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肾元颗粒含药血清对高糖诱导人肾小管上皮-间充质细胞转分化中Klotho/FGFR1/FGF2信号途径的影响
目的 探讨高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质细胞转分化过程中Klotho/FG-FR1/FGF2信号转导途径的表达及肾元颗粒含药血清的干预作用.方法 30只Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组、肾元颗粒组及厄贝沙坦组,每组10只,灌胃7天后门静脉取血.采用CCK-8法测定细胞增殖率以确定大鼠血清加入浓度,以LDH法检测含药血清对HK-2细胞的毒性作用.以高糖(30 mmol/L)诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型,分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组.免疫荧光检测Klotho及FGF2的表达,Western blot及RT-PCR检测Klotho、FGF2、E-Cadherin、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达水平,Western blot分析各组细胞ERK及磷酸化ERK(p-ERK)水平.结果 CCK-8法结果显示大鼠空白血清培养HK-2细胞佳浓度为20％.LDH结果显示,与10％胎牛血清比较,肾元颗粒含药血清、厄贝沙坦含药血清对细胞LDH活性的影响差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,模型组Klotho、E-Cadherin蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05),FGF2、α-SMA、FN、Collgen Ⅳ蛋白及mRNA表达增高(P＜0.05),p-ERK水平显著增高(P＜0.05).与模型组比较,肾元颗粒组Klotho、E-Cadherin蛋白及mRNA表达显著增高(P＜0.05),FGF2、α-SMA、FN、Collgen Ⅳ蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05),p-ERK水平显著降低(P＜0.05).结论 肾元颗粒含药血清能改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化,其作用机制可能与调节Klotho/FGFR1/FGF2信号通路有关.
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FGF2/FGFR1/ERK信号通路在高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化中的机制及肾元颗粒的干预作用
目的:探讨FGF2/FGFR1/ERK在高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化中的信号转导机制及肾元颗粒的干预作用.方法:以高糖(30 mmol/L)诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型,分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组.采用CCK-8法确定大鼠血清加入浓度,Western blot及RT-PCR检测FGF2、Coll-genⅣ蛋白及mRNA表达水平,ELISA法分析各组细胞ERK及磷酸化ERK(p-ERK)水平.结果:与正常组比较,模型组FGF2、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达显著增高(P＜0.05),p-ERK水平显著增高(P＜0.05).与模型组比较,肾元颗粒组FGF2、CollgenⅣ蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05),p-ERK水平显著降低(P＜0.05).结论:肾元颗粒含药血清能通过下调高糖诱导的HK-2细胞FGF2的表达,抑制FGF2/FGFR信号转导途径从而改善肾小管上皮细胞转分化,这可能是其防治糖尿病肾病的机制之一.
