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抗体芯片技术的应用探讨
抗体芯片(antibody microarray,抗体微阵列),是蛋白质芯片的一种,是检测生物样品中蛋白表达模式的新方法 .这种新技术可以在一次实验中比较生物样品中成百上千的蛋白质的相对丰度,将极大促进蛋白质组目前的研究状况.
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铁皮石斛2个F家族ABC转运蛋白基因的克隆和表达研究
目的 克隆铁皮石斛Dendrobium officinale ABC (ATP-binding cassette)转运蛋白F家族基因并进行生物信息学分析.方法 利用RACE从铁皮石斛叶片cDNA中分离ABC基因,并进行编码蛋白相对分子质量、等电点、结构域、信号肽、跨膜域及亚细胞定位等生物信息学分析;采用DNASTAR和MEGA6进行氨基酸多序列比对和分子进化分析;借助实时荧光定量PCR技术检测基因组织表达模式.结果 从铁皮石斛中分离到2个F家族ABC转运蛋白基因DoABCF1和DoABCF2(GenBank注册号KU160474和KU160475),全长为2 104 bp和2 193 bp,各编码1条由600和659个氨基酸组成的肽链,相对分子质量67 030和74 140,等电点6.20和5.71;DoAB CF1和DoABCF2蛋白均包含2个保守的ABC结构域(分别为74~314、385~600和65~323、392~607)和多个基元;2个蛋白不含信号肽或跨膜域,预测均定位在叶绿体.2个基因与植物F家族ABC转运蛋白基因相似性高达80%以上,与玉米和水稻等单子叶植物F家族ABC转运蛋白基因亲缘关系较近.DoABCF1和DoABCF2基因转录本在石斛3个器官中差异表达且均在叶中高度表达,茎和根中相对表达量差异不显著;以茎为校正样本,前者在根中相对表达量为茎中的1.74倍,后者在叶中表达量为茎中的3.44倍.结论 成功获得DoABCF1和DoABCF2基因全长cDNA,二者在铁皮石斛叶中的高表达特征暗示其可能在铁皮石斛生长发育过程中起一定作用.
关键词: 铁皮石斛 ATP-binding cassette 转运蛋白 克隆 表达模式 -
功能蛋白质组学研究
1990年国际上开始实施人类基因组计划,2001年2月,完成人类基因组图谱,标志着后基因组时代已经到来.新时代的终目的,是阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达模式和生命功能.目前,我们更为注重那些可能涉及到特定功能机理的蛋白质群体,即功能蛋白质组的研究,主要的研究手段为双向凝胶电泳、Edman降解法测N端序列、质谱技术.功能蛋白质组学的提出,可从动态整体的角度对那些重大疾病的机理进行研究.
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转化生长因子-β在骨质疏松骨折愈合过程中表达的实验研究
骨质疏松(osteoporosis,OP)是一种以骨组织显微结构破坏/骨矿成分和骨基质等比例不断减少,骨质变薄,骨小梁数量减少,导致骨骼脆性增加和易发生骨折的全身代谢障碍性疾病,是老年人的常见病与多发病,尤以绝经期妇女为重.骨质疏松骨折的愈合由于其骨质疏松的特殊性,与正常骨折的愈合又有区别.转化生子因子(TGF)-β是TGF超家族的一部分,现有TGF-β 1~5 5个成员.TGF-β在正常骨折愈合过程中有重要意义,调节细胞的增殖、分化,但在骨质疏松骨折愈合过程中的表达变化研究甚少.本实验通过光镜观察、免疫组织化学,对不同时期骨质疏松性骨折骨痂局部TGF-β基因表达的细胞定位和表达模式进行了研究,这有助于从基因表达水平深入了解骨质疏松骨折愈合的病理生理机制.
