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氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织megsin表达的影响
目的 探讨氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏组织megsin表达的影响.方法 选择18只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,体质量为240～280 g.按随机数字表将大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)及氟伐他汀治疗组(DF组),各6只.DC组和DF组大鼠用链脲佐菌素制备糖尿病模型.然后DF组大鼠给予氟伐他汀2 mg·kg-1·d-1灌胃,NC组和DC组大鼠仅给予等量自来水灌胃.制模成功后第6周末,收集24 h尿液、血清及肾脏组织标本,测定血清总胆固醇、三酰甘油、24 h尿清蛋白水平,计算肾肥大指数(肾重/体质量)、血肌酐清除率和尿清蛋白排泄率,并制备肾组织石蜡切片进行免疫组化和过碘酸血夫(PAS)染色,观察megsin、Ⅳ型胶原和层黏连蛋白表达.结果 NC组大鼠血糖、总胆固醇、三酰甘油水平、肥大指数、肌酐清除率、尿清蛋白排泄率及肾组织megsin、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白水平[分别为(5.7±0.8)mmol/L、(1.78±0.30)mmol/L、(1.0±0.7)mmol/L、(3.4±0.5)mg/g、(1.63±0.51)ml·min-1·kg-1、(2.1±0.6)μg/24 h、(4.6±1.2)、(4.7±0.9)、(8.5±1.3)]与DC组[分别为(19.7±2.5)mmol/L、(8.61±0.85)mmol/L、(4.5±0.7)mmol/L、(7.7±1.3)mg/g、(5.31±0.38)ml·min-1·kg-1、(9.7±1.2)μg/24 h、(19.5±0.9)、(19.6±0.6)、(25.3±1.5)]、DF组[分别为(19.8±1.3)mmol/L、(3.80±0.79)mmol/L、(2.4±0.5)mmol/L、(5.2±0.5)mg/g、(2.97±0.18)ml·min-1·kg-1、(5.9±1.0)μg/24 h、(14.2±1.0)、(14.8±1.1)、(17.8±1.0)]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);DC组大鼠总胆固醇、三酰甘油、肥大指数、肌酐清除率、尿清蛋白排泄率及肾组织megsin、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白水平与DF组比较,差异亦均有统计学意义(P＜0.05).PAS染色显示,DC组大鼠肾小球系膜增生明显;DF组与DC组相比,大鼠肾小球系膜增生减轻.结论 糖尿病大鼠肾组织中megsin表达增强,氟伐他汀可通过抑制megsin表达来发挥肾脏保护作用.
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Megsin基因C25663G多态性与我国汉族人群IgA肾病的关系
目的:研究 Megsin基因C25663G多态性与我国汉族人群IgA肾病发生、发展的关系.方法:应用PCR-RFLP方法鉴定IgA肾病患者基因型,用以家庭为基础的传递不平衡检验(TDT)、单倍型相对危险度(HRR)分析结合病例-对照研究方法,分析Megsin基因C25663G多态性与我国汉族人群IgA肾病发生的关系.IgA肾病患者按病情是否稳定分为病情进展组和稳定组,比较两组间基因型分布频率差异.结果:TDT显示Megsin基因C25663G等位基因的传递在IgA肾病患者没有显著倾向性(χ2=0.203,P=0.652),HRR分析已传递和未传递等位基因频率无统计学差异(χ2=0.268,P=0.679),IgA肾病患者和正常对照者基因型和等位基因分布频率无统计学差异(P＞0.05).在IgA肾病进展组和稳定组之间,基因型分布频率无统计学差异(χ2=2.400,P=0.153).结论:Megsin基因C25663G多态性与中国汉族人群IgA肾病的发生及病情进展无关.
