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自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道的活性及表达改变
目的 观察自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats, SHR)与Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel, BKCa)电流及通道α亚单位表达的差异.方法 实验采用16~18周龄SHR(N=20)及WKY(N=20)大鼠,尾套法测量大鼠尾动脉血压;胶原酶分离VSMCs,全细胞膜片钳技术记录全细胞总钾电流密度及BKCa电流;激光共聚焦观察BKCaα亚单位在VSMCs胞膜及胞质内的分布.结果 SHR较WKY大鼠的收缩压与舒张压均有显著升高(P<0.05);全细胞外向钾电流密度及BKCa电流密度均有显著性增加(P<0.05);SHR的BKCaα亚单位在胞膜及胞质内均有广泛分布,SHR大鼠VSMCs胞质与胞膜的荧光强度较WKY大鼠均有显著性升高(P<0.05).结论 BKCa电流密度增加可能与BKCa通道α亚单位的表达增多有关,SHR大鼠VSMCs的BKCa电流密度增加引起血管的舒张,不能抵消平滑肌细胞的肌源性收缩可能是导致高血压的发生机制之一.
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氧化应激/抗氧化与动脉粥样硬化的关系研究新进展
动脉粥样硬化(Atherossclerosis,AS)是指在动脉及其分支的动脉壁内膜及内膜下有脂质沉着(主要是胆固醇及胆固醇脂),同时伴有中层血管平滑肌细胞(Vascular smooth musclecell,VSMC)移行至内膜下增殖,使内膜增厚,形成黄色或灰黄色状如粥样物质的斑块.
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血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化病变中作用的研究进展
动脉粥样硬化是引起心脑血管疾病死亡的主要原因,严重危害着人们的健康,随着CT及MR血管成像技术的不断完善和发展,使动脉粥样硬化斑块的非侵入性影像学诊断成为可能,动脉粥样硬化斑块的存在及形态学特征不断得到较清楚地检测和描述,大大提高了心脑血管疾病的预防和治疗[1,2].
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Hcy对人血管平滑肌细胞中microRNA-125b表达的影响
目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞中microRNA-125b表达的影响。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞,分为空白对照组,Hcy干预组(50、100、200、500μM)共计5组;MTT法检测细胞增殖活;荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组VSMCs中miR-125b的表达。结果 MTT法显示Hcy可以明显促进VSMCs增殖(<0.05),qRT-PCR法显示Hcy干预各组中miR-125b表达下调(<0.01),但两者都不是剂量依赖关系,且都在100μM Hcy处作用明显。结论 Hcy促进VSMCs增殖可能是由于miR-125b的表达下调引起的。
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齐墩果酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导平滑肌细胞的增殖
目的:研究血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)对SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖(VSMCs)的影响,探讨齐墩果酸(OA)对于抑制平滑肌细胞增殖而抗动脉粥样硬化(AS)的作用。方法运用组织块贴壁法培养平滑肌细胞,免疫荧光法鉴定平滑肌细胞,复制Ang-Ⅱ诱导VSMCs增殖模型,CCK-8法检测OA对细胞增殖的影响。结果镜下观察培养的细胞呈典型的"峰谷状"生长,免疫荧光染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达,细胞传至第3代后纯度在98豫以上,证实所养细胞为平滑肌细胞。终浓度为1 umol/L的Ang-Ⅱ作用24h能明显促进细胞的增殖。OA (20 umol/L,30 umol/l)能明显抑制Ang-Ⅱ诱导VSMCs增殖的作用(<0.05)。结论齐墩果酸(OA)可以抑制Ang-Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖。
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同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞中PTEN甲基化的影响
