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重组人肝刺激因子的促增殖和抗损伤作用
目的探讨重组人肝刺激因子(hHSS)的生物学特性并观察其抗损伤能力.方法以MTT法、细胞计数、细胞周期分析和MAPK活性观察hHSS促细胞增殖作用.以H2O2损伤细胞,观察hHSS保护细胞的作用.结果重组hHSS能刺激BEL-7402肝癌细胞增殖,促进增殖信号分子MAPK的磷酸化.hHSS可增强细胞对抗H2O2损伤的能力,促进受损细胞DNA合成.结论HSS为一种新的生物活性蛋白,参与细胞增殖调节.
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重组肝刺激因子对肝脏卵圆细胞增殖的作用
目的观察重组人肝刺激因子(hHSS)对肝脏卵圆细胞增殖的影响.方法分离大鼠肝卵圆细胞,加以培养,并进行细胞学鉴定.将重组的hHSS作用于肝脏卵圆细胞,以MTT法、流式细胞术观察其对卵圆细胞的增殖作用.结果实验分离的卵圆细胞同时表达肝细胞和胆管细胞特异性标志物.给予重组hHSS作用12~24 h后,细胞增殖速度减缓,细胞DNA合成减弱,其作用的有效浓度为240 mg/L.结论重组hHSS能抑制卵圆细胞的增殖.
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流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理是什么?
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丁酸钠联合穿琥宁对人大肠癌细胞HCT-8增生的影响
目的:探讨丁酸钠、穿琥宁体外联合应用对结肠癌细胞的影响.方法:应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、电镜研究丁酸钠、穿琥宁对HCT-8的增生抑制及诱导凋亡作用.结果:丁酸钠对HCT-8细胞有明显抑制作用,48 h后各组抑制率分别为15.7%,20.3%,33.3%(P<0.01),呈现浓度、时间依赖性.电镜下观察可见成熟分化改变及凋亡细胞,流式细胞仪可检测到亚G1峰,细胞周期分析发现其主要阻滞在G1期.穿琥宁与其联合应用,混合组1在24 h,48h凋亡率为23.5%,48.6%,混合组2在2 4h,48 h凋亡率为30.8%,54.2%(P<0.01).结论:丁酸钠抑制HCT-8细胞增生,并诱导其成熟分化、凋亡.穿琥宁与其合用使凋亡率增加.
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环氧合酶-2反义核酸对人胆管癌细胞增生的影响
目的:用反义环氧合酶-2(COX-2)重组载体转染COX-2高表达人胆管癌细胞QBC939,观察其对QBC939细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制.方法:通过脂质体介导将COX-2反义核酸质粒转入QBC939细胞,经G418筛选获得稳定表达COX-2反义核酸的胆管癌转染细胞模型.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测转染前后QBC939细胞COX-2 mRNA表达的变化,应用免疫细胞化学链霉亲合素-生物素复合物(SABC)技术检测转染前后QBC939细胞COX-2蛋白表达水平的变化,应用四唑氮蓝(MTT)比色法检测COX-2反义核酸对QBC939细胞增生的影响,应用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.结果:反义COX-2基因转染后胆管癌细胞中COX-2 mRNA表达水平明显下调,COX-2蛋白表达减弱.转染反义COX-2重组载体的QBC939细胞生长速率明显下降(P<0.01),细胞周期分析转染后细胞比转染前细胞增生指数显著下降(P<0.01),S期细胞比例为9.27±1.91%,比转染前(16.35±2.87%)明显降低(P<0.05),G0/G1期细胞比例为75.16±4.13%,比转染前(57.31±10.16%)明显上升(P<0.05),细胞被抑制在G0/G1期;COX-2反义核酸转染对QBC939细胞凋亡率无明显影响(P>0.05).结论:COX-2反义核酸导入可抑制QBC939细胞增生.
