供体树突状细胞与脾细胞介导肾移植受体淋巴细胞反应的比较

目的 探讨用供体骨髓源性树突状细胞(dendritic cells,DC)介导肾移植受体淋巴细胞反应的可行性.方法 肾移植前分别取供体骨髓和脾脏(n=13),分离单个核细胞,液氮冻存备用;术后1、3、6、9个月以冻存的骨髓细胞分离CD34+细胞培养DC并复苏脾细胞分别作为刺激细胞,观察活细胞比率,健康志愿者以及受体淋巴细胞对DC和脾细胞刺激的反应.结果 与术前相比, 随术后时间延长,脾细胞中活细胞比率呈进行性降低(94%～14.8%),各组DC活细胞比率为92.2%～95.3%;健康志愿者以及受体淋巴细胞对脾细胞刺激的反应均进行性降低,健康志愿者淋巴细胞对DC刺激的反应波动在稳定水平(13 870±1 461～14 303±1 794,P＞0.05),受体淋巴细胞对DC刺激的反应波动在13 650±1 678～7 796±1 083.结论 供体骨髓源性DC具有稳定的细胞活力和刺激能力,作为术后长时间内介导肾移植受体淋巴细胞反应的刺激原,明显优于供体脾细胞.

树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫

T细胞介导的免疫应答在抗肿瘤免疫和抗病毒免疫中起主导作用,T细胞的致敏激活和扩增依赖于抗原提呈细胞(APC)提呈相应的抗原多肽和提供共刺激信号,分泌Th1型应答主导因子,诱导机体生成抗原特异性CTL,并通过细胞溶解机制和非细胞溶解机制对肿瘤或病毒产生杀伤或抑制,因而APC是启动机体产生抗肿瘤免疫和抗病毒免疫的中心环节,能否进行有效的抗原提呈直接关系到免疫激活或免疫耐受的诱导.APC包括树突状细胞(Dendritie cells,DC)、巨噬细胞、B细胞等,其中DC是机体有效、功能强的抗原提呈细胞,其在激发免疫反应中起核心作用,因此,DC在肿瘤和抗病毒免疫中的作用研究越来越受到广大学者的重视.

抗原特异性T细胞活化后Foxp3、CTLA-4及细胞因子mRNA表达水平的动态分析

目的 研究抗原特异性T细胞活化后,其所表达的Foxp3、CTLA-4和细胞因子的动态变化,为深入了解特异性免疫应答调控奠定基础.方法 体外采用树突状细胞(DC)系D2SC/1作为抗原提呈细胞(APC)将OVA323-339直接提呈给OVA特异性TCR转基因小鼠DO11.10来源的CD4+T细胞.采用CCK-8法测定细胞活化增殖情况.并应用Real time-PCR动态分析细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10、TGF-β,CTLA-4和Foxp3的mRNA表达水平.结果 OVA特异性T细胞活化所需的佳OVA剂量为2 μmol/L,T细胞活化后IL-2、IFN-γ、IL-10和TGF-β mRNA表达水平高峰值分别在8、4、2 h和8 h,Foxp3 mRNA在2 h时有一过性的表达峰,随后在24 h又有所升高,而CTLA-4 mRNA在静止时有较高水平的表达,但活化后迅速下调,其在24 h内无明显变化.结论 初步了解了适应性免疫应答中Foxp3、CTLA-4和主要免疫调节相关的细胞因子表达趋势,为深入研究适应性免疫应答调控机制奠定初步基础.

CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增和免疫治疗进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Regulaory T cell Treg)在控制对自身抗原的外周免疫耐受方面起了很重要的作用,但其数量低,对T细胞受体(T cell recpter TCR)刺激的无反应性和增殖无能的表型,限制了这一强大的致免疫耐受群体在自身免疫性疾病和移植输注治疗中的应用,能否有效地在体外扩增CD4+CD25+Treg,是CD4+CD25+Treg能否应用于临床治疗的关键.本文就近几年CD4+CD25+Treg,尤其是抗原特异性CD4+CD25+Treg的体外扩增方法及其免疫治疗进展进行综述,以利于自身免疫性疾病和移植物抗宿主病治疗方法的深入研究.

血液系统恶性肿瘤特异性免疫治疗的研究进展

传统的化疗、骨髓移植或细胞因子介导的系统的免疫治疗,对其它组织都有不同程度的损伤,而特异性免疫治疗因具有杀伤性强,副作用小,能显著提高肿瘤治疗的疗效等优点,成为目前研究的热门课题.本文拟就血液系统恶性肿瘤特异性免疫治疗的研究进展作一概述.

