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抗原特异性TCR基因转导T淋巴细胞治疗的研究进展
过继性细胞免疫治疗是一种有广阔应用前景的治疗肿瘤的方法.传统的方法是将自然产生的特异性肿瘤杀伤细胞(CLT)在体外扩增后回输入患者体内[1].美国国立癌症研究所进行的临床研究表明,在转移性黑色素瘤患者身上联合使用特异性肿瘤杀伤细胞(CLT)、淋巴细胞删除性化疗和IL-2能产生50% ~ 70%反应率.但是,特异性的肿瘤活性淋巴细胞的扩增需要消耗大量的时间,对技术的要求也很高,因此限制了这项治疗在癌症患者身上的广泛运用[2].
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CD4+CD25+调节性T细胞抑制自身免疫性糖尿病的作用机制探讨
1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)是由于自身反应性T细胞持续活化并破坏胰岛β细胞,使胰岛素分泌功能受损引发的代谢紊乱综合征,属于自身免疫性疾病.在T细胞发育过程中,胸腺可通过阴性选择消除自身反应性T细胞克隆,从而避免自身免疫应答的发生,此即中枢耐受机制.然而,一些自身反应性T细胞能够逃避阴性选择,识别外周组织抗原,从而引起自身免疫病.事实上,所有个体体内都存在自身反应性T细胞,但是自身免疫病仅仅发生在5%的人身上,这是因为体内还具有抑制从中枢耐受机制中逃逸的自身反应性T细胞活化及发挥效应的外周耐受机制.而调节性T细胞(Regulartory T cell,Treg)则是参与建立外周耐受机制的重要因素,尤其是CD4+CD25+Treg,一直是近年来的研究热点.对T1D患者的研究发现,病人体内的CD4+CD25+T细胞普遍出现数量减少或者调节能力减弱[1,2];同样,对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的观察也发现患病小鼠体内该亚群T细胞水平降低.因此,CD4+CD25+Treg可能在抑制胰岛自身抗原特异性T细胞活化,控制自身免疫性糖尿病发生发展方面发挥着重要作用.
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抗猪IgM单克隆抗体的研制
随着规模化养猪业的发展,我国已相继出现多种新的猪传染病,包括猪繁殖与呼吸综合征、副猪嗜血杆菌和猪圆环病毒Ⅱ型感染等[1-3],并已引起严重的经济损失.研制抗猪IgM单抗来检测这些疫病特异性IgM型抗体,将为该疾病早期诊断提供新且简便的途径.近年来研究发现抗原特异性B细胞有高效抗原递呈作用[4],其膜表面抗原受体对抗原的摄取、浓缩和处理起着重要作用.用抗猪IgM μ链McAbs和抗体-抗原的McAbs组成的双特异性抗体,既能与抗原特异性结合,又能与B细胞膜表面抗原结合,从而能进一步在体内外从分子水平上研究B细胞抗原递呈特点,并且为显著降低疫苗接种剂量,提高机体免疫能力的探索提供新的实验手段.鉴此,本实验室用PEG融合技术,研制出分泌抗猪IgMμ链McAbs杂交瘤细胞株.
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新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定
目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定.方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性.结果:B7-2-PE40KDEL经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为72 628,与理论预测值69 561相比误差在5%之内;全波长扫描分析显示该目的蛋白分别在225 nm和276 nm处各有一吸收峰;MALTI-TOF-MS质谱测定共获得15个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为60 000~80 000的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与我们预测的目的蛋白相符;Western blot实验显示B7-2-PE40KDEL能与人B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT杀伤活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28+的人T淋巴瘤细胞系Jurkat产生特异性杀伤,而对不表达的CD28-淋巴细胞系Raji无任何杀伤.结论:重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白为一全新的具有靶向B7:CD28细胞杀伤活性的蛋白质.
关键词: 重组外毒素融合蛋白 B7-2-PE40KDEL 肽谱 抗原特异性 生物学活性 -
HLA-DQB1等位基因与高血压病的相关性研究
高血压病属于多基因疾病,遗传度达62%,但遗传机制尚不清楚.国外许多血清学或基因相关性研究、连锁分析均显示HLA抗原特异性或等位基因与高血压病的易感性相关,但存在种族特异性.
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抗原致敏的脐血树突状细胞诱导抗肿瘤效应的体外实验研究
树突状细胞(Dendritic cell,DC)连接先天和适应性免疫.其特点是捕获抗原和加工,迁移到淋巴器官和表达抗原特异性淋巴细胞活化的各种共刺激分子的能力强[1].
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HSP65-HBV 表位融合蛋白对人PBMC的激活作用
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)HSP可引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原性物质在抗原递呈细胞内经MHC Ⅰ类途径加工递呈,提供激活抗原特异性CTL的信号.PADRE是一种辅助T细胞表位,辅助T细胞的活化对CTL的激活有促进作用.
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抗原特异性T细胞的检测方法及其应用
抗原特异性T细胞(antigen specific T cell,AST)在防御病毒感染,肿瘤发生以及自身免疫性疾病方面都具有重要作用,检测细胞的活动以鉴别淋巴细胞对特异刺激的反应,在研究这些疾病的发病机制及治疗方面都有重要意义.在单细胞水平同时检测相关功能分子的活性状态将有助于更全面的分析细胞的活性状态[1].一些新方法已经建立,这使得抗原反应性T细胞可直接检测而无需通过体外扩增[2],新一代的T细胞分析使得直接定量或鉴定特异性T细胞反应更为方便.本文主要就有关抗原特异性T细胞检测方法及应用状况综述如下.
