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白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达
背景：造成假体周围骨溶解的完整分子机制目前尚未完全清楚。假体周围骨溶解、吸收是人工关节松动的典型病理生理过程。白细胞介素1通过MAPK信号通路影响骨吸收进程。
目的：实验通过观察siRNA沉默白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4， IRAK-4)基因表达对人成骨样细胞株MG63的MAPK信号转导通路的影响，为防治人工关节置换后假体周围骨溶解提供实验基础。
方法：以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞。实验分为3组，空白组不加入任何转染试剂；对照组以 scrambled siRNA 序列进行转染；沉默组以特异性 IRAK-4-siRNA 序列进行转染。Western blot检测靶细胞细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。
结果与结论：与对照组相比，靶基因沉默组的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。MG63细胞 IRAK-4表达下调后，与空白组和对照组相比，c-Jun 氨基末端激酶1/2P46、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2、磷酸化p38MAPK表达下调分别为62%，64%，68%(P <0.05)。结果证实，siRNA沉默IRAK-4基因抑制人成骨样细胞株MG63细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。 -
重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节
背景：结核杆菌热休克蛋白10是引起骨结核骨质溶解和吸收主要因素之一，抑制成骨细胞的增殖。核因子κB受体活化因子配体及骨保护素是影响骨代谢的重要指标。
目的：观察重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性和核因子κB受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达的影响。
方法：将人骨髓基质干细胞定向诱导分化筛选为成骨细胞，取第3代细胞，用含质量浓度为0.1，1，10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10培养液培养，对照组成骨细胞正常培养。
结果与结论：MTT 实验结果显示，与对照组相比，不同质量浓度重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性(P<0.05)。RT-PCR实验显示，与对照组相比，不同质量浓度的重组结核杆菌热休克蛋白10均增加成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体mRNA表达(P<0.01)，降低护骨素mRNA表达(P<0.01)，均呈剂量依赖性，质量浓度10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10作用明显(P<0.01)。结果证实，重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性，通过调节核因子κB 受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达而影响骨代谢。 -
2型糖尿病大鼠骨痂内Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合