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558例乙肝标志物感染者的HBV DNA PCR检测结果分析
对HBV感染者通常以其血液中HBV五项标志物的表达模式,做为其是否有传染性或免疫性的判断依据,将HBsAg阳性者判为有传染性,HBsAg和HBeAg同时阳性者为强传染性,抗HBs阳性者为具有免疫力,由于PCR技术的应用,使对HBV的检测有了更为敏感更为特异的手段,以HBsAg及HBeAg是否阳性做为判断被检者血液是否有传染性的做法是否有局限性呢?我们就558例HBsAg、HBeAg及抗-HBs阳性的被检查血清做HBV、DNA及PCR检测,并进行分组比较,现报告如下:
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家蝇伴侣蛋白CCT η基因序列分析与表达模式
目的 对家蝇伴侣蛋白CCT η(MD-CCT η)基因进行序列分析,克隆其cDNA序列并检测家蝇CCTη基因的表达情况.方法 采用表达序列标签(EST)测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA文库中筛选MD-CCTη基因,对其进行序列测定和分析;提取家蝇3日龄幼虫RNA,逆转录cDNA为模板,PCR扩增,并与pMD-19T载体连接,转化大肠杆菌DH5α中;采用实时荧光PCR技术分析MD-CCT η基因在家蝇不同生长发育阶段及3日龄幼虫组织中表达模式.结果 MD-CCT η基因开放阅读框(ORF)全长1 632 bp,编码543个氨基酸,理论分子量59.3kDa,等电点6.27;该基因推导的氨基酸序列与其他昆虫同源序列比较有较高的相似性(93%),聚类分析结果显示,家蝇与地中海实蝇和果蝇的亲缘关系近(100%);MD-CCT η在发育阶段以卵期表达量高,其次为1日龄幼虫,雄性成虫表达量低;MD-CCTη基因在家蝇3日龄幼虫组织中气管表达量高,其次为唾液腺,在体壁中表达量低.结论 成功克隆出MD-CCTη基因的cDNA序列,MD-CCTη在家蝇不同发育阶段及组织中表达模式存在明显差异.
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突触体素与中枢神经系统突触发育
突触体素(synaptophysin, SYN)是一种分布很广的突触小泡膜蛋白,它在中枢神经系统的发育进程反映了一种时间与空间上的特殊表达模式.作为突触的标记物和突触密度的检测物,SYN对突触发育的研究具有实用价值.SYN与轴突及某些神经递质系统的发育关系密切,至于胆碱能纤维的发育与SYN表达的关系,有待深入研究.
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脂肪源性干细胞成骨分化过程中成骨相关miRNA的表达模式
背景:miRNA在细胞分化等众多生理病理过程中起重要调控作用,可调节脂肪来源干细胞成骨分化.目的:筛选成骨分化相关miRNA,分析miRNA在脂肪来源干细胞成骨分化过程中的表达模式.方法:从皮下脂肪组织中分离、培养人脂肪来源干细胞.应用基因芯片技术筛选脂肪来源干细胞成骨诱导前后表达差异显著的miRNA,采用RT-PCR技术检测所筛选的miRNA在成骨诱导第7,14,21天上调/下调的相对表达强度,以ELISA试剂盒检测相应时间点成骨相关蛋白的表达情况.结果与结论:①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的脂肪来源干细胞,一定诱导条件下具有成骨、成脂、成软骨分化能力.②基因芯片技术筛选出成骨分化前后表达差异变化明显的9个miRNA,其中5个上调,4个下调.③成骨诱导第7天,miR-106a表达上调1.58倍(P<0.05).第14天时,9个miRNA均表达上调.第21天时,5个miRNA表达上调,4个表达下调.④成骨相关蛋白骨钙素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨唾液酸蛋白的质量浓度在诱导成骨分化第7天即明显升高,第14天达到峰值,第21天略有下降.
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鸡胚发育过程N-Cadherin和Neurofilament在脊髓中共表达模式的研究
目的:阐明鸡胚发育过程中神经钙粘蛋白(N-Cadherin)和神经丝蛋白(Neurofilament,NF)在脊髓中表达模式.方法:从鸡胚发育第3天(E3)开始到孵化出壳(P0),分别取材、固定、包埋和冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法检测N-Cadherin和NF蛋白表达时间和位置的变化.结果:在鸡胚发育过程,从E3开始,N-Cadherin在脊髓中便呈现阳性表达,E6-E8时达到高峰,E10开始降低,到出生P0在脊髓灰质中仍然呈阳性,而NF蛋白的表达与N-Cadherin具有相似之处,同样呈现时空性变化,但也存在表达区域差异.结论:N-Cadherin和NF在鸡胚脊髓发育过程的表达呈现时空性变化,在胚胎发育中期出现表达的高峰,随之减弱,直到出生仍然呈一定强度的表达.
