脑膜瘤组织中组织蛋白酶异常表达及其诊断价值研究

目的:探讨组织蛋白酶B(cathepsins B,Cat B)及其抑制因子在区别良、恶性脑膜瘤方面的价值.方法:以免疫组织化学分析法,检测76例脑膜瘤的肿瘤组织标本Cat B及其抑制剂Stefin A和Cystatin C的表达水平.结果:恶性脑膜瘤组及非典型性脑膜瘤组的Cat B免疫组织化学积分(4～6)率分别显著高于良性脑膜瘤组(χ2=6.24,P＜0.05;χ2=6.28,P＜0.05);脑膜瘤不同部位组织,发现邻近矢状窦脑膜瘤组与皮层凸面脑膜瘤组的Cat B免疫组织化学积分(4～6)率均分别显著高于颅底脑膜瘤组(χ2=4.43,P＜0.05;χ2=8.70,P＜0.01).结论:Cat B表达水平,在恶性脑膜瘤中显著高于良性脑膜瘤和非典型性脑膜瘤,有望成为区别良、恶性脑膜瘤的重要指标.

组织蛋白酶B及其抑制剂CYSTATIN C与大肠腺瘤及大肠腺癌关系的实验研究

大肠腺瘤是大肠癌的癌前病变,是大肠癌主要致病因素之一.作者自2003年10月至2004年4月研究组织蛋白酶B(cathepsin B)及其抑制剂cystatin C在大肠腺瘤及大肠腺癌中的表达情况,探讨大肠癌发生、发展的分子生物学机制.

组织蛋白酶 L 与自噬在退行性神经病变中作用

组织蛋白酶L （Cathepsin L ）是溶酶体木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶，其主要功能是降解和更新细胞内的蛋白。Cathepsin L在溶酶体降解蛋白的过程中发挥着重要作用，通过维持细胞内蛋白的动态平衡，从而参与机体的各项生理活动。自噬作为一种细胞生物学过程，自噬体（Autophagosome ）是通过粗面内质网中无核糖体附着区所脱落的双层膜结构，包裹细胞内需降解的细胞器和部分胞质、蛋白质等成分形成，其与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新，自噬功能当前倍受关注，是研究热点之一，自噬的完成依赖于正常的溶酶体功能。Cathepsin L活性增加对于自噬的进行是必须的。然而Cathepsin L与自噬如何共同在退行性神经病变中发挥作用并不十分明了。

血清胱抑素C与颈动脉内膜中层厚度的相关性研究

有研究表明，炎症参与了动脉粥样硬化的发生和发展，其发病机制主要涉及细胞外基质（ECM）降解和血管壁重构，炎症介质可刺激血管平滑肌细胞促使其分泌组织蛋白酶S、K和半胱氨酸蛋白酶等。半胱氨酸蛋白酶具有促弹性组织离解特性，它可在血管动脉弹力蛋白损伤处过度表达。血清胱抑素C（Cys C）在体内能较强抑制半胱氨酸蛋白酶，是目前发现的对组织蛋白酶B抑制作用强的抑制物。当血清Cys C浓度降低时，组织蛋白酶活性增强，可造成血管组织的病理损害。本研究旨在通过检测血清Cys C在不同颈动脉内膜中层厚度（IMT）患者中的表达水平，进一步了解其相关性。

阿托伐他汀对腹主动脉缩窄性高血压大鼠心肌组织蛋白酶S、K的影响

目的:观察压力高血压大鼠心肌组织蛋白酶S、K(Cat S、Cat K)的表达,并探讨阿托伐他汀对肥厚心肌的逆转作用和机制.方法:将雄性SD大鼠45只随机分配到假手术组、模型组和阿托伐他汀组,模型组及阿托伐他汀组通过不完全结扎大鼠腹主动脉的手术方法构建心肌肥厚模型,采用RT-PCR方法和免疫组化的方法分别检测心肌Cat S、Cat K mRNA及蛋白表达,用Masson染色法分析左心室肌质量.结果:模型组及阿托伐他汀组左室重量指数、心肌Cat S、Cat K mRNA及蛋白表达较假手术组均明显升高(P＜0.05),但阿托伐他汀组较模型组显著降低(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可有效地改善压力超负荷诱导的大鼠心肌肥厚,其机制可能系通过下调心肌Cat S、Cat K表达所产生.