背景：研究表明Osx、Dlx5等基因的表达水平与骨折愈合障碍可能存在一定关系。目的：分析2型糖尿病大鼠牵引骨痂中Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合障碍的关系。方法：选择8周龄SD大鼠32只，随机分为2组，实验组(18只)高糖高脂饲料喂养8周，链脲佐菌素腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型；对照组喂普通大鼠饲料予以同样剂量柠檬酸腹腔注射。2组大鼠同时建立骨折牵引模型，定期延长外固定架，牵引模型建立后15 d处死大鼠并收集血液标本检测生化指标，X射线观察骨痂生长情况，取左胫骨骨痂组织进行组织学观察，检测骨痂组织中Dlx5、Osx蛋白及相关基因的表达。结果与结论：X射线摄片结果：实验组牵引骨痂较对照组明显减少，骨痂组织苏木精-伊红染色显示：实验组较对照组的微骨柱明显减少；初始基质前沿浅染。而骨痂的组织学定量分析则显示：实验组新生骨痂的形成面积较对照组减少而骨折近端脂肪细胞数量增多(P <0.01)。QPCR检测则显示：实验组较对照组骨痂组织中Osx表达降低(P <0.05)，Dlx5表达降低(P <0.05)。结果提示，2型糖尿病大鼠骨折愈合较正常大鼠明显减慢，可能与2型糖尿病Osx、Dlx5表达降低具有相关性。
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新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定
背景：组织工程需要大量的种子细胞，成骨细胞是骨组织工程的重要种子细胞之一。但是成骨细胞培养难度大，不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。目的：验证及比较成骨细胞原代培养常用的3种方法，探索一种操作简便，既经济又高效的原代培养成骨细胞的方法，为进一步的实验研究奠定基础。方法：取新出生72 h 内SD大鼠乳鼠颅骨，以胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法分离成骨细胞，进行细胞形态观察、细胞化学染色、CCK-8法绘制生长曲线及锥虫蓝排斥法计数活细胞率。结果与结论：分离培养的成骨细胞增殖良好，具备典型成骨细胞特性，细胞化学染色结果明显。胶原酶消化法比分段胶原酶消化法提取的成骨细胞数量多，细胞存活率高(P<0.05)；且比分段胶原酶消化法操作简单，耗时短。组织块法操作为简单，对细胞损伤较小，但是细胞数量低、耗时长，很难用于大规模成骨细胞培养。胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原代成骨细胞分离培养方法。
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不同时期转染基因对牵引区新骨生成的影响
背景：前期研究表明,电穿孔介导的重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165能促进牵引区早期新生血管的形成和新骨形成。
目的：观察不同时机转染基因对兔下颌骨牵张成骨过程中牵引区新骨生成的影响，探索基因导入的佳转染时间，以获得更好的治疗效果。
方法：新西兰大白兔48只，全麻下行双侧下颌骨截骨及牵引器植入后，采用随机区组法分成4组，分别于造模后即刻、牵引开始时、牵引结束时在双侧牵引区注射2μg(0.1 g/L)重组质粒pIRES-hBMP2-hVEGF165，3组均予电穿孔刺激；单纯牵引组单纯牵引不行基因转染。各组于造模后3 d开始以0.8 mm/d、1次/d的速率进行牵引，连续牵引10 d；各组分别于固定期1，2，4，8周处死3只兔子，切取下颌牵引区新生组织行组织学检测和形态计量学分析。
结果与结论：组织学检查和形态计量学分析发现，牵引期转染组与即刻转染组、固定期转染组、单纯牵引组比较间隙内有更多的新生血管、成骨细胞和间充质细胞等成分，各时点新生骨量与新生骨小梁宽度明显高于后者(P <0.05)。表明在牵引开始时(牵引期)进行基因转染较其他时间转染促进新骨生成作用明显，能够获得佳的促进新骨生成的效果，提示牵引期是下颌骨基因治疗的佳时机。 -
短期中等强度跑台运动对雄性高脂血症大鼠骨密度的影响
背景：高脂血症可导致大鼠骨质疏松，适量运动可增加骨密度，但短期运动对高脂血症导致骨质疏松的雄性动物骨密度的影响尚不清楚。
目的：探讨短期中等强度跑台运动对雄性高脂血症大鼠骨密度的影响。
方法：将26只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(n=8)、高脂血症组(n=9)、运动干预组(n=9)。正常对照组喂饲普通饲料；其他两组喂饲高脂饲料建立大鼠高脂血症模型，持续4周。运动干预组大鼠进行跑台训练，每周训练5 d，共4周，每天强度为：第1周15 min，速度15 m/min；第2周20 min，速度15 m/min；后2周20 min，速度20 m/min，跑台坡度均为0°。实验结束后处死大鼠，取其右侧股骨检测骨密度、胫骨观察骨形态变化，测定血浆碱性磷酸酶活性和钙磷含量。
