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基于ITS2序列鉴定苗药金铁锁及其混伪品
目的：本研究利用ITS2序列对苗药金铁锁及其混伪品进行鉴定研究，从而确保药材质量，保障临床用药安全。方法：提取金铁锁药材及其混伪品基因组DNA，PCR扩增并双向测序获得ITS2序列。所有序列经过CodonCode Aligner V3.7.1拼接后，采用MEGA5.1软件进行序列比对，计算种内和种间Kimura 2-Parameter（K2P）遗传距离，并构建系统发育树。采用相似性搜索法、近距离法、邻接（NJ）树法对ITS2序列鉴定能力进行评估。结果：金铁锁药材的ITS2序列长度为229 bp ，其ITS2序列种内大K2P遗传距离小于与混伪品的小种间K2P遗传距离；应用相似性搜索法表明ITS2序列能够准确鉴定金铁锁药材及其混伪品；基于ITS2序列构建NJ树，金铁锁及其混伪品均表现出良好单系性，均能明显区分。结论：ITS2序列能够稳定、准确地鉴定金铁锁药材及其混伪品，DNA条形码技术可为金铁锁药材及其混伪品的鉴定提供新的方法。
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金铁锁不同居群药材质量评价研究
目的：对珍稀濒危植物金铁锁不同野生居群药材样品进行质量评价，为其人工引种、良种选育及规范化种植提供科学依据。方法：用水分测定法、灰分测定法、浸出物测定法对16份不同居群的金铁锁药材质量进行了评价研究。结果：不同居群药材样品的水分、总灰分、浸出物含量有显著的差别。其中，象山居群药材的水分和总灰分含量低，浸出物含量高；六德居群药材的总灰分含量高，浸出物含量低；顺州居群药材的水分含量高。结论：不同野生居群药材质量有差别，发现稀缺药用植物金铁锁优势居群为其人工培植和可持续利用提供科学依据。
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珍稀濒危药用植物金铁锁的组织培养和快速繁殖研究
金铁锁(Psamnosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu)为珍稀濒危药用植物,属国家二级保护植物,可治疗风湿痹痛,胃痛,创伤出血,跌打损伤.为有效保护其野生资源,对金铁锁进行组织培养和快速繁殖研究,以金铁锁幼嫩茎段作外植体,在MS+IAA0.1-1.0+BA0.5-1.0培养基上一步分化成苗;在MS+BA0.5-1.5+KT0.1-0.5+IAA0.1-0.5+2,4-D0.1-0.5+NAA0.1-0.5培养基上增殖;分化出的苗在1/2MS+NAA0.1-0.2+IBA0.1-0.2培养基上迅速生根,生根率可达100%.为了实现金铁锁的快速增殖,使用正交实验探讨了不同生长调节物质对其增殖的影响和佳培养条件的筛选:MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L KT+0.1mg/L IAA+0.2mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D培养基,培养温度19.5±1℃,光照强度1200Lx,光照周期12小时为优化培养条件.
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金铁锁及其总皂苷体内抗炎作用分析
目的:探讨金铁锁(PR)及其总皂苷(PRTS)的抗炎镇痛作用,并探讨其抗炎机制.方法:实验动物随机分为空白组(大鼠),模型组(大鼠、小鼠),阳性药组(小鼠:吲哚美辛,元胡止痛胶囊0.585 g·kg-1),金铁锁75％乙醇提取物(PR)高、中、低剂量组(小鼠:0.651 1,0.217,0.072 35 g·kg-1,大鼠:0.450 8,0.150 3,0.050 08 g·kg-1),金铁锁总皂苷(PRTS)高、低剂量组(小鼠:0.233 4,0.025 94 g·kg-1,大鼠:0.161 6,0.017 96 g·kg-1).采用醋酸诱导扭体实验和热板实验来评价镇痛作用;采用二甲苯诱导小鼠耳肿胀实验,脂多糖(LPS)诱导大鼠腹膜炎来评价抗炎作用,通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠腹膜组织的病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中的炎症因子白细胞介素(IL)-6,IL-10.探寻潜在机制,通过大鼠肠系膜组织免疫组化观察肿瘤坏死因子(TNF)-α,IL-1β,核转录因子-κB(NF-κB) p65的表达.结果:与空白组比较,PR及PRTS各剂量组减轻小鼠耳肿胀(P＜0.01),减少小鼠化学致痛扭体次数(P＜0.05,P＜0.01);PRTS高剂量组能提高小鼠痛阈值(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,PR及PRTS各剂量组对急性腹膜炎大鼠腹膜组织病变有所改善,能降低炎症因子IL-6含量(P＜0.01),同时降低TNF-α,IL-1β,NF-κB p65在肠系膜组织的表达,PR高剂量及PRTS高剂量组能降低IL-10含量(P＜0.05).结论:金铁锁及总皂苷具有一定的镇痛抗炎作用,其机制可能与下调炎症因子的释放与表达,抑制NF-κB信号通道有关.
