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甲状腺细胞中白细胞介素-6、γ-干扰素和肿瘤坏死因子-α基因的表达
目的研究白细胞介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因在甲状腺上皮细胞(TEc)中的转录.方法采用原代甲状腺细胞培养技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)定性分析方法.结果正常、Graves病(GD)和多结节性甲状腺肿(MNG)的TEc均表达IL-6mRNA,但TNF-αmRNA仅在GDTEc中表达,而正常和病理甲状腺细胞均未转录IFN-γmRNA.结论甲状腺细胞能够产生某些细胞因子,但他们在自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中的表达模式有异于正常甲状腺细胞,说明细胞因子参与AITD的发生和发展过程,并且对诱导AITD的免疫紊乱和甲状腺功能异常具有重要意义.
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MEIA在检测HBV特殊表达模式中的意义
乙型肝炎病毒(HBV)血清免疫学标志物检测是目前临床诊断和判断病毒复制及传染性的重要依据之一.我院实验室对HBV感染者用酶联免疫法(ELISA)法检测其HBV血清标志物(HBVM)后,对有特殊表达模式者以微粒子捕捉酶免疫分析法(MEIA)复检,观察两者的异同,为临床HBV感染的诊治提供帮助.
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层粘连蛋白332α3链的表达模式与胰腺癌的关系
目的检测胰腺癌组织中层粘连蛋白332α3链（Laminin 332α3，LNα3）的阳性表达水平，探讨其表达模式与胰腺癌的关系。方法应用免疫组织化学方法（Envision法）检测65例胰腺癌标本中LNα3蛋白的表达情况，以癌旁正常组织作为对照，并分析胰腺癌组织中LNα3蛋白不同表达模式[单一胞质表达（SCT）与胞质/间质共表达（CMT）]与胰腺癌临床病理特征及预后的关系。结果65例胰腺癌组织中LNα3蛋白的阳性表达率100%，显著高于癌旁正常组织（1.6%），差异有统计学意义（P＜0.01）。其中SCT 42例，CMT 23例。LNα3链的不同表达模式与胰腺癌肝转移、血管浸润、胆管浸润均有关（P＜0.05或0.01），胞质/间质的共表达预示胰腺癌患者较高的肝转移率、血管浸润及胆管浸润的风险。肝转移、临床分期、十二指肠浸润和肿瘤位置与胰腺癌患者的生存期明显相关（P＜0.05或0.01），肿瘤位置和临床分期是预测生存期的独立因素（P＜0.05），肿瘤位于胰体尾或临床分期越高的预后差，肝转移、浆膜侵犯、十二指肠浸润均不能作为独立的预测因素（均P＞0.05）。结论 LNα3的表达与胰腺癌的发生、侵袭、转移密切相关，尤其是胞质/间质的共表达可作为判断胰腺癌肝转移、血管浸润、胆管浸润的重要参考指标。但是影响胰腺癌预后的因素较多，需要结合各种因素综合判断。
关键词： 胰腺癌 层粘连蛋白332α3 免疫组织化学 表达模式 -
β-catenin不同表达模式与结直肠癌临床病理因素的关系
目的 探讨β-catenin不同表达模式与结直肠癌组织临床病理因素之间的关系及意义.方法 应用免疫组化法检测181例结直肠癌组织和30例正常结直肠黏膜中β-catenin的表达状况.结果 181例结直肠癌组织中,β-catenin(细胞核)异位表达率为56.9％(103/181),高于正常结直肠黏膜组(P＜0.05).β-catenin细胞核表达与组织分化程度、淋巴结转移及临床Dukes分期有关(P＜0.05),与患者年龄、性别、浸润深度等均无关(P＞0.05).β-catenin细胞膜不完整表达与组织分化、肿瘤浸润深度、淋巴结转移状况及Dukes分期等均有关(P＜0.05);β-catenin高表达与结直肠癌分化程度、Dukes分期有关(P＜0.05).82例随访病例中,β-catenin细胞核阳性患者的5年生存率均明显低于β-catenin阴性组(P＜0.05).结论 β-catenin在结直肠癌发生中起重要作用,其不同表达模式与结直肠癌进展有关,并有助于预后判断,β-catenin有望成为结直肠癌基因诊断及基因治疗的新靶点.
