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Poly-k趋势检验在啮齿类动物致癌性实验中的应用
目的 探讨动物致癌性实验中肿瘤发生率的统计分析方法.方法 通过对传统的Cochran-Armitage趋势检验进行校正,采用Poly-k趋势检验比较药物的不同剂量组动物肿瘤发生率的差异,结合实例给出实现该分析过程的SAS程序.结果 对大鼠致癌性实验数据的分析表明,Cochran-Armitage线性趋势检验与Poly-k趋势检验的结果存在一定差异,其各自所反映的肿瘤发生率的趋势不尽相同.结论 在致癌性实验中,由于各剂量组生存情况的不同,可能会对肿瘤发生率的分析造成影响,Poly-k趋势检验可有效地解决这一问题.
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可移植性小鼠乳腺癌及胃纤维肉瘤株生长的实验观察
1973年,天津医科大学肿瘤研究室对近交系TA2小鼠自发乳腺肿瘤进行了同系移植,并建立一只可移植性小鼠乳腺癌瘤株,代号为MA737.1978年我们又用化学致癌物质甲基胆蒽在津白2系小鼠进行化学致癌性实验,诱发出小鼠腺胃纤维肉瘤,并进行了同系移植,而获成功,建立了一只可移植性小鼠腺胃纤维肉瘤株,代号为S784.目前,该两种动物肿瘤模型已广泛应用于肿瘤的科学实验研究领域中.为了解这两种动物肿瘤模型的生物学特性,我们观察了肿瘤瘤株的不同接种方法和接种不同的肿瘤细胞数量对肿瘤移植成功率的影响,现报道如下.
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中国人肝细胞系作为生物人工肝细胞材料的可行性探讨
目的:探讨国内人肝细胞系作为生物人工肝细胞材料的可行性. 方法:收集国内 9株人肝细胞系,体外培养,光镜、电镜下观察细胞生长分化特性;以流式细胞仪测定其 DNA指数值;测定培养上清中人白蛋白、尿素含量及安定转化量;将 CL-1细胞接种到裸鼠皮下,观察其致瘤性. 结果: 9株人肝细胞系中, CL-1细胞分化好, DI值与正常人淋巴细胞的 DI值接近,生物合成及代谢功能好,但有一定的致瘤性. 结论: 9株人肝细胞系中, CL-1人肝细胞系可能用作 BAL细胞材料,有进一步研究的价值.
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转基因小鼠模型在致癌实验中的应用进展
许多化学物质具有致癌作用.啮齿类动物的长期致癌实验研究,广泛应用于评价化学物质潜在的致癌作用.然而,由于这类研究具有使用动物数量多、周期长等缺点,因此应用转基因小鼠模型进行化学物质致癌性研究越来越受到重视和认可.本文对现阶段常见的转基因小鼠模型及其在致癌实验中的应用予以综述,并认为应用转基因小鼠模型替代常规小鼠的长期致癌实验具有一定的优越性.
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C57-ras转基因小鼠模型的建立
目的:建立用于临床前药物安全性致癌评价的人类原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠模型.方法:通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5 kb,含有4个外显子,以及该基因本身的启动子、调控序列和poly A信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核.通过PCR,real-time RT PCR和反转录cDNA测序比对等手段鉴定c-Ha-ras基因的插入和表达,并结合病理切片分析自发肿瘤的发生.结果:人类原癌基因c-Ha-ras在原核注射后的基因整合率达到1.6％,共得到人类c-Ha-ras基因的插入的首建鼠6只,其中3只得以成活,并且人类c-Ha-ras基因能够稳定遗传,建成C57-ras转基因小鼠系;C57-ras转基因小鼠反转录cDNA测序比对与人源c-Ha-ras一致;3个转基因小鼠系c-Ha-ras基因的表达分别是野生型小鼠的70.53、59.07和99.68倍;病理切片分析,6只首建鼠中3只有自发肿瘤发生.结论:本研究成功建立了C57/B6J背景的人类c-Ha-ras转基因小鼠模型.该C57-ras转基因小鼠的制作和用途已申请专利(CN101532018A),这是我国首个以临床前药物致癌性实验为目的的c-Ha-ras转基因小鼠,也是在我国建立符合ICH规范的、拥有自主知识产权的临床前药物安全性致癌评价替代方法体系的基础.