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虫草益肾颗粒对人肾小球系膜细胞 megsin及p38 MAPK信号转导通路的影响
目的：探讨虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞（ HMC ）增殖影响中megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的调控作用。方法：体外采用高糖（30 mmol／L）刺激HMC，分别加入不同浓度的虫草益肾颗粒（高、中、低）及福辛普利含药大鼠血清进行干预，收集细胞。采用Western印迹及实时定量PCR法分别检测p38MAPK、p－p38MAPK、megsin蛋白的表达。结果：虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC 增殖均有抑制作用，且高糖刺激后HMC 细胞p38 MAPK、p －p38MAPK、megsin的表达均较正常组增多（均P＜0．05）；虫草益肾颗粒高、中剂量组干预后均可致其表达下降（均P＜0．05）；其抑制作用与福辛普利组作用效果相近。结论：虫草益肾颗粒具有抑制高糖环境下HMC增殖的作用，抑制高糖诱导的p38 MAPK、p－p38 MAPK和megsin的表达，其作用机制可能与虫草益肾颗粒抑制p38 MAPK信号活化及megsin表达有关。
关键词： 虫草益肾颗粒 人肾小球系膜细胞 p38 MAPK信号通路 Megsin -
Megsin基因E1-5'UTR区A267G与免疫球蛋白A型肾病阴虚证的相关性
目的:观察增生为主的原发性免疫球蛋白A型肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)患者阴虚证(气阴两虚证、肝肾阴虚证)与megsin基因El-5'UTR区A267G的相关性,寻找原发性IgAN中医证型微观辨证可能的物质基础.方法:筛选符合标准的原发性IgAN患者120例,进行megsin基因E1-5'UTR区A267G的单核苷酸多single nucleotide polymorphism,SNP)测序,观察中医证型与SNP的相关性.结果:120例患者中GG型83例,GA型34例,AA型3例.肝肾阴虚证在AA与GA型IgAN患者中所占比例较高,气阴两虚在GG型中所占比例较高(P<0.01);GG型与GA型+AA型比数比(odds ratio,OR)为9.800,95%可信区间(confidence interval,CI)为3.969～24.199.这样的差异同样存在于不同性别和不同年龄之间.结论:Megsin基因El-5'UTR区A267G可能是区分原发性IgAN肝肾阴虚证和气阴两虚证的物质基础之一.
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Megsin与肾脏疾病
肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)是肾脏重要的固有细胞之一[1],维持着肾脏的组织结构和生理功能,具有产生细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、分泌细胞因子(cytokine,CK)、吞噬和清除异物等多种功能,同时也参与了肾小球疾病尤其是系膜增生性疾病的发生、发展.Megsin是近10年来被新认识的GMC优势表达基因,本文就megsin与肾脏疾病的关系做一综述.
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Megsin与肾脏疾病
肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)是肾脏重要的固有细胞之一[1],维持着肾脏的组织结构和生理功能,具有产生细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、分泌细胞因子(cytokine,CK)、吞噬和清除异物等多种功能,同时也参与了肾小球疾病尤其是系膜增生性疾病的发生、发展.Megsin是近10年来被新认识的GMC优势表达基因,本文就megsin与肾脏疾病的关系做一综述.
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megsin基因转染对高糖环境中系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达的影响
目的 观察megsin基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、磷酸化胞外调节蛋白激酶112(pERK1/2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Ⅳ型胶原水平的影响;探讨megsin基因对细胞外信号调节激酶(ERK)通路的作用.方法 将小鼠肾小球系膜细胞分为7组:低糖组(A组,5.5 mmol/L)、高糖组(B组,30 mmol/L)、高糖+空质粒组(C组)、高糖+megsin质粒组(D组)、高糖+megsin质粒+ERK通路抑制剂组(E组)、高糖+megsin siRNA组(F组)和低糖+甘露醇组(24.5 mmol/L甘露醇,G组).分别在培养12、24、48 h后,采用Western印迹法测定各组系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1 的表达,放射免疫测定法(RIA)测定各组细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度.结果 与A组相比,高糖刺激可上调系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及上清液Ⅳ型胶原的水平(均P＜0.05),且有一定的时间依赖性.转染megsin基因可进一步上调高糖环境下系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1、Ⅳ型胶原的表达(均P＜0.05).应用ERK通路抑制剂后,与D组相比系膜细胞megsin和PDGF-BB的表达无明显变化(均P＞0.05),而pERK1/2、TGF-β1 及Ⅳ型胶原的表达则明显降低(均P＜0.05).转染megsin siRNA对系膜细胞megsin基因进行干扰后,系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及Ⅳ型胶原的含量较B组下调(均P＜0.05).结论 高糖环境下,转染megsin基因可使小鼠系膜细胞megsin、PDGF-BB表达增高,其可能部分通过ERK通路使TGF-β1表达卜调及Ⅳ型胶原合成与分泌增加.megsin siRNA干扰可使上述指标下调,megsin基因可能在糖尿病肾病发病中起重要作用.