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金铁锁体外抗氧化活性研究
目的:研究金铁锁体外抗氧化活性.方法:采用清除采用清除二苯代苦味酰基( DPPH)自由基、清除[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基及铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法,对金铁锁体外抗氧化活性进行评价,并阳性对照没食子酸丙酯(PG)、丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)比较.结果:金铁锁3个提取物体外抗氧化活性均弱于阳性对照PG,BHA,BHA.在3个提取物中,金铁锁乙酸乙酯提取物清除ABTS自由基(IC50=40.54mg·L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC=(696.9±2.42) μmol·g-1]较强；正丁醇清除ABTS自由基(IC50=83.38 mg· L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC =(166.1±1.06) μmol· g-1]次之,石油醚提取物弱.结论:金铁锁乙酸乙酯部位体外抗氧化活性较强.
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金铁锁有效部位的化学成分
目的:研究金铁锁有效部位的化学成分.方法:采用柱色谱法从金铁锁的正丁醇部位分离得到7个化合物,通过波谱技术鉴定了5个化合物.结果:5个化合物分别是16-异皂树酸(16-isoquillaic acid,1)、丝石竹苷元(gypsogenin,2)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(α-spinasterol-3-O-β-D-glucoside,3)、α-菠甾醇(α-spinasterol,4)、胡萝卜苷(daucosterol,5).结论:化合物1～3为首次从金铁锁中分离得到的天然化合物.
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中药金铁锁中一个新的环七肽
目的:研究中药金铁锁中的化学成分.方法:利用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、硅胶、RP-18反相柱、中压等色谱方法进行化合物的分离纯化,根据化合物的理化性质、光谱数据进行结构鉴定.结果:从中药金铁锁中分离得到两个环七肽成分,tunicyclin C(1)和tunicyclin K(2).结论:Tunicyclin K为一个新的天然产物.
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金铁锁化学成分、药理作用和临床应用研究进展
总结金铁锁在化学成分、药理作用和临床应用方面的研究资料,发现研究缺口或不足,为金铁锁进一步开发提供参考.方法 查阅近些年有关金铁锁在化学成分、药理作用、临床应用等方面的文献、书籍,并对其进行汇总、分析、综述.结果 金铁锁的化学成分主要为三萜皂苷、环肽和内酰胺类等成分.药理研究表明,金铁锁具有镇痛、抗炎作用,并对免疫功能有一定的调节作用.从临床应用来看,金铁锁主要用于跌打损伤、风湿痹痛和出血性疾病.结论 金铁锁在抗炎、镇痛、止血等方面作用显著,但对该药其他作用研究较少,机制尚不很明确,建议加强金铁锁其他药效学评价及安全性研究,为民族药开发研究提供参考与依据.
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金铁锁生物学特性及保护研究
目的:研究分析金铁锁濒危机制,提出保护措施,为保护资源提供依据.方法:采用野外实地调查方法,研究金铁锁自然分布、生境条件、生物学特性和生长适应性等.结果:金铁锁耐贫瘠、干旱、寒冷、忌雨水过多.由于生境破坏,种群数量大量减少.结论:为保护资源,金铁锁开发利用应走种植和深精加工道路.