姜黄素抗内皮细胞缺血/再灌注损伤的机制研究

目的 探讨姜黄素(curcumin,Cur)抗人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺血/再灌注(I/R)损伤的作用机制.方法 建立缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型,MTT法检测不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用及Cur对HUVEC的保护作用;预先给予Cur(5 μmol·L-1),用免疫荧光和Western blot法检测H/R对HUVEC微管相关蛋白LC3、溶酶体酶cathepsin B、L及促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响.结果 Cur(1.25～5 μmol·L-1)可剂量依赖性的保护H/R的HUVEC;H/R能增加LC3、cathepsin B、Bax/Bcl-2的表达,并且使cathepsin L发生核转位;而用Cur预处理后,在进一步增强LC3表达的同时,明显抑制cathepsin B和Bax/Bcl-2的表达及cathepsin L的核转位现象.结论 Cur能有效提高HUVEC在缺血/再灌注损伤中的存活率,并通过诱导其自噬活性、抑制cathepsins以及Bax/Bcl-2的表达保护内皮细胞.

hCG对绒癌细胞系组织蛋白酶表达的影响

滋养层细胞对子宫壁组织的侵入是有节制性的,其调节机制尚不清楚,人绒毛膜促性腺激素(hGG)是参与该调节的因子之一[1].

硫辛酸胺对损伤血管内膜增生的影响及机制

目的 研究硫辛酸胺(LAP)对大鼠颈总动脉球囊压迫损伤后内膜增生(IH)的影响及机制.方法 48只健康成年雄性SD大鼠随机分为4组(每组12只):假手术组、血管损伤组、LAP低剂量组(100 mg/kg)、LAP高剂量组(150 mg/kg).颈总动脉球囊压迫法构建活体大鼠颈动脉损伤模型,血管损伤后6h鼻饲LAP,连续3d,每天给药一次.测定损伤血管的氧化应激水平;Western blot、免疫荧光评估CathepsinB/D、Caspase-3的蛋白水平;TUNEL染色测定血管损伤区域内皮细胞(ECs)凋亡率;HE染色评估3周后血管IH及管腔狭窄程度情况.结果 血管内膜损伤72 h后,与假手术组比较,损伤血管的氧化应激水平,CathepsinB/D、Caspase-3的蛋白水平,ECs凋亡率明显上调(P ＜0.05,P＜0.01),LAP能显著抑制氧化应激水平、ECs凋亡率及上述蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);当血管内膜损伤3周后,HE染色结果显示损伤节段血管可见明显的IH,血管腔狭窄(P＜0.01),LAP可显著抑制IH,减轻血管腔的狭窄(P＜0.05).高、低剂量LAP抑制血管IH的能力无明显差异.结论 LAP抑制大鼠颈动脉球囊损伤后IH,其可能机制为LAP特异性抑制溶酶体内Cathepsins介导的凋亡通路,减少ECs的凋亡率,加速损伤区域内皮修复,从而抑制IH.

日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆

目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2(SjCL2)的编码区基因序列,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中,为进一步对其进行功能研究奠定基础.方法用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA,RT-PCR扩增目的基因,将扩增产物定向克隆到真核表达载体pcDNA3中.结果 RT-PCR特异性扩增出SjCL2编码区基因序列,其片段大小为1kb左右,经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA-SjCL2中含有所扩增的基因序列.结论 RT-PCR扩增的SjCL2编码区基因序列与预期长度相符合,成功构建了含SjCL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA-SjCL2.

半胱氨酸蛋白酶在寄生虫病的免疫诊断和治疗中的应用

半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease)是一类含有半胱氨酸残基的蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,存在于人类、寄生生物等多种动物体内.对人的半胱氨酸蛋白酶的研究主要集中在细胞凋亡分子机制与检测指标和恶性肿瘤的基因治疗与诊断两个方面.而对寄生虫半胱氨酸蛋白酶研究的内容则更为广泛.多种寄生虫都能产生或分泌半胱氨酸蛋白酶.半胱氨酸蛋白酶因其蛋白水解作用成为许多寄生虫的主要"消化酶",如血吸虫和疟原虫均利用宿主的血红蛋白作为他们的主要营养和氨基酸来源,血吸虫对宿主血红蛋白的降解依靠其半胱氨酸蛋白酶家族的组织蛋白酶B和L1[1],恶性疟原虫则利用其半胱氨酸蛋白酶falcipain对变性的血红蛋白进行裂解[2].半胱氨酸蛋白酶还参与了寄生虫对宿主的入侵过程,如恶性疟原虫能够裂解红细胞膜重要的结构蛋白--锚蛋白,为其入侵红细胞创造有利条件[3].

