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氟对大鼠骨组织Osterix mRNA及其蛋白表达影响
目的 观察氟对大鼠股骨中成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)MRNA及其蛋白表达的影响.方法 36只SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组(饮水含氟50mg/L)、高氟组(饮水含氟5mg/L),饲养6个月后股动脉放血处死.用免疫组织化学法检测各组大鼠股骨组织中OSX蛋白表达;实时荧光定量PCR检测OSX mRNA表达.结果 高氟组大鼠OSX阳性成骨细胞数[(51.47±3.37)个]增多,明显高于低氟组[(36.80±2.83)个]和对照组[(27.00±2.92)个],差异有统计学意义(P<0.05);低氟组OSX mRNA是对照组的2.10倍,高氟组OSX mRNA是对照组的2.82倍,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 氟可导致大鼠骨组织OSX mRNA及蛋白表达水平增高,OSX可能参与氟引起的骨骼损伤的发生机制.
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2型糖尿病大鼠骨痂内Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合
背景：研究表明Osx、Dlx5等基因的表达水平与骨折愈合障碍可能存在一定关系。目的：分析2型糖尿病大鼠牵引骨痂中Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合障碍的关系。方法：选择8周龄SD大鼠32只，随机分为2组，实验组(18只)高糖高脂饲料喂养8周，链脲佐菌素腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型；对照组喂普通大鼠饲料予以同样剂量柠檬酸腹腔注射。2组大鼠同时建立骨折牵引模型，定期延长外固定架，牵引模型建立后15 d处死大鼠并收集血液标本检测生化指标，X射线观察骨痂生长情况，取左胫骨骨痂组织进行组织学观察，检测骨痂组织中Dlx5、Osx蛋白及相关基因的表达。结果与结论：X射线摄片结果：实验组牵引骨痂较对照组明显减少，骨痂组织苏木精-伊红染色显示：实验组较对照组的微骨柱明显减少；初始基质前沿浅染。而骨痂的组织学定量分析则显示：实验组新生骨痂的形成面积较对照组减少而骨折近端脂肪细胞数量增多(P <0.01)。QPCR检测则显示：实验组较对照组骨痂组织中Osx表达降低(P <0.05)，Dlx5表达降低(P <0.05)。结果提示，2型糖尿病大鼠骨折愈合较正常大鼠明显减慢，可能与2型糖尿病Osx、Dlx5表达降低具有相关性。
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成骨细胞分化、骨形成与修复中转录因子Osx和Satb2的调控作用
背景：成骨细胞主要来自于骨髓细胞向骨基质中的间充质细胞，一些转录因子或局部因素可促进骨髓基质细胞调节分化为成骨细胞。
目的：明确C2C12细胞以及Osx与Satb2在骨质疏松修复过程中的作用。
方法：取野生型SD大鼠20只，分为正常组10只，假手术组和骨质疏松模型组(模型组)各5只，同时取Osx-KO大鼠10只。模型组和Osx-KO大鼠切除双侧卵巢构建野生型大鼠与Osx-KO大鼠进行骨质疏松模型；假手术组找出双侧卵巢但不切除。检测各组大鼠术后体质量的变化及股骨骨密度含量。体外培养C2C12细胞，并设计了siRNA-Satb2、siRNA-Osx，通过细胞实验、基因沉默、western blot法，观察成骨细胞分化的相关Osx与Satb2的表达及对骨质疏松的影响。
结果与结论：①体质量：造模12周后，模型组、Osx-KO组大鼠较正常组和假手术组大鼠显著增加(P <0.01)。②骨密度：模型组、Osx-KO组较正常组和假手术组显著降低(P <0.01)。③转录因子：野生型大鼠各因子均有表达，在Osx-KO大鼠中，Satb2、Osx基因的表达显著降低(P <0.001)，而Runx2基因在两种类型的大鼠中的表达差异无显著性意义。④当对基因进行沉默后：再检测相关的成骨基因发现Satb2、Osx、Runx2、ALP 基因的表达水平均有显著的抑制。⑤结果说明：在骨质疏松发病中转录因子Osx、Satb2可能是保护性分子，对成骨细胞分化、骨形成与修复有着关键的调控作用。 -
Osterix通过上调LOX的表达促进人乳腺癌细胞的迁移和侵袭
目的:探讨Ostefix(Osx)对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制.方法:采用荧光实时定量PCR (Real-time PCR)及Western blot技术检测Osx过表达及敲低稳转细胞(231-OE6、231-OEC、231-KD2、231-KDC)中赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)的表达水平;转染LOX siRNA及其对照至Osx过表达稳转细胞(231-OE6)中,Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力;同时转染LOX过表达质粒及其对照至Osx敲低稳转细胞(231-KD2)中,Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力.结果:与各自对照相比,LOX在231-OE6中表达显著升高,在231-KD2中表达显著降低(P＜0.05);降低LOX的表达能够显著削弱231-OE6细胞的迁移和侵袭能力,增加LOX的表达能够显著提高23 I-KD2细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在乳腺癌细胞中Osx能够上调LOX的表达,且Osx通过上调LOX的表达而促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭.