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基因芯片技术在肿瘤研究中的应用
基因芯片技术是20世纪90年代发明的高效率核酸分析技术之一,可以将生命科学研究中许多不连续的分析过程连续化和微型化,同时检测比较生物样品中多个已知或未知序列的表达状况.近来研究证实,肿瘤的发生、发展是一个复杂的多阶段过程,是多种肿瘤相关基因表达失常或许多肿瘤抑制基因失活所致.基因芯片为研究肿瘤发生发展中的基因开关及表达程度提供了强有力的工具,被越来越多的肿瘤生物学家用来比较肿瘤组织与相应正常组织间的基因表达差异,分析肿瘤生长的各期相关基因的表达模式.基因芯片技术在肿瘤研究领域中具有重要应用价值.
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细胞角蛋白20在结直肠癌中的应用
结直肠癌的切除和综合治疗使得5年生存率不断提高,但切除后仍有30%40%的复发和(或)转移,导致患者治疗失败和死亡.因此,肿瘤外科工作者一直在探寻一种既有较高敏感度和特异度又方便快捷经济的非侵入性结直肠肿瘤瘤标,能够监测肿瘤转移和复发,指导临床治疗.癌胚抗原已经应用于临床,但因较低的敏感度和特异度,使其在结直肠癌中的应用受到了限制[1].细胞角蛋白20(cytokeratin20,CK20)是新近发现的细胞角蛋白成员之一,具有独特的分布特点和表达模式.近年来,细胞角蛋白20在结直肠肿瘤中的应用价值逐渐引起人们的重视,本文就其发现、发展及其在结直肠癌中的应用情况作一综述.
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miRNAs及其在医学领域的研究进展
1 miRNAs 简介microRNA(miRNA ,微小RNA ,微小核糖核酸)是一类广泛存在于真核生物中、大小约由22(19-25)个核苷酸(nt)组成的内源性非编码小分子单链RNA .在生物进化过程中高度保守,在细胞中具有时空特异性表达模式.
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基因芯片在听觉及耳聋研究中的应用
越来越多的证据表明,人类的许多疾病,无论是遗传性的还是获得性的,本质上都是由于DNA序列的改变或基因表达谱(profile)或表达模式异常所致.
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CT抗原的研究进展
1991年,Bruggen等人[1]使用基因转染技术发现了第一个癌/睾丸抗原(cancer testis antigen,CTA)MAGE-1.以后的20多年中,不少学者对CT抗原做了大量的研究.CTA是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,其表达具有以下特点[2,3]:①具有共同的表达模式,即在正常组织中仅限于睾丸的生殖细胞如精子、卵子和胎盘的滋养层细胞中表达,而在各种肿瘤组织中有不同频率的表达;②大多数CT抗原位于X染色体上;③通常是以多个家族成员的形式存在;④在各种来源不同的肿瘤组织中,CT抗原的表达常具有异质性.
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慢性乙肝患者肝组织病理改变与病毒标记物表达模式的相关性研究进展
我国属乙型肝炎病毒(HBV)感染高流行区,一般人群的HBsAg阳性率为9.09％[1].其中慢性乙型病毒性肝炎(CHB)为2000～3000万例,每年死于HBV感染相关肝病约30万例[2].人类对于乙型病毒性肝炎的认识初缘于肝炎病毒血清标志物的发现,目前对于乙型病毒性肝炎的诊治和随访,其血清学指标仍是常规开展项目,但由于血清中乙肝病毒标记物表达模式各有不同,以及病毒载量的高低各异,给临床医生带来了新的思考:肝脏病理损害程度与之是否存在必然联系.近年来,得益于肝穿及肝组织活检的广泛开展,对于肝组织病理学改变与病毒标记物表达模式的相关性作了大量的研究,现综述如下.