结果与结论：与正常对照组比较，高脂血症组股骨远端骨密度显著降低(P<0.05)，胫骨近端骨小梁排列稀疏变薄，间隙增宽，髓腔内有大量脂肪细胞浸润或融合成空泡，血浆碱性磷酸酶明显增加(P<0.01)。与高脂血症组比较，运动干预组股骨远端骨密度显著增加(P <0.05)，经体质量校正后股骨全骨密度增加(P <0.05)，胫骨近端骨小梁排列致密整齐，小梁间距小，血浆碱性磷酸酶增加(P<0.01)。血浆钙磷含量各组间差异无显著性意义。实验结果说明短期中等强度跑台运动增加高脂血症雄性大鼠骨密度。 -
雌激素受体β基因沉默对成骨样MG63细胞骨保护素和RANKL表达的影响
背景：目前对雌激素β受体基因如何参与骨代谢的研究较少。目的：研究雌激素受体β对人成骨样细胞骨保护素、核因子kB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)表达的影响。方法：将先前含有有效干扰序列及非特异性shRNA的反转录病毒分别感染人成骨样MG63细胞株后，筛选稳定克隆并扩大培养，以空白及非特异性shRNA作为对照，检测稳定抑制雌激素受体β的效率。分别向3组细胞即MG63细胞、雌激素受体βshRNA反转录病毒感染的MG63细胞、阴性对照shRNAnc反转录病毒感染的MG63细胞加入17β-雌二醇(E2)干预，检测人成骨样细胞株MG63的骨保护素、RANKL mRNA和蛋白表达情况。结果与结论：用pRNAT-H1.4/Retro-雌激素受体β-shRNA3进一步稳转人成骨样MG63细胞株，与空白及阴性病毒对照组相比，筛选出雌激素受体β表达稳定抑制的人成骨样细胞株，雌激素受体βmRNA 抑制率为(88.17±1.17)%(P<0.05)，蛋白抑制率为(89.01±1.22)%(P<0.05)，证实实验成功建立了人成骨样细胞ERβ亚型基因敲低细胞模型。雌激素干预48 h后，显示雌激素受体β稳定抑制的MG63细胞较空白组及阴性对照组骨保护素 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05)，RANKL mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)，骨保护素RANKL表达上调(P<0.05)，提示雌激素受体β可能通过调节骨保护素/RANKL在骨代谢中发挥作用。
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不同氧环境中破骨细胞特异性基因的表达
背景：课题组以往研究证实，氧浓度过低乃至处于低氧时(体积分数2%O2的分化和功能都受到抑制，但体外培养的破骨细胞在不同氧环境下的基因表达未见有相关报道。
目的：实验拟观察不同氧环境下破骨细胞各特异性基因的表达规律，探寻氧环境改变影响破骨细胞分化的表达机制。
方法：将破骨前体细胞株经质量浓度均为10μg/L的核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子联合诱导成为成熟的破骨细胞，然后分别置于常氧、组织氧、低氧(体积分数20%，7%，2%)条件下培养，用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞形成的变化，并分别在培养第1-7天收集细胞，通过定量PCR方法检测核因子κB受体活化因子，肿瘤坏死因子受体相关因子6，抗酒石酸酸性磷酸酶，组织蛋白酶K基因mRNA的表达。
结果与结论：低氧条件下抗酒石酸酸性磷酸酶阳性的破骨细胞数显著低于组织氧和常氧培养时形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数(P<0.05)。不同氧环境下，破骨细胞中核因子κB受体活化因子mRNA的表达无明显改变，组织氧和常氧培养下肿瘤坏死因子受体相关因子6 mRNA的表达在培养第5天高(P<0.05)。随着氧浓度的降低，抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K mRNA表达时间延后，组织氧培养条件下此2者的表达可以保持在高水平。结果证实，与常氧和低氧条件相比，破骨细胞在组织氧培养条件下培养时更易促进其分化，从而维持其活性和功能。 -