关键词： 转染 肾小球系膜细胞 细胞外信号调节MAP激酶类 Megsin 葡萄糖 -
megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞增殖和基质金属蛋白酶2及其抑制因子表达的影响
目的 观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)的表达及Ⅳ型胶原水平的影响,探讨megsin与系膜细胞增殖和细胞外基质代谢的关系.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别于培养12、24、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度;Western印迹法检测系膜细胞megsin、MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平;放免法检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、TIMP-2表达上调,MMP-2表达下调,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高.megsin基因转染后上述,变化趋势更加显著.结论 megsin可诱导系膜细胞增殖,并通过上调TIMP-2、下调MMP-2抑制细胞外基质降解,是加速肾小球硬化的可能机制之一.
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转染Megsin基因对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响及机制
目的 了解Megsin基因高表达对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响,并探讨其机制.方法 构建大鼠Megsin基因真核表达载体,体外转染系膜细胞.3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测系膜细胞增殖情况.RT-PCR方法检测系膜细胞血小板源生长因子(PDGF)-BB、IL-1β、IL-6、IL-10、TGF-β1和TNF-α mRNA表达变化.ELISA法检测细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原浓度.观察PDGF-BB中和抗体对大鼠系膜细胞转染Megsin基因后细胞增殖和TGF-β1 mRNA表达的影响.结果 大鼠系膜细胞转染Megsin基因后,细胞内3H-TdR掺入量显著增加,PDGF-BB和TGF-β1 mRNA表达显著上调,细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度显著升高,3者与转染Megsin基因呈明显时间依赖性关系.PDGF-BB中和抗体显著抑制系膜细胞转染Megsin基因后细胞内3H-TdR的掺入,并下调稳定表达Megsin基因的大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA表达.结论 Megsin基因高表达在体外可促进系膜细胞PDGF-BB和TGF-β1的表达和分泌,进而促进系膜细胞增生和Ⅳ型胶原分泌.
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基因干扰对人肾小球系膜细胞megsin基因表达及α平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1生成的影响
megsin,即SERPINB7,是丝氨酸蛋白酶抑制剂进化单位B的第7位成员[1],为近年发现的特异性表达于肾脏的基因.
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IgA肾病候选基因单核苷酸多态性的搜寻和确定
目的通过搜寻IgA肾病(IgAN)候选的megsin和P选择素基因单核苷酸多态性(SNPs)并分析其特点,为进行IgAN病例-对照相关研究提供重要资料.方法采用PCR产物直接测序法,对中国汉族人24份标本(12例IgAN,12例正常对照者)两个候选基因中所有启动子区、编码区及其部分调控区和外显子-内含子连接区域13 591 bp进行检测,开展SNPs筛查.结果经过对测序结果统计分析,共发现SNPs27个,其中SERPINB7基因11个,SELP基因16个;平均分布密度为503 bp/SNP.在我们发现的27个SNPs中,共有10个SNPs在GenBank中尚未报道过,占27个SNPs的37%.结论本检测为进一步行IgAN病例-对照相关研究及建立中国人群基因序列变异的自主知识产权提供了有用信息.
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中国人群MEGSIN基因单核苷酸多态性的检测
[目的]研究中国人群MEGSIN基因多态性及其分布特征,并与国外数据库进行比较.[方法]随机选取208例广东地区汉族个体,提取基因组DNA,对包含外显子、外显子-内含子交界区及5'UTR区、3'UTR区的PCR产物进行直接测序,综合正反向结果识别和鉴定基因内SNPs.所得结果在美国国立生物技术信息中心(NCBI)的SNP数据库(dbSNP)中进行查询和比较.[结果]在所有研究对象中共发现24个SNPs,主要位于非编码区;22个为替换型SNP,1个为插入型SNP,另一个为缺失型SNP;其中有6个SNPs在数据库中未报道,有4个数据库已报道的SNPs,在本次研究未能证实在中国人群中存在多态性.[结论]中国汉族人群MEGSIN基因的多态性分布与美国数据库中基于高加索人群的资料存在差异.本研究不仅有利于了解MEGSIN基因结构,且为在中国人群中研究MEGSIN基因相关疾病并终找到致病位点提供可靠数据.