上尿路移行细胞癌Cath-D、β2-MG、CEA表达的意义

目的探讨组织蛋白酶D(Cath-D)、β2-微球蛋白(β2-MG)及癌胚抗原(CEA)的表达在上尿路移行细胞癌中的临床价值.方法采用免疫组织化学ABC法,对36例上尿路-肾盂、输尿管移行细胞癌患者手术切除的标本进行Cath-D、β2-MG、CEA检测.结果肿瘤实质细胞Cath-D阳性表达率为47.2%(17例),在分级间有显著性差异(P＜0.05).肿瘤间质细胞Cath-D阳性表达率为36.1%(13例),其术后肿瘤复发率(76.9%)明显高于间质细胞Cath-D阴性表达者(P＜0.05);其5年生存率也明显低于阴性表达者(P＜0.05).肿瘤细胞β2-MG阳性表达率为63.9%(23例),在分级间比较有非常显著性差异(P＜0.01),且阳性表达者5年生存率(78.3%)明显高于阴性表达者(P＜0.05).肿瘤细胞CEA阳性表达率为66.7%(24例),随着分级、分期的增高,CEA阳性表达率逐渐增加.结论肿瘤细胞CEA的表达与上尿路移行细胞癌的恶性程度有关.肿瘤细胞Cath-D、β2-MG表达可作为上尿路移行细胞癌的分化标志.肿瘤细胞β2-MG表达和肿瘤间质细胞Cath-D表达可能是判断上尿路移行细胞癌预后的重要临床参考指标.

组织蛋白酶D和胶原蛋白Ⅳ在膀胱癌中的表达及意义

目的:探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中蛋白酶D(Cath-D)和胶原蛋白Ⅳ(ColⅣ)的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测52例BTCC和9例正常膀胱组织中Cath-D和ColⅣ抗原.结果:Cath-D在正常膀胱移行细胞中的表达高于BTCC(P＜0.01),且与病理分级、临床分期呈负相关(P＜0.05),与肿瘤的多发和单发无关.ColⅣ在正常组织基底膜中的表达高于BTCC(P＜0.01),亦与肿瘤的分期、分级呈负相关(分别为P＜0.05和P＜0.01).在BTCC组织中Cath-D和ColⅣ的表达呈正相关性(P＜0.01).结论:Cath-D在BTCC的侵袭和转移过程中不起重要作用,Cath-D和ColⅣ的表达可作为BTCC的预后指标.

组织蛋白酶L与人腰椎间盘退变关系的研究

[目的]探讨Cathepsin L与人腰椎间盘退变的关系.[方法]实验组标本来源于腰间盘突出症的患者,在外科手术过程中取得的退变间盘组织,并根据术中所见将腰间盘突出分为非包含型组和包含型组;对照组间盘来源于胸腰段骨折行前路手术患者手术中切除的间盘组织,以上标本采用.HE染色组织学观察椎间盘的退变特征,免疫组织化学S-P法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测人腰椎间盘细胞Cathepsin L蛋白表达.[结果]HE染色组织学观察在退变组间盘中,各标本均表现出一定的退变特征:纤维环板层结构紊乱,软骨细胞巢状增生,纤维环粘液瘤样变,髓核软骨细胞减少,纤维细胞增生,玻璃样变及纤维化,髓核毛细血管的侵入,炎性细胞的浸润等.在未包含型组与包含型组比较显示了更多的髓核毛细血管侵入和炎性细胞浸润,髓核及纤维环退变更严重,纤维细胞增生及瘢痕形成.免疫组织化学染色显示组织蛋白酶L阳性率在退变组(90.68±7.61)%明显高于对照组(10.00±8.69)%,并且在非包含型组(95.45±4.63)%明显高于包含型组(86.93±7.49)%.RT-PCR结果显示组织蛋白酶L的mRNA表达水平在退变组(1.445±0.206)%较对照组(0.526±0.378)%明显上调,并且在非包含型组(1.608±0.044)%明显高于包含型组(1.282±0.166)%.以上结果均经统计分析证实组间差异有统计学意义.[结论]Cathepsin L与人腰椎间盘退变有关.

组织蛋白酶D和基质金属蛋白酶-13在脊索瘤中的表达及其与脊索瘤复发的关系

目的 探讨组织蛋白酶D(Cath-D)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在脊索瘤组织中的表达与脊索瘤高复发的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测45例脊索瘤标本,其中复发瘤组织25例,非复发瘤组织20例.结果 Cath-D和MMP-13在脊索瘤中呈较高阳性率表达(88.9%,84.4%).复发组阳性率更高(96%,88%),显著高于非复发组(P＜0.05),在浸润边缘呈强阳性表达.结论 Cath-D和MMP-13参与了脊索瘤的浸润,是脊索瘤高复发率的原因之一.