自体骨髓浓缩物修复种植体周围的骨缺损
背景：目前，自体骨髓浓缩物主要应用于骨科、重症肢体缺血患者，其在口腔颌面外科尤其是种植外科应用较少，在种植体周围促进新骨再生的效果也有待研究。
目的：评价自体骨髓浓缩物在种植体周围骨缺损修复中的作用。
方法：于实验犬髂后上棘处抽取骨髓5 mL，对浓缩前后的骨髓进行细胞计数。在实验犬的双侧下颌前磨牙区植入种植体，并于近中制作4 mm×4 mm×4 mm的骨缺损，随机植入骨髓浓缩物混合明胶海绵、自体骨、明胶海绵。术后4，12周对骨缺损标本进行组织学观察分析，并计算新骨生成率和新骨密度。
结果与结论：骨髓细胞平均浓缩倍数为(2.78±0.22)倍。浓缩骨髓中，可观察到更多和更大的克隆单位。组织学分析发现，4周时骨髓浓缩物明胶海绵组的新骨生成率和密度均明显高于自体骨组和明胶海绵组(P<0.05)，12周时骨髓浓缩物明胶海绵组新骨生成率明显低于自体骨组，但高于明胶海绵组(P<0.05)，3组新骨密度差异无显著性意义(P>0.05)。结果显示自体骨髓浓缩物能够显著提高种植体周围骨缺损内早期新生骨的质量。 -
骨密度影像学测量与椎体骨折率评估结合提高骨质疏松的诊断率
背景：临床上用于诊断骨质疏松症的通用指标：脆性骨折或骨密度 T ≤-2.5标准差，只要满足一个条件即可作出骨质疏松的诊断。在做骨密度检查时同时进行椎体骨折评估，可以避免单一因素的评判造成骨质疏松症的漏诊，有利于提高骨质疏松的诊断率。
目的：评估骨密度结合椎体骨折对骨质疏松症临床诊断率的影响。
方法：对217例年龄≥50岁的绝经后女性患者行髋部骨密度检测，同时进行椎体骨折评估，比较单纯依靠骨密度检查与骨密度结合椎体骨折评估对骨质疏松的诊断率的影响，同时探讨骨密度对椎体骨折率的影响。
结果与结论：92例骨密度T ≤-2.5，达到骨质疏松诊断阈值，占42.4%；102例骨密度-1> T >-2.5，为低骨量，占47.0%；23例骨密度在正常范围，骨密度T>-1，占10.6%。158例无椎体骨折；59例(27.2%)椎体骨折，101个骨折椎。骨密度T>-2.5的患者椎体骨折率为21.6%，骨密度T ≤-2.5的患者椎体骨折率34.8%，两组骨折率比较差异有显著性意义(P <0.05)；骨密度结合椎体骨折评估的骨质疏松诊断率为54.8%，比单纯依靠骨密度检查，骨质疏松诊断率提高12.4%(P=0.01)。说明绝经后女性做骨密度检测的同时进行椎体骨折评估可以提高骨质疏松的诊断率。 -
弯曲应力作用下兔胫骨骨干皮质骨的骨重建方式
背景：骨所承受的应力变化是骨重建的重要刺激源。目前应力与骨重建关系的研究集中在轴向应力对骨重建的影响，而对弯曲应力环境下的骨重建模式缺乏研究。
目的：观察在长期弯曲应力作用下生长期兔胫骨骨干皮质骨骨重建的方式。
方法：在兔左胫骨近端内侧骨骺线远侧0.5 cm处开一直径2.5 mm骨窗，用冰盐水将兔胫骨及记忆合金片降温，降温后将记忆合金片拉直后经骨窗置入胫骨髓腔。记忆合金置入方向：使其复温后两端抵在外侧骨皮质上，弧形顶点抵向内侧骨皮质，缝合伤口。通过胫骨髓腔内置入的形状记忆合金片，给予兔胫骨骨干内部施加持续弯曲应力，观察胫骨骨干皮质骨在长期弯曲应力环境下骨重建的模式。
结果与结论：在6个月持续弯曲应力作用下，兔胫骨骨干张应力侧骨皮质变薄，压应力侧骨皮质增厚，胫骨未观察到明显弯曲形变，压力侧骨皮质增厚程度与胫骨上的应力分布有关。结构完整的胫骨对弯曲应力表现出一种内在的“抗性”，说明无骨折长骨骨干部分基本上不具备力线矫正潜力。实验结果提示，弯曲应力下兔胫骨骨干皮质骨骨重建模型创伤小，应力可控，不影响骨的生长和代谢，不限制实验动物活动，更符合生理状态，是一个理想的骨重建动物模型。 -
阿仑膦酸钠改善去卵巢大鼠的骨基质结构
背景：双膦酸盐可以提高骨密度、抑制骨吸收的作用已被临床所证实，但其对于骨骼基质结构的影响研究较少。
目的：实验通过观察双膦酸盐类药物--阿仑膦酸钠对骨结构及骨基质代谢的影响，探讨阿仑膦酸钠改善骨质量、提高骨强度的骨基质调控机制。
方法：实验建立去卵巢大鼠模型，用阿仑膦酸钠进行干预，同时设置模型组和假手术组进行对照。运用骨骼影像学、骨组织病理学和骨生物力学检测技术与酶联免疫吸附法观察阿仑膦酸钠对骨丢失大鼠骨密度、骨代谢、骨生物力学性能和骨结构的影响。