146.1 162例新生儿同种免疫性血小板减少症揭示的人类血小板抗原特异性同种抗体

同种异基因抗原特异性调节性T细胞的体外扩增

目的 建立用人B淋巴细胞体外获得大量的同种异基因抗原特异性调节性T(Treg)细胞的方法,以此检测扩增细胞的表型及其免疫无能性和免疫抑制性.方法 第1轮扩增将免疫磁珠分选的人CD4+CD25+T细胞和人B淋巴细胞按1∶4体外混合培养,并加入外源白介素-2(IL-2)和抗-CD28；将第1轮扩增得到的Treg细胞用抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠和IL-2刺激,做第2轮扩增以获得更多数量的抗原特异性Treg细胞,分为添加和或未添加免疫抑制剂雷帕霉素( RAPA)2组(n=3).结果 经过2轮的扩增后,在第2轮扩增中未添加RAPA组扩增1×103倍,纯度＞80％；添加RAPA组扩增0.8×103倍,纯度＞90％.添加RAPA组得到的Treg细胞的Foxp3、CTLA4、CD39表达水平高于未添加RAPA组,但是HLA-DR变化不大；未添加RAPA组扩增得到的Treg细胞分泌低水平的IL-2、IL-17、IL-4和IFN-γ,而添加RAPA组得到的Treg细胞几乎不分泌上述各种细胞因子,前者表现出部分免疫反应无能性,后者表现出完全的免疫反应无能性,两者都表现出免疫抑制性功能特征.人B淋巴细胞扩增得到的抗原特异性Treg细胞能够极大地抑制同源抗原引起的免疫反应,而对多克隆刺激的免疫反应抑制能力较弱.结论 用人B细胞体外扩增抗原特异性Treg细胞,再通过抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠进一步刺激可以体外获得大量的抗原特异性的Treg细胞,加入RAPA后可有效地提高Treg细胞的纯度和免疫抑制力且呈现抗原特异性.

抗原特异性调节性T细胞的研究进展及其在临床中的应用前景

调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)在免疫耐受中发挥着至关重要的作用,可以通过控制对自身抗原的免疫反应来预防自身免疫性疾病的发生,同时能够抑制免疫系统对外来抗原的应答,从而减少T细胞介导的病理性免疫应答.近年来研究显示器官特异性自身免疫的抑制作用依赖于Treg的抗原特异性.一种新兴的 Treg作用模式是表达特异性抗原的树突状细胞激活抗原特异性Treg并使其获得抑制活性.因此,抗原特异性 Treg的过继治疗比多克隆Treg更为有效,确定相关抗原,并从多克隆Treg中扩增出抗原特异性Treg.该文对抗原特异性Treg的扩增技术、功能、抗原特异性以及Treg在临床中的潜在治疗进行了综述.

重组人Jo-1自身抗原的克隆、原核表达及抗原特异性鉴定

目的:旨在获得高纯人Jo-1抗原(即组氨酰-tRNA合成酶).方法:利用RT-PCR从人胎盘总RNA中获得Jo-1的编码基因,并分别用IMPACT-CN和pMAL系统的pTYB11、 pMAL-c质粒,构建了表达载体,转化至大肠杆菌ER2566、 BL21.结果:经筛选与鉴定,得到阳性重组子诱导表达后均获得Jo-1融合蛋白.Western blot显示,这两种融合蛋白都具有Jo-1抗原特异性,即仅与含Jo-1抗体的多肌炎和皮肌炎自身免疫病患者血清反应,而与正常人以及188例含有其他自身抗体(分别为RNP阳性、 Sm阳性、 Ro/La阳性和RNP/Ro阳性)的患者血清均为阴性反应.结论:在两种表达载体中,pMAL-c-Jo-1的表达量超过菌体蛋白的50%,而且以可溶性形式存在,有利于分离纯化,为临床检测创造了条件.

S100A10蛋白的表达及其抗体的制备

目的 制备S100A10蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR扩增编码S100A10的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的蛋白产物经镍柱亲和层析纯化后,作为抗原皮内接种免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体,分别以ELISA,Western blot法检测抗体的滴度和抗原特异性.结果 成功构建原核表达载体pET28a(+)-(S100A10)2,得到纯化的(S100A10)2蛋白,制备的多抗具有较高的抗体滴度和抗原特异性.结论 建立了S100A10原核表达及纯化系统,成功制备了S100A10的多克隆抗体,为S100A10的进一步研究提供了工具.

抗原特异性T细胞检测技术研究的进展

抗原特异性T细胞在细胞免疫应答中发挥着核心作用,而细胞免疫在清除病毒感染以及肿瘤的过程中又起关键作用.因此,对于抗原特异性T淋巴细胞的检测可为机体细胞免疫功能的评价提供重要信息.我们从表型到功能对抗原特异性T淋巴细胞的检测技术进行简要概述.总体而言,相关的技术平台与方法正在朝着高通量和动态性的方向发展,无论对于基础研究或者药物筛选都具有极大的促进作用.