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珍稀濒危药用植物金铁锁研究进展
金铁锁属石竹科金铁锁属,为单属单种多年生草本植物.由于其根部具有较高的药用价值,遭到制药企业大规模采挖,目前野生居群呈间断分布,居群大小和数量逐年减少,濒危程度日趋严重.文章总结综述近年来金铁锁在分类与系统学地位、生态地理分布与生活史、化学成分与药理作用、胚胎与繁殖生物学、遗传多样性 与遗传结构方面的新研究进展,为更全面地探讨金铁锁的濒危机制、制定合理的保护措施、以及规模化的GAP种植提供参考.
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苗族药物金铁锁研究进展
苗药金铁锁(苗语:Jenb tieeg sox)系苗族习用药材[1],首载于<滇南本草>,为石竹科植物金铁锁 Psammosilene tunicoides.W.C.Wu et C.Y.Wu的干燥根.别名独定子、昆明沙参、蜈蚣七、对叶七、白马分鬃等,分为布于贵州、四川及云南、西藏等地,具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功,用于跌打损伤、风湿痛、胃痛、创伤出血等的治疗[2].目前金铁锁作为一种民间药物被日益重视,正在进行广泛深入的研究和开发.为了系统整理和进一步研究,现就金铁锁的研究状况做一综述.
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均匀设计法结合药效学指标优选金铁锁提取工艺
目的:针对抗炎、镇痛和急性毒性作用,优选金铁锁药材的佳提取工艺条件,探讨几种浸出物量与药效学指标间关系.方法:采用均匀设计法,部分指标取相对水平,以抗炎、镇痛实验结果和LD50作为评价指标,对金铁锁的提取工艺条件进行优选,同时测定干膏率、水浸出物、醋酸乙酯浸出物、乙醚浸出物.结果:佳提取工艺为:8倍量pH 6～7的水回流提取2次,每次2 h;佳提取工艺条件验证结果满意;干膏率、水浸出物、醋酸乙酯浸出物、乙醚浸出物与药效学指标不存在明显相关关系.结论:用均匀设计法结合药效学指标优选金铁锁提取工艺条件,具有与功能主治密切结合的特点,所得佳提取工艺条件适合工业生产,且药效学验证结果较为稳定.研究结果还表明,所测定的几种浸出物均不宜作为与功能主治有关的质量控制指标.
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金铁锁根中的3个环二肽
目的:对金铁锁中的环肽成分进行系列研究.方法:利用柱层析进行化合物的分离,用波谱法鉴定其结构.结果:从其丙酮溶解部分分离得到3个环二肽,其结构分别为环(脯-缬)(1)、环(脯-丙)(2)和环(脯-脯)(3).结论:化合物1和2为新的天然产物,化合物3为首次从金铁锁中得到.
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金铁锁根的化学成分研究
目的:研究金铁锁根的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱分离纯化,利用ESI-MS,EI-MS,NMR技术确定化合物的结构.结果:分离并鉴定了7个化合物,分别为goyaprosaponin(1),大豆脑苷I(soyacerebroside I,2),鸢尾苷(rectoridin,3),α-菠甾醇(α-spinasterol,4),正二十五烷酸(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7).结论:化合物2～7均为首次从该属植物中分离得到.
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金铁锁化学成分及抑菌活性研究
目的:研究金铁锁的化学成分及抑菌活性.方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等手段进行分离、纯化,根据波谱数据和理化性质进行结构鉴定.结果:从金铁锁的乙醇提取物中分离得到10个单体化合物,分别为对羟基苯甲酸甲酯(1),N-甲基糖精(2),3-羟基--4-甲氧基苯甲酸(3),日尔曼醇(4),二十三烷酸(5),二十八烷(6),杜鹃花酸(7),琥珀酸(8),stellarine A(9),齐墩果烷-12-烯-3α,16α-二羟基-23,28-二酸(10).结论:除化合物10之外,其他化合物均为首次从金铁锁属植物中分离得到.研究表明化合物8,9有一定的抑菌活性.