结果与结论：药物干预后4，8，12周，阿仑膦酸钠组骨密度均高于模型组(P<0.05)；药物干预8周后，与模型组相比，阿仑膦酸钠组骨代谢指标尿脱氧吡啶诺啉，血清Ⅰ型胶原羧基端前肽水平均降低(P<0.05)，腰椎和股骨的大载荷、大压强、模量以及Ⅰ型胶原不同交联形式的尿吡啶啉/脱氧吡啶啉值均增高(P<0.05)。结果证实，阿仑膦酸钠能够对抗因雌激素缺乏导致大鼠骨量的丢失，提高生物力学性能，改善骨基质结构，同时恢复因去卵巢所导致的Ⅰ型胶原交联组分的改变。 -
地塞米松诱导成骨细胞凋亡的蛋白激酶C途径
背景：地塞米松以增加细胞周期时间的方法提高细胞凋亡来减少成骨细胞和骨细胞的数量。蛋白激酶C是细胞内信号传导通路的一种，与细胞凋亡有关已有相关文献报道。目的：探讨地塞米松诱导成骨细胞凋亡在蛋白激酶C细胞内信号转导途径方向的机制。方法：取胎鼠骨髓间充质干细胞进行成骨诱导，分为塞米松模型组、佛波醇组和星型胞菌素组。地塞米松模型组加入1×10-6 mol/L地塞米松，佛波醇组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7 mol/L佛波醇，星型胞菌素组加入1×10-6 mol/L地塞米松和1×10-7结果与结论：地塞米松可明显的诱导凋亡，加入佛波醇后凋亡明显增加，加入星形孢菌素后凋亡明显减少。加入地塞米松后胞浆的蛋白激酶C明显减少，包膜明显增加。加入地塞米松不同时间，胞浆和胞膜的蛋白激酶C变化在30 min明显。说明地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制与蛋白激酶C有关，地塞米松为蛋白激酶C激动剂。细胞受到刺激后，胞浆的蛋白激酶C转移至包膜，胞浆中的蛋白激酶C量减少，包膜中的增加。mol/L星型胞菌素，观察不同干预组细胞的增殖或抑制，并对细胞膜及细胞质中蛋白激酶C含量的变化进行检测。
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局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应
背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀，可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度，分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。
目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。
方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月，制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组，分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg，对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。
结果与结论：给药后1个月，Micro-CT扫描结果显示，辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建，改善骨骼微结构，可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。 -
低能体外冲击波和低剂量间歇甲状旁腺素干预成骨细胞的增殖和分化
背景：体外冲击波等应力刺激可促进成骨，甲状旁腺激素激素也参与调控骨代谢。
目的：实验探讨低剂量间歇人重组甲状旁腺素1-34和低能体外冲击波对体外培养大鼠成骨细胞增殖及成骨分化的作用。方法：采用改良胶原酶消化法培养大鼠乳鼠颅骨来源成骨细胞备用。分别用60-150次0.18 mJ/mm2低能体外冲击波刺激体外培养大鼠成骨细胞，不同浓度(10-12 mol/L-10-10 mol/L)及作用方式的人重组甲状旁腺素1-34刺激，以及低能体外冲击波和间歇低剂量(10-11 mol/L)间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激共同作用后，用锥虫蓝法进行细胞计数、MTT和流式细胞术分析检测大鼠成骨细胞的增殖情况；用酶标仪检测碱性磷酸酶活性，用免疫组化检测Ⅰ型胶原表达来观察大鼠成骨细胞的成骨分化。