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胆囊收缩素受体在胰腺癌细胞中的表达及胆囊收缩素对胰腺癌细胞周期的影响
目的:观察胆囊收缩素受体(CCKR)在人胰腺癌细胞株SW1990中的表达及胆囊收缩素(CCK)-8肽对胰腺癌细胞周期的影响.方法:应用RT-PCR方法检测人胰腺癌细胞株SW1990中胆囊收缩素受体(CCKR)mRNA的表达,细胞化学法检测SW1990细胞中胆囊收缩素受体(CCKR)蛋白水平的表达,流式细胞仪检测不同浓度的CCK-8肽对SW199细胞周期的影响.结果:在人胰腺癌细胞株SW1990中不表达CCK-A亚型受体,但表达CCK-B亚型受体;CCKR在癌细胞株SW1990中的表达主要位于细胞膜上,细胞浆内也可见.在10-8g/L-10-5g/L浓度范围内,CCK-8肽促进SW1990细胞的增殖,呈剂量依赖性,细胞周期分析发现S期细胞增加,G2/M期细胞减少.结论:CCKB受体在人胰腺癌细胞株SW1990中表达,CCK-8肽能促进SW1990细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,CCK通过CCKR在胰腺癌细胞的增殖中发挥重要作用.
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口袋蛋白家族在胰岛发育及稳态调控中的研究进展
糖尿病是危害社会发展的重大健康问题之一。虽然病因复杂,但胰岛在血糖稳态调节中的核心作用毋庸置疑。恢复胰岛β细胞的功能和数量一直是临床治疗糖尿病的关键。细胞周期分析显示,胰岛β细胞增殖十分缓慢,绝大多数(97%~99%)处于G0/1期[1-3]。阻止β细胞通过G1/S期周期转换的分子机制尚不清楚。视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)是调控G1/S期细胞周期转换的重要分子,与视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)具有相似的口袋状DNA结合区域,共同属于口袋蛋白家族[3-5]。有关口袋蛋白家族的研究主要集中在肿瘤领域。近年研究显示,2型糖尿病患者胰岛Rb基因表达显著降低[6],其在胰岛细胞扩增中的作用正日益受到重视。本文就口袋蛋白家族在胰岛发育及稳态调控中的研究进展作一综述。
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氯化镧对HL-60及K562细胞增殖和凋亡的影响
许多医疗单位已经应用放射性稀土元素对肿瘤进行诊断和治疗.但关于非放射性稀土元素抗肿瘤效果报道较少.Ji等[1]发现稀土元素氯化物处理后的人胃癌细胞株PAMC82在琼脂糖培养基中培养时集落形成能力下降,Northern blot分析显示,PAMC82细胞经氯化镧及氯化铈作用后P53、P16(MTS1)及P21(WAF1)基因表达升高.此研究表明轻稀土元素具有抑制癌细胞增殖的效果,这可能与癌细胞中钙调素下降及某些基因表达升高相关.Sato等[2]发现1mmol/L镧系(La3+、Ce3+、Nd3+、Sm3+、Gd3+、Yb3+)及Al3+离子作用后黑色素瘤细胞的生长率明显低于对照组;细胞周期分析显示三价金属离子阻止细胞从G0/G1期过渡到S期.为了观察镧对白血病细胞的影响,我们研究了LaCl3对HL-60及K562细胞的生长和凋亡的影响.
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造血干细胞衰老模型的建立及其评价
造血干细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径,目前可通过体内和体外两种途径实现.体内衰老模型可通过供体造血干细胞在受体内连续性移植建立,体外衰老模型可通过白消安、三丁基过氧化氢等致衰老药物和电离辐射等方法建立.造血干细胞衰老模型建立后,可通过其自我更新和多向分化能力检测、细胞周期分析、β-半乳糖苷酶染色等方法检测和评价造血干细胞的衰老变化,并应用Southern bloting,Western bloting,RT-PCR等方法检测造血干细胞衰老相关基因和蛋白变化.本文就造血干细胞衰老模型的建立以及评价方法综述如下.
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青龙衣粉针剂对人肝癌细胞株的作用
目的:观察青龙衣粉针对人肝癌细胞SMMC-7721的作用.方法:MTT法、生长抑制实验、集落形成实验、细胞周期分析.结果:青龙衣粉针剂对SMMC-7721细胞具较强毒性作用,IG50为1.1μg/ml;青龙衣粉针剂可显著抑制细胞生长,剂量与时间效应关系明显,流式细胞仪细胞周期分析表明,经青龙衣粉针剂处理后的SMMC-7721细胞24h、48h、72h细胞周期各时相所占百分比S期由20.91降为16.00,G0/G1由66.21增至67.62,说明青龙衣粉针剂有干扰细胞周期,抑制肿瘤细胞DNA合成的作用.结论:青龙衣粉针剂对人肝癌细胞有一定的毒性作用,阻断细胞增殖周期,抑制人肝癌细胞增殖.