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C57-ras转基因小鼠模型的MNU验证实验
目的:建立国内用于药物临床前安全评价致癌性实验替代方法的C57-ras转基因小鼠模型,并通过甲基亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)进行初步验证.方法:C57-ras转基因雄性小鼠与BALB/c雌性小鼠杂交,子代通过PCR进行基因型检测,获得C57-ras转基因和野生型小鼠.实验设定2个剂量,75 mg·kg-1 MNU和150 mg·kg-1 MNU单次腹腔注射给药,共5个组,其中75 mg·kg-1 MNU设3个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠溶媒组;(3)野生型小鼠MNU组;150 mg·kg-1 MNU设2个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠MNU组.其中溶媒组给予同等体积柠檬酸缓冲液,给药后观察29周,观察动物一般症状、生存率、肿物出现时间及大体剖检观察并进行组织病理学检查.结果:75 mg·kg-1 MNU给药组小鼠生存率高于150 mg·kg-1 MNU.75 mg·kg-1 MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤;150mg·kg-1MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤、肺脏腺瘤和直肠纤维肉瘤.野生型动物溶媒组和野生型动物MNU组均无肿瘤发生.结论:初步验证了自主建立的C57-ras转基因小鼠模型,该模型是临床前药物安全性评价致癌性实验快速替代实验候选模型之一.
关键词： C57-ras转基因小鼠 甲基亚硝基脲 验证实验 致癌性实验 -
临床前啮齿类动物致癌性实验常用统计方法简介
药物致癌性实验的目的是通过考察药物在动物体内的潜在致癌作用,从而评价和预测其可能对人体造成的危害,是药物临床前安全性评价的重要组成部分.致癌性实验肿瘤发生率及死亡率数据的统计分析是致癌实验结果解释的关键部分,目前用于评估致癌实验数据的统计方法很多,但还没有哪一种统计方法得到该领域科研人员的公认.鉴于上述情况,本文介绍了目前国际常用致癌数据的统计存在的问题,美国毒性病理学会及统计学家建议的致癌数据统计方法,例如Peto检验、Poly-3检验及Poly-k检验,以及美国毒性病理学会用于Peto检验的肿瘤准确性、一致性分类建议等内容,以期为我国临床前药物致癌性实验的数据统计提供参考.
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新药临床前致癌性实验设计的关注点
致癌性实验主要用于评价新药的潜在致癌性风险,是创新药物临床前安全性评价和上市风险控制内容的重要组成部分.但致癌性实验由于周期长、花费高、实验设计和结果评价比较复杂,因此需要研究申报者、实施评价机构以及药品审评管理机构等多方面加强沟通.本文简要介绍了致癌性实验设计的关注点,包括动物种属的选择、动物组数以及组容量、饲养条件、供试品给药途径、给药暴露时间、暴露剂量、观察指标、大体剖检及组织病理学检查、结果分析以及统计学分析方法等内容,希望能够对致癌性实验的更好开展提供一定的参考.
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P53+/-基因敲除小鼠对尿烷致癌性验证试验的敏感性研究
目的:通过尿烷多次给药初步验证自主建立的P53+/-基因敲除小鼠(B6-Trp州/NIFDC)模型是否比野生型C57BL/6小鼠对尿烷敏感,为国内用于药物临床前安全评价致癌实验短期体内试验提供可用的基因修饰动物模型.方法:在C57BL/6来源的ES细胞中,通过打靶技术敲除p53基因的第2～5外显子后对获得的P53+/-基因敲除小鼠进行PCR基因型鉴定,再与普通C57BL/6小鼠杂交,获得的后代再通过PCR筛选获得基因敲除动物(命名为B6-Trptm1/NIFDC).尿烷验证试验共设计3个组,阴性对照组(野生型小鼠):给予生理盐水,尿烷组1(P53+/-敲除小鼠):给予尿烷,尿烷组2(野生型小鼠):给予尿烷,给药方式为腹腔注射共给药3次,给药剂量为1 000 mg· kg-1.给药后第8周开始肿瘤触诊观察,每周1次.给药后6个月后进行计划剖解,通过大体剖检和组织病理学检查以评价P53+/-敲除小鼠对尿烷致癌作用的敏感性.结果:成功获得杂合的P53+/-基因敲除小鼠,给予尿烷后可诱发P53+/-敲除小鼠发生肝脏血管扩张、肺腺瘤、颌下腺血管瘤及脾脏淋巴瘤,病变发生率分别为94.4％、33.3％、5.6％、5.6％;野生型小鼠肝脏血管扩张及肺脏腺瘤的发生率分别为36.8％、10.5％;阴性对照组无肿瘤发生.结论:本研究初步验证自主建立的P53+/-基因敲除小鼠对尿烷的致癌敏感性高于野生型小鼠,该模型有望将来是临床前药物安全性评价致癌性实验短期体内试验候选模型之一.
