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CARP抗体制备及表达模式分析
目的: 制备心肌锚定重复序列蛋白(CARP)的抗体并分析其表达模式.方法: 通过生物信息学对其抗原性进行分析, 通过RT-PCR从小鼠的心肌cDNA中扩增了N-端279 bp的片段, 并克隆到表达载体pET 28b中, 使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化CARP蛋白, 用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.利用制备的抗体, 通过Western blot和免疫荧光的方法, 分别检测了CARP在各组织和细胞中的表达模式.结果: 制备了CARP抗体, 进一步验证了CARP表达在蛋白水上呈心肌特异性, 在大鼠心肌原代细胞中主要在细胞核中表达.结论: 成功制备了CARP抗体, 分析了CARP的表达模式, 为进一步CARP的功能奠定了基础.
关键词： 心肌锚定重复序列蛋白 原核表达 抗体制备 表达模式 -
宫颈鳞癌组织中ASPP家族的表达和预后分析
目的 研究宫颈鳞癌组织中P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating P53 protein,ASPP)家族的表达模式以及预后分析.方法 应用免疫组织化学(SP)方法检测72例宫颈鳞癌和正常组织中ASPP蛋白家族的表达,采用Kaplan-Meier和log-rank方法分析5年生存期与ASPP家族的相关性.结果 在正常组织中ASPP1和ASPP2的表达阳性率明显高于癌组织(x2 =25.533,33.029,P=0.000),而宫颈癌组织中iASPP的表达阳性率高于正常组织(x2=36.575,P=0.000).宫颈鳞癌中ASPP2的低表达和iASPP的高表达均与患者的年龄明显相关(x2=5.426,P=0.020;x2=13.117,P=0.001);ASPP1的表达与宫颈癌病理分级有关(x2=8.814,P=0.023),而iASPP的表达与临床分期和淋巴结转移均有关(x2=14.859,P=0.001;x2 =15.376,P=0.000),iASPP的表达与患者5年生存期有关(x2=34.888,P=o.000).结论 ASPP蛋白家族可能参与宫颈鳞癌癌变机制过程中,iASPP可能是基因治疗宫颈鳞癌的一个分子靶点.
关键词： P53凋亡刺激蛋白家族 宫颈鳞状细胞癌 表达模式 预后分析 -
肝炎病毒相关原发肝细胞癌中信号通路和基因的变化
原发性肝细胞癌(HCC)是全世界10大常发肿瘤之一,5年平均生存率＜3%.由于缺乏可靠的标志物,HCC无法早期检测.确诊时已无法成功地治疗.在HBV感染中,HBV编码的X抗原(HBxAg)是HCC的主要遗传致病因子.HBxAg是反式激活蛋白,在体外可促进肝细胞生长、存活转化以及转基因鼠中HCC的发展.其作用机制主要是通过激活细胞质信号转导通路,激活促肝细胞生长和存活的细胞因子,直接与核转录因子结合等引起HCC的发生[1].HCV感染与HCC的发生紧密相关,HCV核心抗原在转基因小鼠的肝癌中表达过多,非结构蛋白NS5A有反式激活性,可改变宿主与转化相关基因的表达模式.HepG2细胞中复制的HCVcDNA在体外可刺激生长和存活,在体内可加速肿瘤的形成[2].
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人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达
目的:系统研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化.方法:应用密度梯度离心法分离hBMSCs,取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定;应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测.结果:第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90,具有成脂和成骨分化潜能.成骨相关基因在诱导早期部分表达,中期均有表达,基因表达大部分在14天达高峰,与矿化相关的基因表达在21天达高峰.结论:hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达,其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似.
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石蜡包埋的肝细胞癌组织中ASPP家族的表达
目的:研究肝细胞癌中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的表达以及临床意义.方法:应用免疫组织化学SP方法检测73例甲醛固定和石蜡包埋的肝细胞癌组织切片和相应癌旁正常组织中ASPP蛋白家族的表达情况.结果:在癌旁正常组织中,ASPP1和ASPP2的表达阳性率高于肝细胞癌组织(P=0.000,0.000),但是肝细胞癌组织中iASPP的表达阳性率高于相应癌旁正常组织(P=0.000).在肝细胞癌组织中,ASPP1的表达与患者性别、年龄、临床分期以及淋巴结转移均无相关性(P＞0.05),但与病理分级有关(P=0.001);ASPP2的表达与病理分级和临床分期有关(P=0.000,0.000),与性别、年龄以及淋巴结转移无关(P＞0.05).iASPP的表达与淋巴结转移有关(P=0.004),但是与性别、年龄、病理分级和临床分期无关(P＞0.05).结论:ASPP蛋白家族异常表达可能与肝细胞癌的发生机制相关,ASPP1和ASPP2表达水平下调并与肝细胞癌病理分级相关,而iASPP的表达水平上调与癌的淋巴转移相关,iASPP可能是基因治疗肝细胞癌的一个靶点.
关键词： 肝细胞癌 P53凋亡刺激蛋白家族 表达模式 临床意义 -
赖氨酰氧化酶样基因3在人皮肤成纤维细胞株中的表达
目的 研究体外培养的人皮肤成纤维细胞株中赖氨酰氧化酶样基因3 (lysyl oxidase-like gene 3, LOXL3) 的表达模式.方法 提取不同生长阶段的人皮肤成纤维细胞株的不同组分,用Northern Blot和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平分析LOXL3表达,并以免疫荧光方法观察LOXL3的分布部位.结果 LOXL3 mRNA和蛋白含量在细胞汇合前低于细胞汇合期,汇合后高,且LOXL3分布在整个细胞浆和细胞核.结论 LOXL3的表达量在细胞生长的不同阶段有所不同,可能与其功能有关.
关键词： 赖氨酰氧化酶样基因3 成纤维细胞 表达模式 -
EZH2蛋白在人胎儿器官发育过程中的表达模式
目的：检测果蝇zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)蛋白在人胎儿发育过程中的表达模式，为了解EZH2在胎儿发育过程中可能的作用，提供新的、多器官的信息。方法：收集不同胎龄流产或死产胎儿33例及1例新生儿标本。选取食管、胃、小肠、结肠、肝、胰、腮腺、甲状腺、肾上腺、肺、气管、心脏、大血管(主动脉或肺动脉)、肾、膀胱、子宫、卵巢、睾丸、脾、胸腺、大脑等器官组织，经HE染色辨别形态学结构并构建组织芯片后，进行EZH2免疫组化染色检测。结果：在所有检测的上述胎儿器官中EZH2蛋白均有表达，但在不同的组织器官和不同的胎龄其表达水平不同。EZH2蛋白阳性染色主要定位于细胞核，在部分细胞同时也有细胞质阳性染色。结论：EZH2在人类胎儿期的各器官组织均有表达，表达模式有胎儿发育时间的差异性和高度的组织特异性。
关键词： zeste基因增强子人类同源物2 胚胎 发育 表达模式
