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体外不同培养条件对脑动静脉畸形血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响
血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移与脑动静脉畸形(CAVM)的栓塞、放射治疗后的病理变化过程密切相关.我们研究了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及重组骨桥蛋白(rhOPN)对体外培养的CAVM的VSMC增殖和迁移的影响.
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神经干细胞培养条件的探讨
目的探讨体外不同培养条件对小鼠神经干细胞增殖及分化的影响.方法分别用条件培养基及10 ml·L-1、 20 ml·L-1、 30 ml·L-1、 40 ml·L-1、 50 ml·L-1、 100 ml·L-1胎牛血清+条件培养基对小鼠胚胎脑组织进行培养, 用免疫组织化学方法进行鉴定.随后对不同培养条件下、不同生长时期神经干细胞生物学特性进行光镜观察.结果 10 ml·L-1、 20 ml·L-1胎牛血清+条件培养基组培养的神经干细胞比单独条件培养基组克隆球多而大; 30 ml·L-1、 40 ml·L-1、 50 ml·L-1胎牛血清+条件培养基组既有部分贴壁细胞, 也有大量的克隆球形成, 克隆球有伪足样突起, 克隆球间存在着广泛网络结构, 且单一神经干细胞核分裂旺盛; 100 ml·L-1胎牛血清+条件培养基组以贴壁细胞为主.结论在体外不同的培养条件下神经干细胞及其神经球增殖及分化不同.
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胚胎干细胞定向诱导分化为神经细胞的方法研究进展
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)具有自我更新和多分化潜能,在适当培养条件下可被诱导分化为神经细胞,包括神经前体细胞,各种类型的神经元和胶质细胞.了解ES细胞向神经细胞分化的方法和机制是对神经损伤进行修复和治疗的前提,也可为神经系统损伤的治疗提供大量的健康备用细胞.
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兔髁状突软骨细胞的体外培养及其鉴定研究
随着生物工程技术的发展,使生物工程软骨移植软骨细胞成功应用于动物试验,如1996年,曹宜林等[1]用PGA与PLA共聚物在体外预制成人耳形状,移植软骨(chondrocyte)埋植入裸鼠皮下,成功的再造了具有人耳廓形态的软骨.Shigeyuki w等[2]在胶原凝胶上种植软骨细胞,用于修复大面积关节缺损.软骨组织工程广阔的应用前景,越来越引起人们的研究兴趣,但作为种子细胞之一的软骨细胞因其自身的哪生物学特性,仍不能使该技术应用于临床.如何进行体外培养条件的改进,以延长软骨细胞的生物学功能,仍在探索中.我们通过对兔髁状突软骨细胞体外培养,观察其生物学特性,并对其进行软骨细胞的特异性鉴定,探索软骨细胞能否在体外进行大量增殖,并为软骨组织工程提供充足的种子细胞.
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不同培养条件对口腔细菌生物膜生长的影响
目的:研究5种口腔细菌在体外形成生物膜的能力、形成过程及不同培养条件对生物膜形成的影响,并通过激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察细菌生物膜的形成及结构特征.方法:选择与龋病发生关系密切的5种口腔细菌,分别接种在含牛心脑浸液培养基(BHI)、人工唾液(BM5)以及人唾液培养基的标准96孔板中,在培养6 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h后取出相应的微孔板,11% Crystal Violet染色生物膜,95%乙醇复吸Crystal Violet,HTS7000PLUS多孔板高效分析仪测定各时段细菌生物膜的生长情况,并绘制生长曲线.CLSM观察细菌生物膜形成的结构变化.结果:在BHI及BM5中5种口腔细菌均能形成生物膜,在人唾液中没有形成生物膜.细菌生物膜形成表现为缓慢的非线性生长,出现了一个相对的生长停滞期,这个时期出现在36~48 h之间,不同细菌略有差别.激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现在培养6 h后仅有少量细菌粘附形成散在微菌落,24 h后出现生物膜的基本结构,48 h形成成熟的生物膜.结论:研究发现在体外细菌形成生物膜的能力与培养基条件密切相关,细菌生物膜形成缓慢,其间有一个相对生长停滞期.细菌定植,粘附,共集聚是生物膜形成的重要步骤.