福建省汉族人群HLA-B15组和B40组抗原特异性分布的研究

目的了解福建省汉族人群HLA-B15组和B40组抗原特异性的分布情况.方法采用反相PCR-SSO技术做基因分型,并分析各等位基因对应的抗原特异性.结果171名福建省汉族人中HLA-B15基因频率为0.125 7,分属3种抗原特异性,其抗原特异性分布与上海地区人群无显著性差异;HLA-B40基因频率为0.236 8,分属3种抗原特异性,其抗原特异性分布与上海地区人群存在显著性差异.结论福建省汉族人群HLA-B15组和B40组抗原特异性的分布有其自身特点.

乙型肝炎的免疫应答的研究进展

HBV感染后的转归依赖于病毒因素和免疫系统之间的平衡。病毒因素包括初始感染剂量、病毒复制动力学和扩散能力。免疫系统因素包括：动力学、特异性、体液和细胞免疫应答的持久性，以及其它非抗原特异性效应器机制如天然免疫应答的激活和细胞因子产生。土拨鼠的研究结果提示慢性化表现在感染后出现低免疫应答的动物上，伴低水平细胞因子产生和严重程度较轻的急性肝炎(1)，提示初始免疫应答的强弱是确定感染后转归的关键因素。

沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性

目的　检测所构建的沙眼衣原体(Ct)重组疫苗株口服免疫小鼠后，产生的体液免疫应答. 方法　将所构建的重组菌以 5×108菌落形成单位(CFU)/只的剂量，口服免疫雌性BALB/c小鼠，随机分为7组，每组3只. 于免疫后第2，7，14， 21，28，35和42 d各取1组，采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本. 分别以D型Ct和 鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原，检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG，IgA和IgM. 取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本，分别用于检测与C型Ct的交叉反应. 结果　在血清标本中，有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM，在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA. 抗D型Ct IgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应. 结论　所构建的疫苗株免疫小鼠后，能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生.(潘伯荣)

聚合酶链反应技术在感染性疾病诊断中的应用

在感染性疾病诊断中,病原微生物检出阳性率对其有重要影响.病原微生物常规检测方法,主要是针对目的微生物的培养特性、生化反应、抗原特异性及噬菌体敏感性等表型特征进行分析,但由于表型特征的相对不稳定性以及表型鉴定耗时较长等原因,人们一直在探索更可靠、更快捷、更敏感的微生物检测技术.聚合酶链反应(polymerase chaireaction,PCR)技术作为一种以体外核酸扩增为基础的经典分子生物学技术[1],为某些感染性疾病的早期病原学确认提供了有效帮助,现已成为感染性疾病诊断中不可或缺的手段.

疫苗诱导性抗体应答的评价：新技术的影响

针对免疫接种则产生的宿主应答在历史上已经通过抗体滴度的变化而进行了评价，这种滴度的变化是通过免疫接种后与免疫接种前的滴度进行比对而发现的，抗原特异性抗体滴度呈4倍或较大提高已经被理解成在针对疫苗接种的应答中抗体产生有所增高。新的技术，如象粒珠试验能够使研究者和临床医生检测出精确的抗体水平（以每毫升的浓度进行报告），其水平范围在以往采用的如象ELISA这样的标准测定所得数值的上下范围之内，为测定针对免疫接种而产生的宿主应答，在用粒珠试验数据进行评价时是采用倍数改变和绝对值变化评估的，用一通用的线性模型校正统计学数据，当免疫接种前抗体水平很低时，抗体应答则呈现出非常不同的图形。在粒珠试验中绝对值的变化尽管不是标准的计算结果，但它似乎更精确地反映出那些免疫接种前其抗体水平极低的个体对于免疫接种所产生的宿主应答。相反，对于这些相同的个体而言，倍数的变化可能是非常高的，然而疫苗接种后抗体却不能达到血清保护性水平。绝对值的变化对于鉴定针对疫苗接种而产生的宿主应答则提供了一种替代方法，尤其是在免疫接种前抗体水平非常低的情况下。绝对值变化可能对于那些测定宿主基因型与针对疫苗接种所产生的应答之间的关联性的研究是非常有用的。