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小儿血管瘤血管内皮细胞的定量测定及其与血管瘤增殖凋亡的关系
血管瘤是小儿常见的良性肿瘤,其发生率达3%,血管瘤有自行消退现象,总的消退率达90%.血管瘤自行消退的机制尚不明确,目前对血管内皮细胞的专门研究较少.我们通过标记CD31、CD34(血管内皮细胞的标记抗原)运用流式细胞术对血管内皮细胞的定量测定及血管瘤细胞进行细胞周期分析、凋亡观察,以探讨血管瘤增生消退的可能机制与血管内皮细胞的关系.
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流式细胞术在恶性淋巴瘤中的应用
流式细胞术是本世纪70年代发展起来的一种对细胞理化、生物学性质进行快速测量并可分类收集的技术,已被广泛应用于医学研究,特别是在肿瘤学的研究中显示了极大的优越性.80年代以来,国外陆续有学者用流式细胞术对石蜡包埋组织进行DNA含量分析,更扩大了其使用范围.本文主要是对其在恶性淋巴瘤DNA分析(倍体及细胞周期分析)、免疫表型、治疗等方面的应用作一综述.
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流式细胞术细胞周期分析小鼠肺组织样本制备方法的优化研究
目的 寻找细胞周期分析更好的样本处理方法.方法 以小鼠肺组织作为标本,采用四种方法(剪碎法、研磨法、剪碎结合酶消化法、研磨结合酶消化法)制备单细胞悬液,胎盘蓝染色检测细胞的存活率,经不同时间固定后的样本利用流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 剪碎法结合酶消化法制备的单细胞悬液效果佳;单细胞固定后两周内细胞各个时期所占比例基本相同.结论 小鼠肺组织单细胞制备采用剪碎法联合酶消化法优于其他三种方法,样本经固定处理后可以进行流式批量检测.
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pcDNA3-hbFGF转染角朊细胞对真皮成纤维细胞增殖的生物学效应
目的:观察含外源性人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因的角朊细胞(human keratinocyte,HK),对真皮成纤维细胞(human dermal fibroblast, HDFib)增殖的影响;探讨转hbFGF基因HK对创面愈合的生物学效应及作用机理,为这种转基因HK细胞用于创面基因治疗的可行性提供实验依据.方法:收集含真核表达质粒pcDNA3-hbFGF的HK细胞培养上清,加入培养的HDFib细胞内;MTT法测定细胞的增殖率、3H-TdR掺入法测定细胞DNA合成率、流式细胞仪分析细胞增殖周期.结果:加入转基因HK细胞培养上清的HDFib细胞,培养72h后,较正常对照组、加正常HK培养上清组、加转染空载体pcDNA3-neo的HK培养上清组,其细胞增殖分别增加1.0,1.5,3.0倍(P<0.01);细胞DNA合成率分别提高1.6,2.3,3.4倍(P<0.01);HDFib细胞周期分析显示加入转基因HK细胞培养上清24h时细胞处于S期的比例较其余对照组增加明显,至72h时无差别.结论:转染hbFGF基因真核表达质粒的HK细胞可以分泌活性物质促进HDFib细胞DNA合成及增殖;机理为刺激HDFib进入细胞分裂S期,其效应呈现时间依赖性.
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大肠息肉61例DNA细胞周期分析
为探讨大肠息肉的增生状况,对61例大肠息肉活检标本应用流式细胞仪做DNA细胞周期分析.结果49例病理诊断为炎性息肉的DNA细胞周期分析均为正常2倍体,S期细胞比值6.2%~12.3%,平均9.4%士5.4%,12例腺瘤样息肉中4例为异倍体,8例正常2倍体,但S期细胞比值为13.3%~18.6%,平均16.1%土6.7%,显著高于炎性息肉组(P<0.01),其中5例S期细胞比值>15%,表明腺瘤样息肉大部分可认为是癌前病变.
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肛管乳头状纤维瘤30例细胞周期分析
为探讨肛管乳头状纤维瘤的增生情况,应用流式细胞术对30例肛管乳头状纤维瘤组织及痔组织(对照)进行细胞周期分析,结果30例肛管乳头状纤维瘤未发现异倍体,S期细胞占13.9%±5.4%,显著高于对照组,提示肛管乳头状纤维瘤无恶变倾向,是一种良性反应性增生病变.