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miR-125b调控Runx2/Osx表达对骨髓间充质干细胞成骨机制的影响
目的 分析miR-125b调控成骨细胞特异性转录因子Runx2/Osx表达对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨机制的影响.方法 40只雌性大鼠随机分为对照组、骨折模型组、骨折模拟物组、骨折抑制剂组各10只,建立大鼠股骨干闭合骨折模型(对照组除外),造模后分离培养BMSCs,7 d后骨折模拟物组转染miRNA-125b模拟物(mimic),骨折抑制剂组转染miRNA-125b抑制剂(inhibitor),观察BMSCs形态学、表达及增殖情况,应用Western blot法检测成骨基因[骨钙素(OCN)骨桥蛋白(OPN)、Osx、Runx2蛋白]、成脂基因[过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)]的表达.结果 qPCR显示miR-125b在骨折模型BMSCs中表达上调[(1.48±0.18)vs(0.95±0.12),P<0.05];转染7 d时,骨折抑制剂组细胞质出现红染脂滴细胞,骨折模拟物组在第14天时出现一定脂肪细胞形态特征.骨折模拟物组Runx2、OCN、Osx分别为(0.20±0.03)、(0.45±0.05)、(0.34±0.04),均低于其他3组,而PPARγ(0.51±0.05)高于其他3组,骨折模拟物组OPN(0.52±0.06)低于骨折抑制剂组(0.88±0.02),差异有统计学意义(P<0.05),而与对照组、骨折模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-125b可通过调控Runx2/Osx而负性调节OCN表达,正性调节PPARγ、OPN的表达,从而调控BMSCs成骨能力.
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力学环境对骨折早期骨折端间充质干细胞分化的影响及相关机制
目的 探究骨折早期力学环境对大鼠骨折端间充质干细胞(MSCs)成骨及成软骨分化的影响.方法 建立大鼠股骨骨折模型,以不同刚度系数的外固定架予以固定,分为对照组、高刚度外固定架组和低刚度外固定架组.术后当天和2周拍摄X线片,术后6周取患侧股骨,予以组织病理学检查.于术后2、6、10、14 d取骨痂组织,RT-qPCR检测Runx2、Osterix(OSX)及Sox9转录表达水平,Western blot检测Runx2、Sox9蛋白的表达.结果 X线检查显示,术后2周,低刚度组骨痂量明显多于高刚度组;组织学检查显示,术后6周,对照组、高刚度组骨痂较少,有大量活跃的骨细胞,低刚度组骨折端软骨链接,在与正常骨组织接触处形成了软骨成骨的骨痂组织.RT-qPCR结果显示,随着时间增加,三组Runx2、OSX mRNA表达水平均有增加趋势.Sox9 mRNA表达水平,对照组和高刚度组10 d内呈增加趋势,14 d时有所下降,低刚度组则14 d内一直增加.同一时间点Runx2、OSX及Sox9的表达水平均表现为低刚度组>高刚度组>对照组(P<0.05);Western blot结果与RT-qPCR结果相一致.结论 力学环境会影响骨折区MSCs成骨及成软骨分化,微动可促进骨折愈合.
