S100 A6基因作用对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响及其机制
摘要： 目的 观察S100A6基因转染、抑制对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 将宫颈癌Hela细胞分为观察1组、对照1组和空白1组.观察1组转染pcDNA3.0-S100A6真核表达载体,对照1组转染pcDNA3.0空载体质粒,空白1组不转染.将宫颈癌CaSki细胞分为观察2组、对照2组及空白2组.观察2组转染S100A6 siRNA,对照2组转染无关序列,空白2组不转染.转染24 h后收集各组细胞.①采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞S100A6 mRNA相对表达量;②采用细胞迁移实验观察各组细胞迁移能力(以穿膜细胞数表示);③采用Western blotting法检测各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin)和PI3K-Akt信号通路相关蛋白(p-AKT、t-AKT、Snail、Twist)表达量;④继续培养24、48、72 h,采用CCK-8法观察各组细胞增殖能力(以OD450表示).结果 ①转染24 h观察1组、对照1组、空白1组Hela细胞S100A6 mRNA相对表达量分别为3.87 ±0.86、1.04 ±0.08、0.97 ±0.11,观察1组Hela细胞S100A6 mRNA相对表达量与对照1组和空白1组相比,P均<0.05;观察2组、对照2组、空白2组CaSki细胞S100A6 mRNA相对表达量分别为0.43 ±0.07、1.12 ± 0.09、0.98 ±0.12,观察2组CaSki细胞S100A6 mRNA相对表达量与对照2组和空白2组相比,P均<0.05.②转染24 h行细胞迁移实验,观察1组、对照1组、空白1组穿膜细胞数分别为(48.26 ±4.89)、(21.31 ±4.27)、(20.12 ±6.23)个,观察1组穿膜细胞数与对照1组和空白1组相比,P均<0.05;观察2组、对照2组、空白2组穿膜细胞数分别为(81.36 ±8.33)、(147.49 ±6.98)、(142.23 ±9.16)个,观察2组穿膜细胞数与对照2组和空白2组相比, P均<0.05.③转染24 h,与对照1组和空白1组相比,观察1组Hela细胞E-cadherin 蛋白表达量较低(P均<0.05),N-cadherin、p-AKT、Snail、Twist蛋白表达量较高(P均<0.05);与对照2组和空白2组相比,观察2组CaSki细胞E-cadherin蛋白表达量较高(P均<0.05),N-cadherin、p-AKT、Snail、Twist蛋白表达量较低(P均<0.05).④转染24 h后继续培养24、48 h,三组细胞OD450相比,P均>0.05.继续培养72 h,观察1组Hela细胞OD450高于对照组和空白组(P均<0.05),观察2组CaSki细胞OD450低于对照2组和空白2组(P均<0.05).结论 S100A6促进宫颈癌细胞增殖和迁移,这可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而促宫颈癌细胞EMT实现的.
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