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肌醇加氧酶在糖尿病肾病发病机制中的作用
[目的] 研究高糖环境下大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶(myoinositol oxygenase,MIOX)的表达及糖尿病肾病大鼠体内肌醇耗竭的机制.[方法] 体外培养大鼠近曲肾小管上皮细胞株(NRK-52E),将其分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)和渗透浓度对照组(MG),并分别于12、24、48、72 h应用RT-PCR法检测MIOX的mRNA表达,免疫荧光细胞化学法检测其蛋白的表达.[结果] HG组MIOXmNA与蛋白表达水平在12 h出现升高,二者分别在24 h与48 h达高峰.NG组的MIOXmRNA及蛋白表达水平各时间点差异无显著性意义(P>0.05);与NG组和MG组相比,HG组MIOX的mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01).MG组明显高于NG组(P<0.05).[结论] 高糖能促进大鼠肾近曲小管上皮细胞肌醇加氧酶(MIOX)的表达,并可能通过MIOX的形成增加介导肌醇的耗竭,提示MIOX参与了糖尿病肾病的发生发展.
关键词： 大鼠肾近曲小管上皮细胞 肌醇加氧酶 肌醇 糖尿病肾病 -
Miox基因在爪蟾胚胎发育中的时间和空间表达谱分析
目的 研究肌醇加氧酶(myo-inositol oxygenase,Miox)基因在物种进化及爪蟾胚胎发育过程中的时间和空间表达的分布特点.方法 利用半定量RT-PCR观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的时间表达模式,利用整体原位杂交方法观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的空间表达模式.结果 RT-PCR结果显示Miox基因在胚胎发育第26期以前都没有表达,至胚胎发育第28期开始有微量表达,随着胚胎的发育其表达量逐渐增高;胚胎发育第40期表达明显升高,第41期时达到高,第45期时表达有所下降.与胚胎发育第28、34期相比,第40、41、45期表达上调(P＜0.05);与胚胎发育第40期相比,第41期表达上调(P＜0.05);然而,同胚胎发育第41期相比,第45期表达下调(P＜0.05).整体原位杂交方法发现在胚胎发育30期以前均没能检测到Miox在爪蟾任何器官中的表达,从33期开始,Miox在爪蟾前肾有很微弱的表达,且Miox的表达随着发育的进展逐渐升高.整体原位杂交方法结果同RT-PCR结果相类似,直至第39～40期,Miox的表达才明显升高,并且在随后的时期都以同样高的水平表达.另外,Miox基因在爪蟾胚胎发育过程中均仅仅在原肾小管表达.结论 Miox是一个肾脏特异性基因,对于研究肾脏发育可能提供一个特异性标记.
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高糖对人肾小管上皮细胞肌醇加氧酶表达的影响
目的:研究高糖环境下人近端肾小管上皮细胞肌醇加氧酶(MIOX)的表达.方法:将人近端肾小管上皮细胞株HK-2分组培养,正常对照组培养基含5.5 mmol/L D-葡萄糖,渗透浓度对照组培养基含19.5 mmoL/L甘露醇和5.5 mmoL/L D-葡萄糖,高糖组培养基含25 mmol/L D-葡萄糖.分别于培养12、24、48、72 h后取出爬片,应用免疫荧光细胞化学法检测MIOX蛋白的表达.结果:正常对照组和渗透浓度对照组HK-2细胞胞质MIOX蛋白微弱表达,各时间点表达量差异无统计学意义(P>0.05).高糖组培养12 h时,HK-2细胞MIOX蛋白表达即增高,随培养时间的延长,MIOX蛋白表达量逐渐升高,于48 h达高峰.高糖组MIOX蛋白表达水平较正常对照组升高(P<0.01).结论:高糖能促进人近端肾小管上皮细胞MIOX的表达,从而介导糖尿病患者体内肌醇耗竭.