006组织蛋白酶B和L与早期胃癌侵袭深度和转移途径相关

宫颈癌演变和发展的相关因子研究进展

宫颈癌是妇女常见的恶性肿瘤之一,病死率居发展中国家女性肿瘤首位.已确认高危型人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)是官颈癌形成重要的危险因子,在99.7%的浸润性宫颈癌中可以检测到它的存在[1].HPV属小DNA、嗜上皮细胞性病毒,现已确认有超过200种HPV,其中大约有30种专门感染黏膜组织,根据它们所引起病损的临床预后,将这30余种HPV分为高危型和低危型.宫颈癌的形成是一个由低度鳞状上皮内病变到高度鳞状上皮内病变后发展到浸润癌的连续复杂过程.近年又发现多种生物活性物质参与这一演变发展过程.

高血压可根据肾素水平用药

高血压的发生与神经、内分泌、心血管、肾脏等组织器官有关,但确切机理未明.研究发现,肾素-血管紧张素-醛固酮系统对高血压的发生、发展有重要作用,其中源自肾脏球囊细胞、胃促胰酶、组织蛋白酶等组织的血管紧张素转换酶Ⅱ是重要的活性成分,其主要作用是通过与受体结合使血管收缩、醛固酮分泌增加、水钠潴留和增强交感神经活性,终升高血压.

基质金属蛋白酶-8,11,19和组织蛋白酶B在异常胎盘绒毛组织中的表达

目的:探讨基质金属蛋白酶-8,11,19和组织蛋白酶在胎盘绒毛组织中的表达差异与葡萄胎、子痫前期等和滋养层细胞密切相关的妊娠疾病病理机制的关系.方法:采用RT-PCR检测方法,比较葡萄胎组织、早孕绒毛、子痫前期足月胎盘和自然分娩及剖宫产的正常足月胎盘组织中基质金属蛋白酶8,11,19和组织蛋白酶B等蛋白酶的表达差异.结果:5种胎盘绒毛组织中,仅旱孕绒毛明显表达基质金属蛋白酶-8(P<0.05),而基质金属蛋白酶-11的表达在足月胎盘组织中较为明显(P<0.05),且子痫前期胎盘组织中基质金属蛋白酶-11的表达较正常胎盘组织弱(P<0.05).葡萄胎组织中基质金属蛋白酶19的表达弱于正常旱孕绒毛组织(P<0.05).而其在子痫前期胎盘组织中的表达强于正常自然分娩的胎盘组织(P<0.05).5种绒毛组织中组织蛋白酶B的表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:基质金属蛋白酶-8,11,19等基质金属蛋白酶在胎盘绒毛组织中的表达变化,可能和葡萄胎、子痫前期等与滋养层密切相关的妊娠疾病的病理发生有关.

组织蛋白酶抑制剂胱抑素C的表达和炎性反应在腹主动脉瘤发病中的意义

目的 探讨组织蛋白酶抑制剂胱抑素C(Cystatin C)和炎性反应在腹主动脉瘤(AAA)发病中的意义.方法 收集31例AAA患者(AAA组)和32例非AAA患者(对照组)的血浆和AAA组的病变样本,免疫组织化学法检测AAA组病变组织中Cystatin C的表达和巨噬细胞表面抗原2(Mac-2)的含量；酶联免疫吸附法测定AAA组和对照组血浆的Cystatin C水平,常规生物化学法检测血脂、血糖水平,采用免疫散射比浊法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平.结果 对照组血管动脉壁高表达Cystatin C,而AAA组血管动脉壁的Cystatin C表达显著降低(P＜0.01),同时Mac-2表达较对照组显著增加(P＜0.01)；AAA组患者血浆Cystatin C水平为(32.55±17.31) μg· L-1,显著低于对照组的(78.13 ±43.13)μg·L-1,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且与AAA直径呈显著负相关(r=-0.560,P＜0.01)；AAA组患者hs-CRP水平较对照组显著升高,与AAA直径大小呈显著正相关(r=0.762,P＜0.01)；血浆Cystatin C与hs-CRP水平显著负相关(r=-0.530,P＜0.01)；多元线性逐步回归分析结果显示,在校正了与AAA直径大小的相关因素后,Cystatin C和hs-CRP水平与AAA直径大小独立相关(P ＜0.05,0.01).结论 血浆Cystatin C联合hs-CRP水平检测结果可作为判断AAA炎性反应的参考指标.

乌司他丁对大鼠肝脏低温保存作用的实验研究

乌司他丁(Ulinastatin),即尿胰蛋白酶抑制剂(UTI),可抑制多种蛋白酶类如胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、磷脂酶A2等,对糖及脂水解酶亦有抑制作用,还可稳定细胞膜及细胞亚膜、清除氧自由基、抑制炎性介质释放[1].我们利用鼠肝低温保存模型,在保存液中应用乌司他丁,观察其对鼠肝的保护作用、适合浓度及作用机制.