而IKbα在6h表达呈强阳性,CD11b不表达.结论LAMS可以诱导体外HL-60细胞凋亡,其中对凋亡的调控作用可能为负调控;LAMS能够调控NF-κB的表达,其表达有时间差异性.说明LAMS已作用于分子水平,且对CD11b在HL-60细胞株的表达无影响.
关键词： 昆布多糖硫酸酯 HL-60细胞株 调控 白血病/急性髓性白血病 -
米托蒽醌对人蛋白激酶CK2活性的影响
背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,它与人白血病关系密切,而米托蒽醌是一种临床常用的治疗急性白血病的特效药.本实验观察米托蒽醌对重组人蛋白激酶CE2全酶活性的影响,并将其作用于人早幼粒细胞白血病细胞HL-60,探讨它对HL-60细胞的影响.方法:体外将CK2 α'和β亚基重组构成CK2全酶,然后加入不同浓度的米托蒽醌与含有[γ-32P]标记ATP的反应混合液处理,CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[32P]放射活度来检测;然后采用台盼蓝拒染法观察米托蒽醌对HL-60细胞毒性,流式细胞术检测药物对细胞周期影响的情况,流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞凋亡的情况,后通过使用CK2特异的多肽底物检测药物对细胞内CE2活性的影响.结果:米托蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为0.66 μmol/L;进一步分析它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数KI值为0.25 μmol/L;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数KI值为0.66 μmol/L.它对HL-60细胞有很强的细胞毒性,并能诱导HL-60细胞发生凋亡,但对细胞内CK2活性无明显影响.结论:米托葸醌是蛋白激酶CK2的有效抑制剂,它能引起HL-60细胞凋亡,但其凋亡机制可能与胞内CK2活性无关.
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HL-60和SiHA细胞株ATM表达量与60Co照射后细胞周期阻滞之间的关系
背景与目的:毛细血管扩张性共济失调综合征( ataxia telangiectasia,AT)是由 ATM( ataxia telangiectasia mutant)基因所致,其突出特点是对放射线非常敏感,因此, ATM表达与放射敏感性应存在相关性.本研究旨在探讨两种肿瘤细胞株 ATM表达量与 60Co照射后细胞周期阻滞功能之间的关系.方法:使用半定量 RT-PCR和流式细胞仪技术检测 HL-60细胞和 SiHA细胞中 ATM mRNA和 ATM蛋白表达量,同时以 6、 10和 15 Gy 60Co照射 SiHA细胞, HL 60细胞仅以 6、 10 Gy照射,于照射后 6、 12、 24、 48及 60 h观察细胞周期阻滞现象和细胞凋亡率的变化.结果: HL 60细胞 ATM平均蛋白荧光强度为 14.11±2.38, SiHA细胞为 27.74± 1.16,约为 HL-60细胞的 2倍; HL-60细胞 ATM mRNA相对表达量为 0 .09, SiHA细胞为 0.80,约为 HL-60细胞的9倍.照射后 HL-60细胞和 SiHA细胞均表现 G2/M期阻滞.射线对 HL-60细胞周期阻滞功能明显较 SiHA细胞弱.结论:放射线对 HL-60细胞和 SiHA细胞的周期阻滞功能与 ATM表达量相符,即 ATM表达量低,细胞周期阻滞功能差.
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紫外辐射对白血病HL-60细胞增殖的影响
目的 探讨不同方案紫外线(UV)照射对白血病HL-60细胞增殖的影响,寻找合适的UV照射方法和照射量.方法 以HL-60细胞株为研究对象,并设置对照组和UV照射组(简称UV组),对照组为不接受UV照射的HL-60细胞,UV组细胞用波长为254 nm的UV照射,照射量分别为2mJoules(mJ)、6mJ、10 mJ和15 mJ;将UV组和HL-60对照组细胞置于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,用台盼蓝染色法测定各组细胞的死亡率.结果 未接受照射的对照组HL-60细胞增殖未受影响,未出现明显凋亡;用2～10 mJ UV照射1次,可对HL-60细胞的增殖产生抑制,细胞部分凋亡;经15mJUV照射1次或2～10mJ照射2次(每次间隔5d),多数HL-60细胞出现裂解或细胞完全死亡,不能再恢复增殖;10 mJ组细胞UV照射1次后第1天开始出现死亡,细胞死亡率在照射后第3天达高值,随着培养的继续,细胞死亡率逐渐降低,照射后第3天细胞死亡率与其他时间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 UV照射对HL-60细胞具有显著的杀伤效果,与高剂量UV照射治疗相比,较低UV照射剂量的重复照射也能杀伤HL-60细胞,诱导HL-60细胞的死亡.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 HL-60细胞株 紫外线 细胞死亡 -
3,6-二羟黄酮对HL-60细胞生长增殖的影响
目的 观察3,6-二羟黄酮对HL-60细胞的影响.方法 分别用台盼蓝拒染观察药物对细胞的毒性作用,流式细胞术、Hoechst 33258/PI荧光双染和琼脂糖凝胶电泳观察药物对细胞周期的影响以及凋亡情况.结果 3,6-二羟黄酮对HL-60细胞具有明显地细胞毒作用,呈一定的时效性;流式细胞术、荧光双染和琼脂糖凝胶电泳实验,发现了典型的凋亡细胞,且随药物浓度的增加,凋亡细胞数明显增加;然而统计学分析发现3,6-二羟黄酮并没有引起HL-60细胞周期的变化.结论 3,6-二羟黄酮能明显地抑制HL-60细胞的增殖,并能引起细胞的凋亡.