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小鼠乳腺增生组织中BMP信号通路的改变
目的:探明骨形态发生蛋白(BMP)信号分子在乳腺增生组织中的表达模式和BMP通路的激活情况.方法:8周龄的未孕雌性C57BL/C小鼠按体重随机分为2组:对照组和激素组,每组15只.激素组先以2.5 mg/kg的戊酸雌二醇灌胃25 d,再腹腔注射黄体酮(4 mg/kg)5 d诱导乳腺增生;对照组予以等体积的PBS.给药结束后收集乳腺组织,观察乳腺的形态,real-time PCR检测BMP信号分子的表达水平,并用Western blot 检测Smad1/5/9的磷酸化水平.结果:与对照组比较,在乳腺增生组织中,BMP信号通路配体BMP2、4、5、6、7、9、13和14,受体BMPR1A及拮抗剂Chrdl1和Twsg1的表达异常(P<0.05);而BMP3、BMP12、BMPR1B、BMPR2、Chrd、Chrdl2和Nog-gin等分子的表达则无明显改变;Western blot结果显示乳腺增生组织的Smad1/5/9的磷酸化水平升高(P<0.05).结论:多个BMP信号分子在乳腺增生组织中异常表达,致使BMP通路异常激活.BMP信号通路可能成为治疗乳腺增生的新靶点.
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细胞自噬在胚胎心管形成过程中的作用
目的：细胞自噬是溶酶体参与降解多种细胞内容物的过程，具有重要的病理及生理学作用，本研究主要关注细胞自噬是否在胚胎发育早期心管形成中也具有重要作用。方法：应用鸡胚为模式动物，采用免疫荧光的方法研究自噬相关基因7（ auto－phagy－related gene 7，ATG7）在胚胎早期的表达模式，随后用雷帕霉素（ RAPA）、3－甲基腺嘌呤（3－MA）等分别处理胚胎，用Time－lapse拍摄心脏祖细胞的迁移模式，免疫荧光、原位杂交等方法检测ATG7、LC3、MF－20、GATA4、GATA5等基因的表达情况。结果：RAPA和3－MA能够分别影响ATG7、E－Cadherin等基因的表达模式，导致胚胎早期上皮细胞向间充质细胞转化紊乱；高葡萄糖环境或酒精处理能够过度激活胚胎发育过程中的细胞自噬，导致胚胎心管肥大或者融合异常，这与RAPA处理的胚胎心管畸形极为相似；细胞自噬过度激活影响心脏祖细胞迁移和GATA4、GATA5等心管生成基因的表达。结论：妊娠合并糖尿病及妊娠期饮酒等因素会导致胚胎发育环境中细胞自噬的过度激活，从而影响细胞内的蛋白降解异常和细胞分化异常等，终导致胚胎心管发育畸形。
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胞红蛋白对巨噬细胞氧化损伤的保护作用
目的：本文探讨巨噬细胞氧化应激过程中胞红蛋白（ CYGB）表达模式；研究CYGB在巨噬细胞氧化应激过程中的作用。方法：（1）Western blot检测RAW264．7细胞在H2O2刺激不同时间CYGB的蛋白表达水平；检测RAW264．7细胞在不同浓度H2 O2刺激12 h时CYGB蛋白的表达水平。（2）构建CYGB过表达／低表达巨噬细胞模型，将RAW264．7细胞分为4组：对照组、0．5 mmol／L H2 O2处理组、0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB过表达组及0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB低表达组。12 h后，检测CYGB蛋白水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和超氧化物歧化酶（SOD）；荧光定量PCR检测CYGB和NF－κB在细胞中的表达。结果：（1）Western blot结果显示：H2O2处理6、12和24 h组CYGB表达水平高于对照组，并且在12 h组CYGB表达水平高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。0．25 mmol／L H2 O2、0．5 mmol／L H2 O2和1 mmol／H2O2处理巨噬细胞12 h后CYGB表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）。（2）Western blot结果显示：0．