目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten, PTEN)启动子区DNA甲基化的影响。方法原代培养血管平滑肌细胞(VSMCs),100 M Hcy刺激48h后,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTEN mRNA表达水平的变化,western blot检测PTEN蛋白表达变化;生物信息学分析PTEN启动子区CpG岛,巢式降落时甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测PTEN DNA甲基化水平。结果与正常对照组相比(0 M Hcy),给予100 M Hcy刺激后,VSMCs中PTEN mRNA及蛋白表达水平均降低;其启动子区存在数个CpG岛,其DNA甲基化水平升高。结论 Hcy可下调VSMCs中PTEN的表达,而PTEN DNA启动子区的高甲基化可能在这一过程中起到关键调控作用。
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TRPC1在动脉性病变中的研究进展
瞬时受体电位C通道(TRPC通道)即传统型TRP通道,是钙池操作性钙内流( store-operated Ca2+entry, SOCE)的分子基础,是位于细胞膜上的一种非选择性阳离子通道蛋白,为细胞感受器,包括TRPC1-7,其中TRPC1通道是发现早研究多的钙离子通道,广泛分布于血管平滑肌细胞上[1]。目前,人们对TRPC1通道认识虽然还比较肤浅,但TRPC1通道在血管损伤和病变中起重要作用,兹就TRPC1通道在动脉性疾病中的作用进行综述。
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抗血小板治疗对再狭窄作用的研究进展
目前,许多方法诸如血管腔内照射、原癌基因抑制以及基因转导,经研究证明可抑制PTCA术后血管平滑肌细胞(VSMC)的增生而减少再狭窄(RS)的发生,此外,各种间接或直接的抗血小板治疗亦可成功地抑制动脉损伤后VSMC的增殖而有预防RS的作用.本文就抗血小板治疗对再狭窄作用的研究进展作一回顾.
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血管紧张素Ⅱ促进PTCA后再狭窄形成的分子病理学进展
血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)是肾素-血管紧张素系统的重要的功能因子,具有广泛的生物学活性作用,在PTCA术后再狭窄(RS)的形成中有十分重要的意义;近年来的研究表明,AgⅡ通过其受体(ATR1和ATR2)的介导而调节血管内皮细胞(VEC)和血管平滑肌细胞(VSMC)的功能,发挥着促RS的形成的作用.
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t-PA和PAI-1在血管成形术后再狭窄中的作用
目前认为血管成形术后再狭窄(RS)的形成主要与血管内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移和增殖、细胞外基质(ECM)的大量沉积,新生内膜的过度增生直接相关.组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂一1(PAI-1)作为纤溶系统的重要调节因子,在RS形成的若干环节如附壁血栓的形成、VSMC的迁移和增殖及ECM的沉积等方面有着重要作用,与RS的关系密切.现就t-PA和PAI-1在RS形成中的作用综述如下:
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缬沙坦和阿托法他汀对鼠血管平滑肌细胞Stat3信号转导通路的影响
目的 观察缬沙坦和阿托法他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中转录信号转导子和激活子3(Stat3)信号转导通路的影响,探讨其细胞内信号转导机制.方法 分别将阿托法他汀、缬沙坦及二者联合作用于大鼠VSMCs.应用MTT法检测细胞增殖状态;用流式细胞仪观察药物对细胞凋亡的影响,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物作用前后Stat3信号转导通路相关蛋白JAK2、Stat3的表达及磷酸化活性.结果 阿托法他汀及缬沙坦都呈浓度依赖性方式抑制大鼠VSM-Cs的增殖水平,促进其凋亡,二者联合应用则具有协同作用.用阿托法他汀及缬沙坦处理VSMCs后p-JAK2、p-Stat3蛋白的表达水平随作用时间的延长而下降(P<0.05),并且联合组蛋白表达水平与单独处理组相比有显著性差异(P<0.01).结论 阿托法他汀和缬沙坦对大鼠VSMCs的作用机制与Stat3信号转导通路高度相关,两者联合应用则具有协同作用,缬沙坦可加强阿托法他汀对VSMCs增殖及凋亡的影响.
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大鼠血管平滑肌细胞的贴块法培养
目的:探讨大鼠血管平滑肌细胞的原代培养方法与生长特性,为中药研究提供实验材料.方法:采用组织贴块法培养,倒置显微镜观察形态,电镜鉴定,台盼蓝染色活力检测.结果:倒置显微镜和电镜观察培养的血管平滑肌细胞生长状态良好,呈现平滑肌细胞特征性的"峰-谷"状结构,台盼蓝染色约有95%以上的细胞为活细胞.结论:本培养方法简单、经济,经过一定时间的操作训练,即可成功培养出平滑肌细胞.