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鸡胚发育过程N-Cadherin和Neurofilament在视顶盖中的表达模式研究
目的:阐明鸡胚发育过程中神经钙黏蛋白(N-Cadherin)和神经丝蛋白(Neurofilament,NF)在视顶盖中的表达模式.方法:从鸡胚发育第6天(E6)开始到孵化的E20,分别取材、固定、包埋和冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法检测N-Cadherin和NF蛋白在视顶盖各层的表达.结果:在鸡胚发育过程中,从E6开始,N-Cadherin和NF便呈强阳性表达,并且表现出明显各层分布的差异,E10-E14时,在NF强表达的区域与N-Cadherin重叠,E14之后NF的表达减弱,N-Cadherin无明显变化.结论:N-Cadherin和NF在鸡胚发育过程视顶盖的表达呈明显的层的分布,二者的表达既存在差异又有重叠.
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人β-防御素的研究进展
β-防御素是一类富含精氨酸,而且具有特殊结构的小分子阳离子多肽,是过去几十年里寻找新型抗生素的重要发现之一.对人类基因组序列的分析表明,人染色编码体的基因含有多达一百多种的β-防御素,它们是连接固有免疫和适应性免疫的重要因子.β-防御素不但对多种细菌、真菌、病毒等具有直接的杀伤作用,而且还与肿瘤发生、组织修复以及生殖成熟等生理过程密切相关.
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载脂蛋白B研究进展
载脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)在脂类代谢、胆固醇的运输中起关键性的作用,其在心血管疾病、家族性β脂蛋白血症、肥胖和胆囊疾病的研究中尤为重要.本文对ApoB独特的基因结构、表达模式及其多态性与疾病关系的研究进展进行了综述.
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对方证表述模式的探讨
探讨方证与莫塔“诊断提示”之间的联系,以说明方证的另一表达模式.并以桂枝汤、茵陈蒿汤、吴茱萸汤等方证的条文分析来加以论述.
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三种经典钙黏蛋白分子在鸡胚脊髓发育过程中的表达模式?
目的::揭示神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。方法:取鸡胚正常发育过程 E3、E4、E5、E6、E8和 E10各时期的脊髓,原位杂交法检测神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。结果:在 E3~E6时期,神经钙黏蛋白主要在神经上皮层、生皮节、脊索、顶板、底板以及背根神经节区域表达,E8~E10时期,其 mRNA 信号主要在灰质区和背根神经节;在 E3~E5时期,钙黏蛋白6主要在生皮节、顶板和底板表达,之后在顶板和底板的表达均减弱,主要在侧运动柱表达;E3~E6时期,钙黏蛋白7主要在生皮节、底板、基板背部、运动柱、背根和腹根强烈表达,E8之后其表达主要集中在灰质区和腹根。结论:神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7不同的表达模式预示着它们在脊髓及其周围组织发育过程中扮演不同角色。
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乙型肝炎标志物不同表达模式与慢性乙型肝炎的关系
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耳聋致病基因定位克隆的方法与策略
近10年来,聋病相关基因定位克隆取得迅猛发展.耳聋作为一种单基因遗传病,基于聋病大家系应用位置候选基因策略是首选的定位克隆方法.连锁分析是定位单基因疾病的一种遗传统计学方法,其依据是重组和交换原理.在定位区域内,根据基因的表达模式或编码蛋白的功能,选择候选基因进行突变筛查,探寻导致耳聋的分子病理机制.