5 mmol／L H2 O2处理组、0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB过表达组及0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB低表达组CYGB蛋白表达水平均高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）。0．5 mmol／L H2O2＋CYGB过表达组的CYGB表达高（P＜0．05），0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB低表达组的CYGB表达较0．5 mmol／L H2 O2处理组低，差异有统计学意义（ P＜0．05）。酶联免疫吸附测定法（ELISA）和ROS检测结果显示：与0．5 mmol／L H2O2相比，0．5 mmol／L H2O2＋CYGB过表达组中GSH－Px、SOD升高，LDH、MDA和ROS下降；与0．5 mmol／L H2 O2组相比，0．5 mmol／L H2 O2＋CYGB低表达组中GSH－Px和SOD下降，LDH、 MDA和ROS升高。荧光定量PCR检测显示：与正常对照组比较，H2 O2处理组CYGB和NF－κB表达均上调（ P＜0．05）。与H2 O2对照组比较，CYGB过表达组CYGB表达较高，NF－κB表达较低（P＜0．05）；CYGB低表达组CYGB表达较低，NF－κB表达较高（P＜0．05）。结论：CYGB在巨噬细胞中表达，在H2 O2刺激时表达水平增加；CYGB在巨噬细胞氧化应激损伤过程中具有细胞保护作用。
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癌－睾丸抗原OIP5的研究进展
癌－睾丸抗原（cancer-testis antigen，CTA）是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原，自从 VANDER BRUGGEN等［1］发现首个 CTA（MAGE-A1）后，多种 CTA 相继被发现，目前已有200多个 CTA 在 CTA 数据库中注册（http：／／www．cta．lncc．br／）。由于CTA能在多种肿瘤组织中表达，而在大多数正常组织（除外睾丸或卵巢和胎盘外）不表达或少量表达，并且能在肿瘤患者体内引起体液和细胞免疫反应。因此，CTA被认为是肿瘤免疫治疗的理想靶点。目前，CTA的一些成员（如 MAGE-A1、MAGE-A3和 NY-ESO-1等）的肿瘤免疫治疗已进入临床试验阶段，并在一些肿瘤的治疗中取得较好的疗效［2－5］。 OIP5（Opa interacting protein 5）是CTA 家族成员之一，本文将对其基因结构、表达特性和生物学功能等方面综述如下。
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家蝇Attacin基因在家蝇三龄幼虫中的时间表达模式研究
目的 探讨家蝇Attacin mRNA在幼虫各个时期的表达,为进一步研究家蝇的免疫防御打下基础.方法 对家蝇三龄幼虫进行诱导,分别取诱导前0 h和诱导后2 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h、36 h、48 h的家蝇mRNA,进行RT-PCR,分析attacin基因在家蝇体内的时间表达模式.结果 家蝇三龄幼虫体内的attacin基因在诱导前后均有表达,诱导后表达增强16 h达到相对高水平,维持约24 h,而后开始下降.结论 Attacin基因在家蝇三龄幼虫中是组成性表达,对进一步了解其在家蝇免疫系统,丰富对昆虫天然免疫的认识具有积极作用.
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真皮组织瓣修复口内粘膜缺损后再生上皮角蛋白表达模式的实验研究
目的观察真皮瓣移植口内后再生上皮角蛋白表达模式的变化.方法 12只成年健康家犬的右侧颊粘膜人为造成缺损,以颈阔肌真皮瓣(PMDF)立即修复,免疫组化染色观察愈合过程中组织瓣表面上皮角蛋白CK10、CK19表达模式的变化.结果真皮瓣转移后4周,再生上皮基底层及基底上层少量表达CK19;12周后再生上皮基本保持皮肤原有表达模式.结论真皮瓣转移口内后表面的再生上皮维持表皮原有结构,未发生粘膜化改变.