结果与结论：60-150次0.18 mJ/mm 2低能体外冲击波刺激、间歇人重组甲状旁腺素1-34(10-11和10-10 mol/L)刺激以及低能体外冲击波+间歇人重组甲状旁腺素1-34(10-11 mol/L)刺激均可显著促进体外培养大鼠成骨细胞增殖和成骨分化(P<0.05)，其中60-150次低能体外冲击波刺激+间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激各组作用强(P <0.05)。结果证实，适当的低能体外冲击波应力刺激和低剂量间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激联合应用可显著促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖和成骨分化。 -
核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体的培养与分化
背景：以往的研究多采用长骨机械分离法获得破骨细胞，破骨细胞为终末分化细胞，无法进一步增殖和传代。因此目前常用骨髓细胞诱导培养法和RAW264.7细胞诱导培养法获得大量的破骨细胞以满足实验需要。
目的：探讨细胞核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞前体细胞分化为成熟破骨细胞的佳方法。
方法：分离小鼠骨髓细胞后添加核因子κB 受体活化因子配体与巨噬细胞集落刺激因子共同诱导或者取RAW264.7细胞单独加入核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞的形成；分别给予不同浓度的核因子κB受体活化因子配体，观察生成破骨细胞的数量，评价核因子κB受体活化因子配体与破骨细胞生成的量效关系；采用膜联蛋白V-FITC联合PI染色进行流式细胞术分析破骨细胞形成过程中单核巨噬细胞的凋亡情况。
结果与结论：当核因子κB受体活化因子配体浓度为10μg/L时，破骨细胞形成数量多的时间点在第六至七天；而核因子κB受体活化因子配体浓度为100μg/L时，高峰期出现在第四至五天。破骨细胞的形成数量随着核因子κB受体活化因子配体刺激浓度升高而增加，呈浓度依赖性，50μg/L的核因子κB受体活化因子配体是破骨细胞形成数量与浓度关系曲线的转折点，高于150μg/L以后破骨细胞形成数量的增幅明显放缓。核因子κB受体活化因子配体即能诱导单核巨噬细胞形成破骨细胞又可以促进其凋亡，通过破骨细胞计数比较发现在同一浓度(104/cm2)接种单核巨噬细胞后以30μg/L的核因子κB受体活化因子配体诱导后，平均每单位核因子κB受体活化因子配体所获得的破骨细胞数量多。提示骨髓细胞或RAW264.7细胞诱导破骨细胞的培养方法皆简单可行，细胞接种的佳浓度为104/cm2；核因子κB受体活化因子配体的适宜刺激浓度为30-50μg/L。 -
牵张应力介导细胞成骨分化及相关基因的表达
背景：ERK1/2信号通路和核因子κB信号通路是否参与了牵张应力作用下MC3T3-E1细胞成骨分化及相关基因表达的调控，尚不清楚。
目的：观察机械牵张应力对作用下ERK1/2和核因子κB通路对成骨细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、白细胞介素6表达的影响，探讨ERK1/2与核因子κB信号通路对成骨细胞分化的调控作用。
方法：体外培养的MC3T3-E1细胞，以ERK1/2通路特异性抑制剂PD098059及核因子κB通路抑制剂PDTC分别处理30 min后加载12%的拉伸应变率24 h，以正常细胞及单纯加载12%牵张应力24 h为对照。采用ELISA及Real-time PCR方法检测细胞加载前后碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白及白细胞介素6 mRNA的表达。
结果与结论：在12%牵张应力作用下，MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、白细胞介素6的表达受ERK1/2信号通路的调控，而骨钙蛋白基因表达的变化不受 ERK1/2通路的影响。核因子κB 信号通路抑制剂 PDTC可显著抑制机械牵应张力作用下MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性的降低，同时抑制白细胞介素6基因的表达，而Ⅰ型胶原、骨钙蛋白基因表达的变化不受核因子κB信号通路的影响。结果表明牵张应力可以通过ERK1/2和核因子κB通路影响MC3T3-E1细胞的成骨分化及相关基因表达。 -