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Osx 基因活化技术促进种植体周围骨再生的实验研究
目的：观察Osx基因活化技术对种植体周围骨形成和矿化的作用。方法首先将倍骼生与pcDNA 3．1 flag-Osx按比例混合构建GAM材料。选择雄性Beagle犬15只，每只动物拔除左侧及右侧下颌第2前磨牙，用超声骨刀于拔牙创颊侧制备颊舌向5 mm、近远中向5 mm、垂直高度10 mm的骨缺损，分别植入直径3．3 mm、长度13 mm的奥齿泰GSII种植体2颗。2个骨缺损处分别填入倍骼生＋空载体pcDNA3．1flag （ A组）、倍骼生＋pcDNA 3．1flag-Osx（ B组）。应用GBR技术在材料表面覆盖Bio-gide胶原膜，缝合牙龈。分别于术后4、8、12周处死动物5只，取出标本，用Micro CT测量骨再生相关数据。结果 A、B两组术后4、8、12周比较，骨小梁间隙、骨体积分数、骨小梁的体积、骨小梁厚度差异均有统计学意义（P均＜0．05）。结论倍骼生与Osx质粒构成的基因活化材料有明显的骨诱导作用，可促进骨组织再生。
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骨髓基质干细胞复合Osx基因活化材料促进种植体周围骨再生的实验研究
目的：建立Beagle犬的种植体周围骨缺损模型，构建含有质粒pcDNA3．1 flag-Osx的基因活化基质，并与自体骨髓基质干细胞混合，观察Osx基因活化技术对种植体周围骨的形成和矿化的作用。方法：术前抽取Bea-gle犬骨髓，培养骨髓基质干细胞，扩增质粒pcDNA3．1 flag-Osx。雄性Beagle犬15只，随机分为3个组，每组5只，第1组为4周组，第2组为8周组，第3组为12周组。每只动物拔除左侧下颌第2、4前磨牙及右侧第2前磨牙，于拔牙创颊侧制备骨缺损，植入奥齿泰GSII种植体3枚，分别填入A组：倍骼生； B组：倍骼生+BMSCs+空载体pcDNA3.1flag； C组：倍骼生+BMSCs+pcDNA3.1flag-Osx。应用GBR技术，在材料表面覆盖Bio-gide胶原膜。分别于4、8、12周后处死动物，取出标本，应用影像学、组织学、组织形态计量学等手段与对照组比较。各指标用均数±标准差（X±s）来表示。应用统计软件SPSS17.0进行单因素的方差分析。 P<0.05为差异有统计学意义。结果：1、硬组织观察：骨缺损处均有新骨形成。 C组多， B组其次， A组少。2、 Micro-CT数据结果显示：第1组：除骨体积分数（BVF）外，其余指标B组与A组均有显著差异（P<0.05）。骨小梁间隙（Tb.Sp.）、骨小梁数目(Tb.N)、 BVF、骨小梁的体积(BV) C组与B组间差异有显著性（P<0.05）。各指标C组与A组间差异均有显著性（P<0.05）。第2组：除BVF外，其余指标B组与A组均有显著差异（P<0.05）。 Tb.Sp.、骨小梁厚度(Tb.Th)、 Tb.N.、 BV C组与B组间差异有显著性。各指标C组与A组间差异均有显著性（P<0.05）。第3组：各指标B组与A组均有显著差异（P<0.05）。除BVF外其余指标C组与B组间差异有显著性（P<0.05）。各指标C组与A组间差异均有显著性（P<0.05）。结论：骨髓基质干细胞与Osx质粒构成的基因活化材料，有明显的骨诱导作用，与不含Osx基质的对照组相比成骨速度更快，新生骨量更多，明显促进了骨组织再生。
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Runx2和 Osx 在修复性牙本质形成过程中的表达模式
目的：观察 Runx2和 Osx 在牙髓损伤后表达模式的变化。方法：取雄性 SD 大鼠24只随机抽取4只不作任何处理，用于正常对照；其余20只分别以双侧下颌第一磨牙为对象建立牙髓损伤模型。分别于建模后0、3、12 h 和3、7 d 各时间点从牙髓损伤组中各随机抽取4只大鼠，并取其双侧下颌第一磨牙标本制作组织切片；然后采用 HE 染色法观察各组修复性牙本质的形成情况，并采用免疫荧光染色法检测 Runx2、Osx、DSPP 的表达模式。结果：HE 染色显示，损伤后7 d，在损伤下方可见明显的修复性牙本质形成。免疫荧光染色显示，Runx2、Osx 和 DSPP 主要表达于损伤下方，其中 Runx2的表达呈“抛物线”趋势，即损伤后3 d 时表达为强烈（P ＜0．05），此后逐渐下降；Osx 和 DSPP 的表达均呈逐渐上调的趋势，Osx 的表达在损伤后7 d 时上调为明显（P ＜0．05），而 DSPP 的表达则在损伤后3 d 时即显著增强并持续至损伤后7 d（P ＜0．05）。结论：Runx2、Osx 和 DSPP 在牙髓损伤后的不同时期具有不同的表达模式。