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检测家蝇抗菌肽基因diptericin时间表达模式的实时荧光定量方法的建立
目的 建立荧光染料(SYBR Green Ⅰ)实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法检测的家蝇抗菌肽基因diptericin 时间表达模式方法.方法 基于已克隆出的diptericin基因,利用软件Prmier5.0设计上下游引物,对未诱导,诱导后2h、4h、8h、12 h、24 h、36 h、48 h及不同发育阶段的家蝇三龄幼虫进行real-time PCR设计引物,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线.结果 未刺激的三龄幼虫diptericin基因表达量非常低,与诱导后2h的相比,差1个数量级,诱导后2h开始缓慢上升,12h后达到高峰,24h后缓慢下降,36 h后回到诱后2h的水平,在家蝇三龄幼虫的卵、1龄及2龄期的表达量非常低,3龄期达到高峰.结论 实时荧光定量PCR检测家蝇抗菌肽基因 diptericin 的方法具有特异性好、灵敏度高,为进一步探讨家蝇抗菌肽生物活性,研究新的抗菌药物打下初步基础.
关键词： 家蝇 抗菌肽基因 diptericin 实时荧光PCR 表达模式 -
基因芯片在肝癌研究中的应用进展
肝癌是一种常见的恶性肿瘤,居我国癌症死亡的第2位.它的发生发展是一个复杂的多阶段、多因素、多基因参与的过程.面对错综复杂的基因分析,一次只能研究少量基因且操作复杂费时的传统方法已显局限.新近发展的基因表达分析平台--基因芯片技术能克服传统方法的缺点,已成为肝癌发生发展中的基因表达及表达程度方面研究的强有力工具,用它可以随意获取肝癌生长各期与肝癌相关基因的表达模式,确定肝癌发生发展中基因突变位点;同时,根据基因型将肝癌分类,寻找新的药物作用靶点以及进行药物筛选,在肝癌发生的分子机制研究和临床诊断治疗中都具有非常重要的应用价值.本文综述了基因芯片技术及其在肝癌研究中的应用进展.
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CXCL14在人子宫内膜中的时序性表达及其与子宫内膜容受性的关系
目的 研究CXCL14在人子宫内膜中的时序性表达,探讨其与子宫内膜容受性形成的关系. 方法 应用Real-time PCR法检测18例正常妇女月经周期不同时期子宫内膜中CXCL14 mRNA的表达变化,应用冰冻切片免疫荧光的方法检测CXCL14蛋白水平的表达及组织分布,观察CXCL14 表达变化与着床窗开放的关系. 结果 CXCL14 mRNA和蛋白表达变化一致,在分泌中晚期子宫内膜中表达增高,在分泌中期达顶峰. CXCL14蛋白在子宫内膜上皮和基质中均有分布,主要分布在子宫内膜腺上皮和腔上皮中,与着床窗的开放时间一致. 结论 CXCL14在子宫内膜容受窗期特异性高表达,可能参与了子宫内膜容受性的形成.
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儿童血清乙型肝炎五项标志物检测结果分析
目的探讨儿童乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)血清学标志物的表达模式.方法对1687份申请乙肝五项的儿童血清标本采用快速酶联固相免疫法(ELISA)进行检测,以聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA.对HBV感染标本的血清学标志物设定其表达模式为:(1)乙肝表面抗原(HBsAg)、(2)乙肝表面抗体(抗-HBs)、(3)乙肝e抗原(HBeAg)、(4)乙肝e抗体(抗-HBe)和(5)乙肝核心抗体(抗-HBc),并以出现阳性项目的序号为该模式的代码.结果共获得335份HBV感染标本,占全部标本19.86%,HBV感染模式以HBsAg是否为阳性,分为感染期模式和恢复期模式,共发现13种.感染期模式中以"135"模式为主,占感染标本50.45%.抗-HBs单项阳性标本占53.23%(898/1687).结论儿童乙型肝炎病毒血清学标志物表达模式比较复杂,以"135"模式为HBV感染的主要模式.