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我国汉族人群Megsin基因C2093T、Uteroglobin基因G38A多态性分布特征的研究
[目的]研究我国汉族人群megsin基因C2093T及uteroglobin基因G38A多态性的分布特征,并与已报道的国外人群数据比较.[方法]提取201例汉族人基因组DNA,PCR分别扩增含megsin基因C2093T、uteroglobin基因G38A片段,采用限制性内切酶技术鉴定基因型,并以直接测序证实酶切结果.[结果]所调查的我国汉族人群megsin基因C2093T多态性分布为CC型85例(42.3%),CT型83例(41.3%),TT型33例(16.4%),与国外人群相比,CC型分布频率显著高于匈牙利人群(χ2=7.917,P=0.005),而TT型分布频率显著低于匈牙利人群(χ2=6.228,P=0.01).C和T等位基因频率分析显示我国汉族人群同样与匈牙利人群存在显著性差异(χ2=11.485,P=0.001).Uteroglobin GG、GA和AA3种基因型及等位基因频率和日本、匈牙利、意大利、朝鲜人群比较,均无显著性差异(P>0.05).[结论]我国汉族正常人群mesgsinC2093T基因多态性不同于匈牙利人群,T等位基因频率显著低于匈牙利人群.这种差异有可能是导致一些疾病在不同种族间发病率和临床表现上存在显著不同的因素之一.我国汉族人群uteroglobin G38A多态性与已报道的国外人群则没有显著差异.
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Megsin基因3个多态性位点与亚洲人群IgA肾病易感性关联的Meta分析
目的 通过Meta分析评估亚洲人群Megsin基因3个多态性位点(rs1055901、rs1055902和rs2689399)与IgA肾病易感性的关联.方法 通过中国知网、维普、万方数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、Web of Science和Google学术数据库数据库,电子检索关于亚洲人群Megsin基因rs1055901、rs1055902和rs2689399多态性位点与IgA肾病相关性的研究,检索年限为1960年1月1日开始至2016年5月2日.采用Stata12.0软件计算合并比值比(OR)和95％置信区间(CI),并进行敏感性及发表偏倚分析.结果 终纳入6篇文献(含9项研究),包含2 179例IgA肾病患者和1 769例健康对照.Meta分析结果显示,Megsin基因rs1055901、rs1055902多态性位点与亚洲人群IgA肾病易感性无明显关联.然而,Megsin基因rs2689399位点与亚洲人群IgA肾病易感性呈显著负相关(G和C:OR=0.754,95％CI 0.592～0.961,P=0.022;GG和CC:OR=0.506,95％CI0.287～0.892,P=0.019;GG和GC+CC:OR=0.551,95％CI 0.316～0.961,P=0.036).结论 Megsin基因的rs2689399位点的G等位基因、GG基因型可能是亚洲人群IgA肾病的保护因子.
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Megsin基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响及其机制研究
目的 观察megsin基因转染对糖尿病小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨megsin在糖尿病肾病发病机制中的作用.方法 制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组(B组),剩余30只每周1次经尾静脉分别注射空质粒(C组),megsin表达质粒(D组),并设立正常对照组(A组).实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用Western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中megsin、MCP-1、ICAM- 1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变.结果 糖尿病小鼠肾组织megsin 、MCP-1及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;megsin基因转染后上述变化趋势更加显著.结论 megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一.
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缬沙坦对高糖环境中肾小球系膜细胞Megsin表达的影响
目的 观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12h、24h、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ESA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞meg sin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,缬沙坦干预组上述变化明显减弱.结论 缬沙坦可下调megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用.
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Megsin基因转染对小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1及细胞间黏附分子-1表达的影响
目的:观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别培养12、24、48h,采用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western blot法检测系膜细胞megsin、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果:高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,megsin基因转染后上述变化趋势更加显著,而megsin shRNA质粒转染可明显减弱上述变化.结论:Megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚.
关键词： Megsin 系膜细胞 基因转染 单核细胞趋化蛋白-1 细胞间黏附分子-1 -
中国汉族人群Megsin基因变异与部分多态性位点鉴定
目的:了解中国汉族人群Megsin基因变异,并对部分多态性位点进行鉴定,筛选适合IgA肾病相关研究的多态性位点.方法:从基因库中挑选部分Megsin基因不同功能区域的单核苷酸多态性(SNP)位点,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和直接测序的方法,鉴定IgA肾病患者和正常对照组各位点基因型,计算各位点杂合度,根据杂合度大小和疾病组与正常对照组杂合度的差别,筛选适用于IgA肾病相关研究的多态性位点.结果:在12个从基因库挑选的SNP位点中,6个在我国汉族人群中未发现具有多态性,6个具有多态性.在第5内含子发现两个新的SNP位点.在8个确实具有多态性的位点中,3个属少见多态,5个属常见多态,各SNP位点杂合度在IgA肾病组和正常对照组差异无显著性(P>0.05).结论:中国汉族人群Megsin基因变异与基因库中高加索人群存在较大差异,这可能与中国汉族人群对IgA肾病的高发病率具有重要联系.