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Miox基因在爪蟾胚胎发育中的时间和空间表达谱分析
目的 研究肌醇加氧酶(myo-inositol oxygenase,Miox)基因在物种进化及爪蟾胚胎发育过程中的时间和空间表达的分布特点.方法 利用半定量RT-PCR观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的时间表达模式,利用整体原位杂交方法观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的空间表达模式.结果 RT-PCR结果显示Miox基因在胚胎发育第26期以前都没有表达,至胚胎发育第28期开始有微量表达,随着胚胎的发育其表达量逐渐增高;胚胎发育第40期表达明显升高,第41期时达到高,第45期时表达有所下降.与胚胎发育第28、34期相比,第40、41、45期表达上调(P<0.05);与胚胎发育第40期相比,第41期表达上调(P<0.05);然而,同胚胎发育第41期相比,第45期表达下调(P<0.05).整体原位杂交方法发现在胚胎发育30期以前均没能检测到Miox在爪蟾任何器官中的表达,从33期开始,Miox在爪蟾前肾有很微弱的表达,且Miox的表达随着发育的进展逐渐升高.整体原位杂交方法结果同RT-PCR结果相类似,直至第39~40期,Miox的表达才明显升高,并且在随后的时期都以同样高的水平表达.另外,Miox基因在爪蟾胚胎发育过程中均仅仅在原肾小管表达.结论 Miox是一个肾脏特异性基因,对于研究肾脏发育可能提供一个特异性标记.
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过敏原免疫治疗对慢性荨麻疹患者单一核细胞IL-2、4受体表达的影响
过敏原免疫治疗(AIT,亦即特异性免疫治疗或脱敏疗法)是指通过接种特异性的过敏原,使患者对过敏原产生耐受性,从而达到控制或减轻过敏症状的一种治疗方法.过敏性疾病的发病机制很复杂,研究表明Th1/Th2细胞失衡是一个重要的机制,呈现Th2表达模式,Th2细胞因子,如IL-4,5,6,10等的表达占优势.慢性荨麻疹(CU)的人群患病率约0.1%~3%[1-2].本研究通过AIT治疗CU患者前后IL-2、4受体的变化,从受体水平来探讨AIT对CU患者免疫功能的影响.
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抗菌肽LL-37、HBD-2和HBD-3在皮肤结核皮损中的表达
目的 研究抗菌肽LL-37、人β防御素-2(HBD-2)、HBD-3在寻常狼疮和疣状皮肤结核皮损中的表达,探讨皮肤结核的发病机制.方法 免疫组化方法检测LL-37、HBD-2、HBD-3在18例寻常狼疮和疣状皮肤结核患者皮损、15例银屑病患者皮损以及10例健康人皮肤石蜡切片中的表达.SPSS13.0统计软件进行数据分析,组间行t检验.结果 LL-37、HBD-2在皮肤结核皮损中主要表达于表皮中上层、附属器及血管壁,与正常皮肤比较为高表达(t=2.632,2.399,P值均<0.05),且与银屑病的表达模式类似.HBD-3在皮肤结核皮损中未见表达,而在银屑病皮损及正常皮肤中均可见表达.结论 抗菌肽LL-37和HBD-2可能参与皮肤结核的免疫反应过程,而HBD-3在皮肤结核的表达缺失可能与其发病密切相关.
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SSTR亚型调变与188Re-SSA抑瘤效应相关性研究
研究小细胞肺癌的治疗学基础,探索其生长抑素受体(简称SSTR)介导的放射性核素标记的特异配体靶向治疗方案具有重要意义,下面叙述有关研究现状.1.肿瘤生长抑素受体亚型表达的研究现状.20世纪80年代前后各国学者对促生长素抑制素(简称生长抑素,SST)的多种生理、药理作用进行了深入研究,并着重研究了SST及其类似物(简称SSA)的抑瘤效应,而SST或SSA作用的实现均是通过靶细胞膜上高特异性的SSTR介导的.1992~1995年间SSTR的5种亚型(简称SSTR1~5)先后克隆成功,组成结构和功能各异的SSTR家族(SSTRs)[1].近年研究表明胺前体摄取与脱羧瘤(简称APUD瘤)及其转移灶均有SSTRs的表达,其表达密度显著超过肿瘤周围的SST靶组织,故采用SSTR1~5亚型作探针的原位杂交法可检测各类肿瘤SSTR1~5的表达模式.初步研究表明人体各类各型肿瘤表达SSTR亚型的模式各不相同[2],多数APUD瘤以表达SSTR2和(或)SSTR1为主,具有APUD瘤某些特征的小细胞肺癌(简称SCLC)也以SSTR2的表达占优势[3].文献报道SSA的抑瘤效应主要由SSTR2介导[3].近年发现人胰腺癌失去表达SSTR2的能力,若通过基因转移将SSTR2再导入该癌细胞内,即可在实验模型上获得