婴幼儿初免和加强免疫接种四价脑膜炎球菌蛋白结合疫苗后B淋巴细胞应答

四价脑膜炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗对婴幼儿有免疫效果。我们评估了婴幼儿初免和加强免疫该疫苗后的记忆性B 淋巴细胞应答和抗体应答水平。5个月龄的婴幼儿初免疫苗后,有25%的婴幼儿体内可以检测到血清特异性记忆性B 淋巴细胞,69%的婴幼儿体内可检测到针对A群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度( hSBA ≥4),超过95%的婴幼儿体内可以检测到针对其他群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度。12个月龄的婴幼儿在进行加强免疫前,针对 A 群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度( hSBA ≥4)检测值的比率为5%,针对其他群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度检测值的比率在44%~70%之间。而在进行加强免疫一个月后,超过50%的婴幼儿体内可以检测到记忆性B淋巴细胞,91%的婴幼儿体内可检测到针对A群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度( hSBA ≥4),超过99%的婴幼儿体内可以检测到针对其他群脑膜炎球菌的保护性抗体滴度。这些数据表明,两次初免之后抗原特异性抗荚膜记忆性B淋巴细胞数量不多。而针对C 群脑膜炎球菌荚膜多糖和CRM197蛋白等这些抗原的记忆性B淋巴细胞数量在5个月龄时多,且与12个月龄时的抗体持久性有明确但不明显的关系(P≤0.02)。尽管之前有研究表明婴幼儿在初免之后可以通过检测记忆性B 淋巴细胞数量来预测抗体持久性和记忆效应,但这可能在婴幼儿中不适用于所有抗原。

疫苗诱导的 Th17细胞是长期保护表型稳定的记忆亚群

Th17细胞在免疫介导的保护中，越来越多地被认为是重要的辅助性T细胞亚群，特别是对通过黏膜入侵的病原体。在许多情况下，这与通过接种疫苗诱导的Th17细胞记忆是高度相关的。据报道， Th17细胞具有较高的可塑性，其分化程序一旦被诱导将可能无法稳定地存在，这就对诱导出持久的Th17细胞记忆的可能性提出了质疑。因此， Th17细胞记忆是否可以建立还没有达成共识，除非有连续的Th17细胞极化条件的影响。之前我们已经报道阳离子脂质体可辅助CAF01激发Th1和Th17应答及其强烈反应，且有长期存在的Th1细胞记忆。在此我们证明，在小鼠中用含有CAF01的亚单位疫苗可建立真正的Th17记忆细胞。因此， Th17记忆细胞在表型和功能特性方面展现的谱系稳定性保持了近2年时间。抗原特异性的、长效的Th17细胞记忆细胞在其诱导和增殖近2年后，与Th1记忆细胞相比，发现其在由结核分枝杆菌气溶胶攻击后从肺引流淋巴结向肺转移。在感染期间，疫苗诱导的Th17细胞记忆细胞在肺部增殖并具有Th1细胞特性，这意味着它们有一个相对稳定的数量，同时在长时间暴露于Th1细胞极化的条件下表现可塑性，在炎症性疾病条件下，如在结核分枝杆菌感染的肺中可发现Th17记忆细胞。然而，在没有明显的炎症下，可以通过非肠道免疫而诱导出稳定的真正的Th17细胞记忆。

T细胞免疫与肿瘤关系研究进展

在抗肿瘤免疫中，肿瘤特异性 T 细胞应答，特别是CD8＋T 细胞（cytotoxic T cell，CTL）对肿瘤细胞的杀伤是至关重要的免疫保护机制，肿瘤特异性CD4＋T 细胞分泌的 IFN-γ（interferon-γ，IFN-γ）以及肿瘤抗原特异性 IgG （immunoglobulin G， IgG）抗体也具有重要的清除肿瘤的功能。常见的恶性肿瘤如宫颈癌、鼻咽癌等恶性肿瘤均存在免疫细胞数量和功能的改变，关于改善细胞免疫功能可能提高抗肿瘤效果的研究已成为热点。肿瘤的发生、发展与 T 细胞组成和数量的变化密切相关，T细胞功能与人类白细胞抗原、表皮生长因子、协同刺激分子、细胞因子等均存在联系。本文对 T细胞免疫与恶性肿瘤之间的关系简要综述如下。

诊断特发性血小板减少性紫癜应注意的问题

特发性血小板减少性紫癜是一种外周血血小板减少,骨髓巨核细胞数目正常或增多并伴有成熟障碍,皮肤、粘膜或其它部位有不同程度的出血性疾病,是一种免疫性血小板破坏过多造成的疾病,约占出血性疾病的30%.欧美新流行病学研究显示,该病年发病率为5/10万～10/10万人口.任何年龄均可发病,儿童和成年人各半,65岁以上老年人发病呈上升趋势,我国尚无特发性血小板减少性紫癜发病的流行病学资料.一般认为该病的发生是由于自身抗体介导的巨核细胞数量和质量异常,细胞毒T细胞直接溶解血小板和抗原特异性T细胞.免疫失耐受等发病机制的新见解.特发性血小板减少性紫癜诊治方面尽管临床排除性诊断和非特异性治疗的现状尚未改变,但诊断理念已有重大更新.应引起学者的重视,许多疾病也有血小板减少,应当注意同特发性血小板减少性紫癜相鉴别.