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树突状细胞扩增抗原特异性CD4+ CD25+调节性T细胞研究进展
CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T细胞.研究证实,CD4+ CD25+ Tr在抑制器官特异性自身免疫性疾病及GVHD是抗原特异性的,因此,应用器官特异性而不是多克隆性的Tr将大大促进以Tr为基础的免疫治疗.而具有调节活性的CD4+ CD25+ Tr仅占人类外周血CIM+ T细胞的1%~2%,因此,研究体外大量扩增的方法 对于以Tr基础的治疗至关重要.研究表明,树突状细胞(DC)作为机体强有力的专职抗原递呈细胞可以扩增具有抗原特异性的CD4+ CD25+ Tr且能增加后者的抑制活性,这为治疗自身免疫性疾病及GVHD提供了新的治疗前景.
关键词: 树突状细胞 CD4+ CD25+调节性T细胞 抗原特异性 -
088人造的抗原提呈细胞成为免疫学研究"利器"
抗原提呈细胞(Antigen-presenting Cells,APC)与T细胞之间稳定的相互作用除了依靠T细胞抗原受体(TCR)与其配体间的绝对亲合力外,尚靠相关的分子在胞膜上向初始活化点移动而形成的所谓的"帽"结构,"帽"的形成直接结果是导致免疫"突触"的形成.免疫突触是TCR和APC细胞上的MHC分子及其它相关分子聚集在一起而形成的结构,它是T细胞活化信号传递的通道.目前,研究抗原特异性的T细胞的方法,只能简单地模拟APC与T细胞的物理结合,而谈不上模拟"帽"结构形成的生理过程,这大大限制了相关研究的深入.加州大学圣地亚哥分校的科学家贝伦特(Berent prakken,University of Califomia at San Diego,La jolla,Califoma)发明了一种人工合成的APC(aAPC)用于T细胞与APC相互作用的研究.aAPC包括一个脂质体及在其中的MHCⅡ类抗原分子,一个aAPC系统有60-90μm大小,含有60~160个MHC分子,MHC肽复合体可自由在脂质体人造膜上移动.在T细胞与aAPC作用时,MHC分子与TCR分子聚集在免疫突触部位.
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调节性T细胞对胰岛抗原特异性TCR转基因NOD鼠糖尿病的调节
胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)由胰腺β细胞的自身免疫损伤引起,非肥胖糖尿病(NOD)鼠是研究IDDM发病机制的动物模型,对IDDM的易感性与某些MHCⅡ类基因密切相关,但是环境因素也有重要作用,如细菌、病毒感染、环磷酰胺(CY)注射等.
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流感病毒感染中的T细胞应答
本文中总结了应用T细胞受体转基因模型和主要组织相容性复合物Ⅰ类四聚体研究流感感染时的效应细胞和记忆细胞应答,包括抗原特异性CDC4CD+T细胞的生成,多样性及其向肺部的移动,以及其在清除病毒中的作用.对于效应细胞和记忆细胞在病毒感染中的作用以及效应细胞如何转变为记忆细胞,都有比较详尽的阐述.
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011 人巨细胞病毒抗原特异性CD4+T细胞分泌细胞因子诱导内皮细胞Fractalkine的表达
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034 抗原特异性T细胞计数法快速检测结核分枝杆菌感染
迄今为止对于检测潜在的结核分枝杆菌(简称结核杆菌)感染尚无可靠的方法,即使在活动性结核病人中,感染也是经常未被证实。作者设想,结核杆菌抗原特异性T细胞数可能表明感染,故计数了4……
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066 以志贺菌为载体的DNA疫苗诱导抗原特异性CD8+T细胞及抗病毒免疫
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021 分枝杆菌ESAT-6序列插入DNA疫苗增强鼠抗原特异性IFN-γ和IgG2a应答
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021 能增强抗原特异性免疫应答的新局部接种法
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061 肌肉注射卵白蛋白/白细胞介素18融合DNA可有效诱导抗原特异性Th1型免疫应答
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040 Vaxfectin提高抗原特异性抗体滴度并维持对质粒DNA疫苗的Th1型免疫应答
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γδT细胞和αβT细胞在体外抗原特异性免疫应答中的协同作用
γδT细胞和αβT细胞是两种表型和功能不同的T淋巴细胞亚群.为研究两种细胞在抗原特异性免疫应答中是否具有协同作用,并进一步探讨其相互作用的方式,本文利用实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠模型获得脾脏和淋巴结T细胞,用.γδTCR和αβTCR单克隆抗体染色,分别用带有磁珠的抗FITC和抗PE单克隆抗体通过阳性或阴性选择获得高度纯化的γδT细胞和αβT细胞,观察不同比例的γδT细胞和αβT细胞在体外共孵育后IRBP1-20抗原特异性增殖和细胞因子表达,并用细胞培养薄膜将二者分开,测定细胞因子表达情况.结果表明,γδT细胞或αβT细胞(99%纯度)都不能单独发生抗原特异性免疫应答.只有在二者比例为5%γδT细胞和95%αβT细胞时能产生大的抗原特异性反应.当两种细胞脱离接触时,不能出现抗原特异性反应.γδT细胞或αβT细胞的培养上清也不能使γδT细胞或αβT细胞发生抗原特异性反应.本研究提示,小鼠γδT细胞和αβT细胞在抗原特异性免疫应答中具有协同作用,这种协同作用是通过两种细胞相互接触,γδT细胞协助αβT细胞产生免疫应答实现的.