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miRNA-181a/b通过血清反应因子调控血管平滑肌细胞表型
目的 研究miR-181a/b通过血清反应因子(SRF,serum response factor)对血管平滑肌细胞向合成型表型转化及细胞增殖迁移能力的调控作用.方法 将miR-181a/b瞬时转染至人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs)中,用实时定量PCR、CCK-8检测方法和transwell实验分别检测平滑肌细胞的表型标记基因的表达水平、细胞增殖能力和迁移能力的变化.生物信息学分析预测miR-181a/b直接靶向血清反应因子的3'UTR(非编码区),并通过实时定量PCR、western blot 及双荧光素酶报告系统分另验证.结果 实时定量PCR结果表示在HAoSMCs中过表达miR-181a/b能够抑制收缩表型标记基因的表达,促进合成表型标记基因的表达,CCK-8与transwell实验结果表明,miR-181a/b可增强细胞的增殖和迁移能力.双荧光素酶报告系统与western blot结果表明,miR-181a/b能够直接作用SRF,抑制SRF的蛋白表达.结论 miR-181a/b通过直接作用血清反应因子的3'UTR促进平滑肌细胞由收缩型表型向合成型表型转化.
关键词: miRNA-181a/b 血清反应因子 血管平滑肌细胞 表型转化 -
酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞
目的 探讨胶原酶分离并培养家兔血管平滑肌细胞的方法.方法 取家兔腹主动脉,0.2%胶原酶I消化分离血管平滑肌细胞并进行培养,相差显微镜观察培养细胞的形态,免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白(α-actin)的表达.透射电镜观察血管平滑肌超微结构.结果 相差显微镜下细胞呈长梭形,未见明显异型细胞,α-actin胞浆染色阳性细胞数占总细胞数的99%以上.电镜显示VSMC内肌丝丰富,线粒体、高尔基复合体等细胞器较少,VSMC呈现分化的收缩表型.结论 胶原酶可消化分离培养血管平滑肌细胞,且有成活细胞数多、传代周期短的特点,可用于血管平滑肌表型研究.
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颈动脉粥样硬化斑块中西医治疗进展概况
动脉粥样硬化(AS)是一种累及全身动脉血管,特别是弹力型动脉的非炎症性、退行性和增生性病变.AS的形成主要与动脉血管内皮细胞和血管平滑肌细胞受到各种损伤有关.近几年AS发病率在我国有明显增高的趋势,并随年龄增长逐渐增高.
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血管内皮细胞损伤与修复的机制的研究进展
血管内皮细胞(vascular enolothelial cells,VEC)不仅是循环血液与血管平滑肌细胞之间的机械屏障而且是人体大重要的内分泌器官,由于它所具有的机械屏障作用,使它很容易受到体内外各种物理化学因素损伤,受损后的VEC尤其是内分泌功能必然失调,使其分泌的多种活性物质或与这种活性物质有关的其他物质之间的平衡被打破,从而导致心血管系统功能障碍.文章对引起VEC损伤的多种机制机制进行回顾,探讨VEC的修复机制,进而研究如何保护和修复已损伤的VEC,并改善血管疾病的愈后.
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大电导钙激活钾通道(BK)在调节血管平滑肌细胞张力中的作用
钙激活钾通道(calcium-activated potassium channel, KCa)是一类电压和钙敏感的通道,早由Cardos描述,后来由Meech证明并报告[1].起初发现的KCa, 其电导比任何其他的钾通道的电导都大得多(单通道电导为100~250 pS),因而称为大电导的钙激活钾通道(BK).后来又发现了中电导(MK, 20~60 pS)和小电导(SK,10~14 pS)的钙激活钾通道[2].在这些类型的KCa中,BK在平滑肌上表达密度高,在平滑肌细胞膜电位的维持和肌紧张的调节中起着重要的作用.
