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C57－ras 转基因小鼠模型杂交1代C B6 F1的生长发育特性
目的：测定自主建立的转基因致癌性模型C57－ras小鼠与BALB／c 小鼠杂交1代的生长发育特性参数，为该模型的商业化供应提供基础数据。方法将雄性转基因阳性C57－ras小鼠与野生型雌性BALB／c 小鼠交配，获得杂交1代（CB6F1 c－Ha－ras＋／－）并测定平均产仔数、离乳率、阳性鼠生长发育情况、转基因阳性率等参数。结果在生长发育方面，雌鼠平均每窝产子数为8只，离乳率为90％，雄雌性别比符合预期。 CB6 F1的平均出生重为（1．73±0．05）g，10周龄时阳性鼠平均体重雌性（24．38±1．74）g ，雄性（29．42±1．72）g。雄性鼠体重明显高于雌性，差异存在极显著性（ P＜0．01）；基因型检测阳性率为46．9％，符合遗传规律。结论转基因致癌性模型C57－ras小鼠与BALB／c小鼠杂交1代的生长发育特性正常，可实现规模化商业供应。
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C57-ras致癌性转基因模型杂交1代的脏器及血液学参数测定
目的 测定自主建立的致癌性转基因动物模型C57-ras小鼠杂交F1代的血液生理生化值和主要脏器重量,计算脏器系数并作统计学分析.方法 选取同窝C57-ras转基因阳性鼠和BALB/cJ小鼠交配后的杂交1代CB6F1-Tg小鼠,雌雄各半,采血,测量血液生理指标和血清生化指标,并称主要脏器重量.结果 血液生理指标中,CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠间比较,MCHC存在极显著性差异(P＜0.01);CB6F1-Tg转基因阳性(+/-)雄鼠和阴性(-/-)雄鼠间比较,PLT、PCT、EOS%、NEUT、NEUT%、LYM%存在显著性差异(P＜0.05),NEUT%、LYM%存在极显著性差异(P＜0.01).血清生化指标中,CB6F1-Tg阳性(+/-)雌鼠和阴性(-/-)雌鼠比较,ALT、TP、ALB存在显著性差异(P＜0.05),TG存在极显著性差异(P＜0.01).主要脏器重量和脏器系数均无显著性差异(P＞0.05).结论 测定了新建C57-ras致癌性转基因小鼠模型F1代阳性小鼠和阴性小鼠的主要生物学特性,为该模型在致癌性安全性评价等领域的实际应用中提供参考.
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C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究
目的 建立C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎的冷冻保种技术.方法 通过直接收集体内发育的2-细胞胚或者通过体外受精方法获得2-细胞胚,采用玻璃化冷冻法冷冻、复苏、移植,后代经PCR检测.结果 体内发育至2细胞期胚胎90枚,解冻后的平均复苏率是67.78％,移植产仔率是21.31％,后代的阳性率是23.08％；体外受精的2细胞期胚胎203枚,解冻复苏60枚,平均复苏率是63.33％,移植产仔率是15.78％,后代的阳性率是33.33％.结论 两种胚胎冷冻途径均获得了C57-ras癌症转基因动物模型阳性小鼠,建立了该模型动物的低温保存方法.
关键词： C57-ras转基因小鼠 体外受精 胚胎冷冻 2细胞期胚胎 -
C57-ras转基因小鼠模型的建立
目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型.方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核.通过PCR,real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达,并结合病理切片分析自发肿瘤的发生.结果:人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6％,共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传,建成C57-ras转基因小鼠系;C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致;3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生.结论:本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型.该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A),这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠,也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础.
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C57-ras转基因小鼠模型的MNU验证实验
目的:建立国内用于药物临床前安全评价致癌性实验替代方法的C57-ras转基因小鼠模型,并通过甲基亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)进行初步验证.方法:C57-ras转基因雄性小鼠与BALB/c雌性小鼠杂交,子代通过PCR进行基因型检测,获得C57-ras转基因和野生型小鼠.实验设定2个剂量,75 mg·kg-1 MNU和150 mg·kg-1 MNU单次腹腔注射给药,共5个组,其中75 mg·kg-1 MNU设3个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠溶媒组;(3)野生型小鼠MNU组;150 mg·kg-1 MNU设2个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠MNU组.其中溶媒组给予同等体积柠檬酸缓冲液,给药后观察29周,观察动物一般症状、生存率、肿物出现时间及大体剖检观察并进行组织病理学检查.结果:75 mg·kg-1 MNU给药组小鼠生存率高于150 mg·kg-1 MNU.75 mg·kg-1 MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤;150mg·kg-1MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤、肺脏腺瘤和直肠纤维肉瘤.野生型动物溶媒组和野生型动物MNU组均无肿瘤发生.结论:初步验证了自主建立的C57-ras转基因小鼠模型,该模型是临床前药物安全性评价致癌性实验快速替代实验候选模型之一.
关键词： C57-ras转基因小鼠 甲基亚硝基脲 验证实验 致癌性实验