关键词: 细菌生物膜 培养条件 微孔板 激光共聚焦扫描显微镜 -
无菌检查法中有关阳性对照菌规定的探讨
无菌检查法是针对无菌或灭菌药品、原敷料及医疗器具等的无菌可靠性而建立的检查法,而无菌检测的可信度与抽样量、检查用的培养基质量、材料、操作环境、无菌技术、方法学验证等有关.本文探讨与无菌检查法有密切直接关系的阳性对照菌种类的选择、菌量的多少、培养时间以及结果的判断,同时提出了具体改进意见,为2005版药典无菌检查法的修订提供参考.
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流感病毒在MDCK细胞上的培养条件优化
目的 探索流感病毒在MDCK细胞中培养的适条件.方法 将流感病毒分别以直接接种法和吸附接种法接种于MDCK细胞,比较其接种效果;选择其中更合理的方法,对其培养条件(培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数)进行比较和优化.结果 直接接种法相对于吸附接种法更具优势.佳收获病毒时间为72 h;胎牛血清对病毒的增殖有明显抑制作用;终浓度为2.5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价.结论 通过对MDCK细胞培养流感病毒条件的优化,可以明显提高流感病毒培养效率.
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HepG2细胞体外培养条件优化
HepG2细胞系人肝肿瘤细胞,广泛应用于体外试验,但其培养难度大,通过观察HepG2细胞在不同培养基及不同培养条件下的生长状态,对HepG2细胞的体外培养条件进行优化.结果 表明在37℃、5%CO2环境下,用含15%胎牛血清的pH7.2的DMEM培养基进行复苏、培养及用0.25%胰蛋白酶进行消化传代HepG2细胞能顺利生长、传代.
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人芽囊原虫在RPMI1640培养基中培养条件的优化
目的优化人芽囊原虫(Blastocystis hominis)在RPMI1640培养基中的培养条件.方法将B.hominis接种至RPMI1640培养基中,观察酸碱度、接种量、血清种类、浓度、温度、空气中氧与粪便标本的选择对B.hominis生长的影响.结果在RPMI1640培养基中,pH7.5、接种量200 000细胞/管、20%小牛血清,37℃,加入青霉素、链霉素为佳培养条件.结论在RPMI1640中,接种以B.hominis阳性(颗粒型为主)的血粘液便,加入20%小牛血清,青霉素、链霉素,在pH7.5于37℃条件下厌氧培养,每6 d转种一次,可达到长期培养B.hominis的目的.
关键词: 人芽囊原虫 RPMI1640培养基 培养条件 优化 -
人脐血间充质干细胞的培养条件比较
目的 摸索人脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的培养条件.方法 根据不同采血量、首次换液时间、胎龄、不同培养基对样本分组,比较不同培养条件对脐血中的间充质干细胞原代生长的影响.以流式细胞仪对培养出的间充质干细胞进行细胞表面标志检测.结果 在相同条件下.取10 ml的脐血能较大程度培养出间充质干细胞;观察首次换液时间在培养后96 h较为合适.延长换液时间有利于数量不占优势的单核细胞充分贴壁;早产胎儿的脐血培养出的间充质干细胞成功率较高;胎牛血清的质和量决定了培养成功与否.培养出的间充质干细胞不表达造血细胞系的标志(CD34、CD45、CD14)及内皮细胞的标志(CD106),强表达CD29、CD44、CD13.结论 样本量、首次换液时间、胎龄、培养基的质和量对MSCs的成活、生长有关键作用.
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石斛毛状根诱导及培养条件的优化
目的:建立石斛毛状根体系.方法:用发根农杆菌A4菌株诱导石斛外植体获得毛状根,并对毛状根的培养条件进行优化.结果:以蔗糖(3%)为碳源,添加水解乳蛋白(1g/L)的1/2MS培养基为毛状根的佳生长条件.
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金铁锁毛状根诱导的初步研究
目的:建立金铁锁毛状根诱导体系.方法:用发根农杆菌A4和C58CI菌株分别诱导金铁锁外植体获得毛状根,并对毛状根诱导过程中的多个因素进行优化.结果:金铁锁毛状根诱导的佳条件为选择幼嫩茎段和幼嫩叶片作为外植体,在培养基1/2MS+ AS 100 μmoL/L上预培养2d,用OD600=0.6的农杆菌浓度侵染15 min,在培养基1/2MS+ AS 100μmoL/L上共培养3d,转接至抑菌培养基1/2MS+ Cef 300 mg/L进行毛状根的诱导.结论:已建立起金铁锁毛状根诱导体系,为后续金铁锁有效成分的提高及金铁锁基因工程的研究积累材料.