间歇性负压干预前交叉韧带重建后的腱-骨愈合
背景：间歇性负压被证实可以促进软组织修复及骨愈合，但其对交叉韧带重建后腱-骨愈合的影响尚未见报道。
目的：观察间歇性负压对兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合及肌腱移植物生物力学的影响。
方法：取24只新西兰大白兔制备自体半腱肌前交叉韧带重建模型，随机取一侧后腿作为负压侧，负压侧关节通过引流管接微型负压吸引器，并维持低强度、间歇性负压；对侧后腿作为对照，接普通引流管。5d后两侧同时拔除吸引管。造模后6周，取关节液检测白细胞介素1β的表达水平；取股骨-韧带-胫骨复合体行肌腱移植物拉力测定和腱-骨界面组织学观察。
结果与结论：1只兔关节感染，终23只兔进入结果分析。拉力测定结果显示，负压组完全断裂所需拉力显著大于对照组(P<0.05)。组织学观察结果发现，负压组成骨细胞数目显著多于对照组，差异有显著性意义(P <0.01)。关节液检测结果提示负压组关节滑液中白细胞介素1β含量低于对照组，差异有显著性意义(P <0.01)。提示间歇性负压可能在前交叉韧带重建后腱-骨愈合、肌腱移植物的塑性过程中扮演着积极作用。 -
二次骨折风险评价：老年女性髋部骨折后6-12个月骨密度及骨代谢变化
背景：国内外文献中关于骨折后骨代谢指标及骨密度变化量的前瞻性研究在20世纪60年代就开始有文献报道，但主要集中于胫腓骨和踝关节骨折患者，且样本量较低。
目的：观察老年女性髋部骨折愈合后(伤后6-12个月)骨密度及骨代谢指标的变化情况，并分析其相关性。
方法：选择2011年5月至2013年7月北京航天总医院骨科收治的老年女性髋部骨折患者48例，制定随访标准进行L1-4、患侧、健侧髋部骨密度测量及骨代谢指标骨碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C末端肽、血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平测定，并行骨折愈合后患侧全髋部骨密度与血清骨代谢指标的多元线性回归分析。
结果与结论：患者骨折愈合后，患髋及腰椎骨密度显著低于基线值，健髋部位骨密度与基线值差异无显著性意义。患者在伤后6个月，即骨折完全愈合时，骨代谢指标骨碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C末端肽、血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平均显著高于基线值(P<0.05)。患者在伤后12个月，即骨折完全愈合6个月，骨钙素水平显著高于基线值，其余骨代谢指标与基线值差异无显著性意义。骨折达到临床及影像学愈合后，血清骨钙素水平的改变量与患髋骨密度改变量的偏回归系数大。提示骨折达到临床愈合后，骨钙素血清水平对于评估骨密度回升速度具有较高价值。骨折愈合后监测相应的骨代谢指标可以提高判断骨密度变化的准确性，以降低罹患二次骨折的风险。 -
可塑形脱矿骨基质/透明质酸骨泥的制备与细胞相容性
背景：应用预制成形的材料修复不规则骨缺损时，常出现材料与骨缺损形状不匹配的问题，制备可任意塑形骨泥对促进不规则骨缺损的愈合具有重要意义。
目的：构建可塑形脱钙骨基质/透明质酸骨泥，筛选佳复合比例并评价其细胞相容性。
方法：选取合格供体皮质骨制备脱钙骨基质。分别配置浓度为0.75%，1.5%，3%，4.5%的透明质酸溶液并检测其黏度，以450 mg脱钙骨基质与上述各浓度透明质酸溶液1 mL混合，制备不同比例的脱钙骨基质/透明质酸骨泥。37℃条件下将骨泥浸泡在PBS平衡液中，观察其离散时间，筛选佳复合比例的脱钙骨基质/透明质酸骨泥。应用脱钙骨基质/透明质酸骨泥浸提液培养L-929小鼠成纤维细胞，1，4，7 d采用CCK-8法检测骨泥的细胞毒性。
结果与结论：随透明质酸浓度的增加其溶液黏度增大，脱钙骨基质/透明质酸骨泥的离散时间延长，3%浓度的透明质酸与450 mg脱钙骨基质复合制备的骨泥具有良好可塑形能力，离散时间为8 h，为佳复合比例。脱钙骨基质/透明质酸骨泥浸提液培养L-929小鼠成纤维细胞1，4，7 d的细胞增殖率分别为93.72%，101.65%，97.68%，细胞毒性级别为0或1级。表明脱钙骨基质/透明质酸复合质量比为15∶1制备的骨泥具有良好的可塑形能力及抗离散能力，细胞毒性轻微。