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失血性休克大鼠血管平滑肌细胞钙超载的三磷酸腺苷酶机制
目的探讨失血性休克大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙超载的三磷酸腺苷(ATP)酶机制. 方法雄性Wistar大鼠24只,随机分为对照组(C组)、休克开始组(S0组)、休克后2,4 h组(分别为S2和S4组),每组6只.以改良Wigger法,即股动脉插管放血并维持血压40 mm Hg 2 h建立失血性休克大鼠模型,观察休克后大鼠VSMC胞浆游离钙离子浓度及细胞膜、线粒体膜Ca2+-ATPase,Na+-K+-ATPase活性变化. 结果 C、S0、S2、S4组VSMC胞浆游离Ca2+浓度平均通道荧光对数值分别为2.03±0.15、2.37±0.32、2.55±0.46、2.80±0.43, 呈休克时间依赖性升高,S0组显著大于C组(P<0.05), S2、S4组非常显著地大于C组(P<0.01).细胞膜Ca2+-ATPase活性:C组为(36.0±7.2)μmol*mg-1*h-1;S0组[(35.3±8.5)μmol*mg-1*h-1]与C组比较,差异无显著性意义;S2、S4组分别为(26.5±6.9)、(24.3±4.7)μmol*mg-1*h-1,均显著低于C组(P<0.05和P<0.01);细胞膜Na+-K+-ATPase活性:C组为(34.0±5.8)μmol*mg-1*h-1;S0、S2组分别为(37.3±6.9)、(32.2±6.3)μmol*mg-1*h-1,与C组比较,差异无显著性意义;S4组为(27.0±4.9)μmol*mg-1*h-1,明显低于C组(P<0.05).线粒体膜Ca2+-ATPase活性:C组为(8.8±2.3)μmol*mg-1*h-1,S0、S2、S4组分别为(10.7±2.4)、(13.5±3.1)、(11.2±3.4)μmol*mg-1*h-1,均显著高于C组(P<0.05);线粒体膜Na+-K+-ATPase活性:C组为(5.3±1.1)μmol*mg-1*h-1 ;S0、S2组分别为(10.1±1.7)、(9.7±1.8)μmol*mg-1*h-1,非常显著地高于C组(P<0.01),S4组为(7.3±1.2)μmol*mg-1*h-1,显著高于C组(P<0.05). 结论休克后VSMC出现钙超载,其机制可能与休克后VSMC细胞膜Ca2+-ATPase、Na+-K+ -ATPase活性下降以及线粒体膜Ca2+-ATPase、Na+-K+-ATPase活性升高有关.
关键词: 休克 失血性 Ca2+转运ATP酶 Na+-K+交换ATP酶 血管平滑肌细胞 钙超载 -
熊果酸和齐墩果酸的血管药理作用研究进展
熊果酸和齐墩果酸能对抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、C-反应蛋白、非酶糖基化终产物、高糖、H2O2、脂多糖对血管内皮细胞的损伤,其血管药理作用是多方面的.熊果酸和齐墩果酸能抑制血管平滑肌细胞增殖,也能对抗血清、ox-LDL、高糖、瘦蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖,从而产生血管保护作用和改善血管功能;减轻糖尿病大鼠的血管损伤,减轻球囊导管损伤引起的血管狭窄,抑制静脉桥移植后的血管壁炎症反应和血管外膜成纤维细胞增殖并防止血管狭窄,以及防止多种实验性动脉粥样硬化模型动物的血管狭窄;对血管内皮细胞有抑制增殖作用,也有对抗伤害因子抑制增殖或促进增殖的双向作用,因此对血管生成也有双向调控作用,能抑制角膜、糖尿病动物视网膜及肿瘤组织内的血管新生;还有扩张血管,降低血管阻力,对正常的和多种高血压动物有显著的降压作用.
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冠状动脉痉挛的临床特征和发病机制
冠状动脉痉挛(coronary artery spasm,CAS)是指心外膜冠状动脉异常收缩导致心肌缺血.东亚CAS的发病率远高于欧美,但受条件限制,我国在此方面的研究并不全面,缺乏临床实践的指导.目前CAS的发病机制尚不完全明确,新近的研究表明CAS与血管内皮细胞结构和功能紊乱、血管平滑肌细胞的收缩反应性增高、自主神经功能障碍、遗传易感性密切相关.笔者综合国内外CAS资料,就其临床特征和发病机制作一综述.