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以卡介苗和MTB H37 Ra的原生质体为亲本制备融合菌株的实验研究
目的:以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌(MTB)国际标准无毒株H37Ra (H37Ra)的原生质体为亲本制备融合菌株。方法:制备及鉴定BCG和H37 Ra的原生质体;对荧光染色标记的亲本原生质体进行电融合,制备融合菌株,同时优化其制备和再生培养条件。结果:成功制备BCG和H37Ra的原生质体;FDA标记BCG原生质体呈黄绿色荧光,罗丹明B标记H37Ra原生质体呈红色荧光,激光共聚焦显微镜观察到电融合条件在电压E=2.2 kV/cm、电击时间t=0.8 ms,呈桔色荧光的融合子融合率高、活性好。结论:成功制备了以BCG和H37Ra原生质体为亲本的融合菌株。
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无菌检查法中有关阳性对照菌规定的探讨
无菌检查法是针对无菌或灭菌药品、原敷料及医疗器具等的无菌可靠性而建立的检查法,而无菌检测的可信度与抽样量、检查用的培养基质量、材料、操作环境、无菌技术、方法学的验证等有关.本文探讨与无菌检查法有密切直接关系的阳性对照菌种类的选择、菌量的多少、培养时间以及结果的判断,同时提出了具体改进意见,为2005版药典无菌检查法的修订提供参考.
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逆转素的研究进展
逆转素(reversine)是一种人工合成的小分子的嘌呤衍生物.它可以令已去分化的定向系细胞转变为未分化祖细胞.以往对干细胞的研究表明,非特异性的前体细胞在合适的培养条件下可以通过自我更新以及分化成为其他组织类型.由于干细胞具有可塑性,逆转素可以较容易地改变和控制其分化的进程.较早期研究显示,逆转素对于小鼠C2C12成肌细胞具有去分化作用,使其转变成未分化祖细胞的状态.这种祖细胞可以再分化为脂肪细胞和成骨细胞的.此外,其他实验也就逆转素的靶基因以及相关信号通路做了深入的研究.有研究表明逆转素具有治疗癌症的前景.本文就逆转素现有的研究证据以及潜在的作用作一综述.
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胚胎干细胞培养方法研究进展
胚胎干细胞(ESC)是一种永生化细胞,在适宜培养条件下具有永久的自我更新能力并维持未分化状态、高端粒酶活性、正常核型、胚胎表面标志及多潜能转录因子的表达,如SSEA、OCT-4、Nanog等.
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幽门螺杆菌体外培养条件的研究
目的 优化幽门螺杆菌体外培养条件.方法 通过幽门螺杆菌培养基处方及培养环境的对比,探索体外培养的实验综合条件.结果与结论用哥伦比亚培养基作为培养基础制成的选择性培养基培养效果较好,用四通管把培养罐、手动负压泵、压力表和混合气体瓶连接起来,采用抽气-换气法可以有效保证Hp所需的气体环境,并且经济实惠.幽门螺杆菌在添加了混合抗生素和优质胎牛血清的哥伦比亚培养基培养效果优胜于其它选择性培养基,实验的用品及操作过程中严格按照无菌操作规范,能有效地防止杂菌和霉菌的滋生,为提高幽门螺杆菌体外培养率提供条件.
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骨髓基质细胞的生物学特性研究进展
骨髓分造血和基质两大系统,其成骨能力来源于基质系统.骨髓基质细胞(Bone marrow stromalcells,BMSC)中的部分细胞有自我复制,高度增殖和多向分化的能力,在特定培养条件下可向骨、软骨、神经胶质细胞、心肌、骨胳肌、脂肪细胞、血管内皮细胞等间叶组织细胞转化,故又将这些细胞称为间充质干细胞(Mesenchymal stem cells)[1-2].
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双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达
目的:检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因的激活作用及其活性组分.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交检测HT-29细胞hBD-2mRNA的表达;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成份.结果:RT-PCR和Northern杂交分析显示,在正常培养条件下HT-29细胞无可见的hBD-2mRNA表达信号,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的hBD-2mRNA表达.结论双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD-2 基因的表达,双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用的活性组分.
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成人骨髓来源的间质干细胞基本生物学特性的研究
近年研究发现,机体内除胚胎干细胞外还存在具有自我更新和分化能力的组织干细胞[1],其来源于骨髓可分化为多种造血细胞.骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)初由Friedenstein发现,体外培养扩增,遗传背景稳定,而且具有多向分化潜能[2],是组织工程重要的种子细胞之一.本实验对MSC的培养条件、特性等进行了探讨.现将实验结果报告如下.