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基于人血成分的金铁锁药材质量标准研究
采用高效液相色谱法建立了金铁锁药材中尿囊素的含量测定方法.金铁锁药材经乙醇提取后,取续滤液进行分析.采用ZORBAX NH2色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),检测波长220 nm,柱温40℃,流动相为乙腈-水(93:7),流速1.0mL·min-1.结果表明,尿囊素线性关系良好,具有较好的精密度和重复性.在0.0104～0.166g·L-1,尿囊素的线性相关系数R2 =0.999 4(n=5);RSD(n=6)小于2.1％；平均回收率为95.47％～100.9％.该方法具有良好的灵敏度、回收率和重复性,可为金铁锁药材的质量控制提供参考.
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金铁锁化学成分研究
采用硅胶、凝胶柱色谱等多种分离手段从金铁锁Psammosilene tunicoides中分离得到3个化合物.根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构分别为3,3′-(4,5-dimethoxynaphthalene-2,7-diyl) bis(1-nitropropan-1-one)(1),α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)和α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷-6 ′-O-棕榈酸酯(3).1为含硝基的新化合物,2和3为从本属植物中首次分离得到.
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金铁锁中1个新β-咔啉生物碱
目的:研究金铁锁的化学成分.方法:采用多种色谱方法分离纯化,运用多种波谱分析手段进行化合物结构鉴定.结果:从金铁锁正丁醇部位分离得到2个β-咔啉类生物碱,经结构鉴定分别为1-乙酰基-3-甲酯基-β-咔啉(1),1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉(2).结论:化合物1为首次从该植物中分离得到天然产物,化合物2为新化合物.
关键词： 金铁锁 化学成分 1-乙酰基3-甲酯基-4羟基-β-咔啉 -
基于中药系统鉴别法的金铁锁及其混淆品的精确鉴别
目的:建立金铁锁药材及其混淆品有效的鉴别方法,分析二者在显微特征、DNA信息特征等方面的差异,为精确鉴定金铁锁药材及其混淆品,以保障用药安全奠定基础.方法:采用中药系统鉴定,对金铁锁药材及其市售混淆品样本的显微特征及其ITS序列进行BLAST比对分析、ITS序列的特异位点差异分析,N-J系统发育树分析等,建立金铁锁及其混伪品的系统鉴定方法.结果:中药系统鉴定法的显微特征中,金铁锁正品药材中无草酸钙结晶,而其混淆品瓦草中具有大量的草酸钙簇晶分布,可作为其鉴定的重要依据之一；此外,金铁锁药材ITS序列与瓦草ITS序列差异明显,采用BLAST比对分析、N-J系统发育树分析等可将二者进一步精确鉴别.结论:采用中药系统鉴定法能够很好的对金铁锁及其混伪品进行精确的鉴别.
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金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立
目的:研究金铁锁毛状根制备方法及液体培养条件,为规模化生产金铁锁提供技术支持.方法:利用发根农杆菌ACCC10060菌株侵染金铁锁幼叶及茎段.结果:将外植体与菌液(A6000.8)在含有20mg·L-1乙酰丁香酮的B5培养基上共培养48h,可以有效地诱导金铁锁毛状根;叶片比茎段的诱导率高.转化的毛状根具有激素自养和抗卡那霉素的特性,并且组织中含有冠瘿碱,证明该菌对金铁锁组织成功地进行了转化.在无激素的1/2Ms液体培养基中培养35d后,金铁锁毛状根生物量增加了14.11倍(鲜重)和8.39倍(干重),其总皂苷为0.857%(干重),愈伤组织和原植物中分别为0.388%,0.217%.结论:金铁锁毛状根离体培养系统的成功建立,对进一步规模化培养金铁锁毛状根具有重要意义.
