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通心络对大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡的影响
目的 探讨通心络(Tongxinluo,TXL)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导大鼠心肌微血管内皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)致细胞凋亡的影响及其机制.方法 采用植块法原代培养大鼠心肌微血管内皮细胞,倒置显微镜观察细胞形态并通过CD31免疫荧光法对培养的大鼠心肌微血管内皮细胞进行辨别、鉴定.取2～4代生长良好的大鼠心肌微血管内皮细胞,采用免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78,GRP78)表达以确定Hcy佳作用时间.后续实验分为5组:空白对照组、Hcy诱导组(Hcy 10 mmol/L,10 h)、Hcy+TXL组(Hcy 10 mmol/L+TXL400 μg/m L)、Hcy+LY294002组(Hcy 10 mmol/L+LY294002 5μmol/L,LY294002为PI3K抑制剂)及Hcy+LY294002 +TXL组(Hcy 10 mmol/L+LY294002 5μmol/L+TXL 400 μg/mL).采用流式细胞仪检测大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡率,实时荧光定量反转录PCR(Real-Time Reverse Transcription PCR,RT-PCR)及Western blot法检测GRP78、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,Caspase-12)mRNA及蛋白表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase,P-PI3K)、总磷脂酰肌醇3-激酶(total phosphatidylinositol 3-kinase,T-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (phosphorylation of kinase B,P-Akt)及总的蛋白激酶B(total kinase B,T-Akt)蛋白表达.结果 确定Hcy作用时间为10h.与空白对照组比较,Hcy诱导组细胞凋亡率(22.77％)升高,GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA及蛋白表达升高,P-PI3K和P-Akt蛋白表达降低,P-PI3K/T-PI3K及P-Akt/T-Akt降低(P ＜0.05,P＜0.01);与Hcy诱导组比较,Hcy+TXL组细胞凋亡率(10.1 7％)降低,GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA及蛋白表达降低,P-PI3K和P-Akt蛋白表达升高,P-PI3 K/T-PI3K及P-Akt/T-Akt升高(P ＜0.05,P＜0.01);与Hcy+TXL组比较,Hcy+TXL+LY294002组细胞凋亡率(17.9％)升高,GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA及蛋白表达升高,P-PI3K和P-Akt蛋白表达降低,P-PI3K/T-PI3K及P-Akt/T-Akt降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 通心络可抑制Hcy诱导的ERS致大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡,其机制可能与激活PI3 K/Akt信号通路有关.
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通心络对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞炎症损伤的保护作用
目的 观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠心肌微血管内皮细胞(rat cardiac microvascular endothelial cells,RCMECs)的炎症损伤及通心络(Tongxinluo,TXL)的干预作用.方法 实验分为对照组、模型组和通心络低、中、高剂量组.观察各组细胞的形态;检测生存活性、细胞间粘附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB).结果 模型组细胞形态明显受损,细胞生存活性降低,细胞上清液中ICAM-1和IL-6含量升高,细胞内ROS水平升高,NF-κB蛋白表达上调;与模型组相比,通心络中、高剂量组细胞形态明显改善,ICAM-1和IL-6释放减少,细胞内ROS水平降低,NF-κB蛋白表达下调,各组间比较差异有统计学意义(生存活性:F=13.055,P＜0.001;ICAM-1:F=11.298,P＜0.001;IL-6:F=30.843,P＜0.001;ROS:F=3.386,P=0.043;NF-κB:F=77.457,P＜0.001).结论 通心络可减轻Hcy对RCMECs的损伤,其作用机制可能与减轻炎症反应有关.
关键词： 通心络 大鼠心肌微血管内皮细胞 同型半胱氨酸 炎症损伤
