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下调miR-125b逆转白血病细胞对多柔比星的耐药作用
目的:探讨下调miR-125b是否能逆转人白血病多柔比星耐药细胞株的耐药性,为白血病耐药患者寻找新的治疗方法.方法:应用实时荧光定量PCR方法检测白血病非耐药细胞株HL-60和K562及对应多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达情况;采用电穿孔转染法上调或者抑制HL-60/DOX细胞中miR-125b的表达水平,随后采用CCK-8法检测不同浓度多柔比星处理后细胞的存活情况,绘制细胞增殖抑制率曲线并计算半数抑制浓度(IC50).结果:与非耐药细胞株HL-60和K562相比,耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达水平明显升高.miR-125b在HL-60/DOX细胞中的表达水平比HL-60细胞中高15倍,其在K562/DOX细胞中的表达水平比K562细胞中高5倍.在耐药细胞系HL-60/DOX中过表达或抑制miR-125b的表达发现,转染miR-125b模拟物的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著降低(P＜0.01),而转染miR-125b抑制剂的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著升高(P＜0.01).结论:miR-125b在白血病多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中高表达.下调miR-125b的表达可逆转HL-60/DOX细胞对多柔比星的耐药性.
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MiR-125b对心肌梗死后成纤维细胞的调控机制研究
目的 探讨微小核糖核酸125b(miR-125b)对成人心脏成纤维细胞(HCF-a)合成胶原、增殖、活化、迁移、凋亡的调控作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)通路的影响.方法 体外培养HCF-a细胞,分为空白对照组和miR-125b模拟物转染组.采用RT-PCR和Western blot法检测胶原-Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白表达情况;采用MTT法检测HCF-a细胞增殖情况;采用Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照组相比,miR-125b过表达可明显上调Col-Ⅰ和Col-Ⅲ、α-SMA mRNA和蛋白的表达,促进细胞增殖、迁移和凋亡(P<0.05).另外,经RT-PCR检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达可明显促进TGF-β1 mRNA的表达水平(P<0.05);经Western blot检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达对HCF-a细胞Smad2/Smad3蛋白磷酸化水平均有明显上调作用(P<0.05).结论MiR-125b可以通过调控TGF-β1/Smad通路参与心肌纤维化进程.
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miR-125b靶基因鉴定及对卵巢癌细胞增殖 和凋亡能力影响实验研究
目的 既往研究结果显示,HER2基因在卵巢癌组织中存在着过表达,且在卵巢癌细胞系中,沉默HER2基因后,能显著降低卵巢癌细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.本研究拟探讨靶向HER2的miR-125b对卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响.方法 分别采用miRbase、miRanda和targetscan 3个数据库进行miR-125的靶基因预测,对获得的靶基因分别进行GO注释描述、GO富集分析和Pathway分析;pre-miR-125b转染卵巢癌细胞系,通过荧光定量PCR验证;同时构建含HER2的3′UTR野生型和突变型荧光素酶载体,分别和pre-miR-125b及control miR共转染SKOV-3细胞,应用荧光素酶报告系统检测HER2是否是miR-125b的靶基因;蛋白质印迹法检测转染后HER2的表达水平变化;采用MTT法检测SKOV-3细胞的增殖率变化,AnnexinⅤ方法检测SKOV-3细胞凋亡率的变化.结果 生物信息学方法分析显示,miR-125b与HER2的3′UTR区域存在可能的结合位点.pre-miR-125b转染组miR-125b的表达(5.48±1.169)较对照组(1.35±0.391)明显升高,差异有统计学意义,t=5.811,P=0.018;荧光素酶报告基因实验结果显示,pre-miR-125b能明显降低Wt-HER2的荧光素酶活性,与其他各组相比,差异有统计学意义,P<0.01;HER2是miR-125b的预测靶位点.蛋白质印迹结果显示,转染pre-miR-125b组HER2的表达水平(0.292±0.059)较对照组(0.799±0.101)明显下降,差异有统计学意义,t=7.485,P=0.002;转染48 h后,对照组和实验组的细胞存活率分别为0.35±0.013和0.21±0.025,差异有统计学意义,t=8.63,P=0.001;转染72 h后,对照组和实验组的细胞存活率分别为0.58±0.020和0.32±0.028,差异有统计学意义,t=13.062,P<0.001.说明上调miR-125b后可抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖能力.在转染后,实验组凋亡率〔(11.47±1.16)％〕较对照组〔(4.73±1.14)％〕明显增加,差异有统计学意义,t=7.168,P=0.002.结论 miR-125b能通过下调HER2基因的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,参与卵巢癌的生物学功能.
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miR-125b对结肠癌SW480细胞侵袭潜能影响及机制探讨
目的 结肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,microRNA与其发生发展密切相关,且在结肠癌中的作用机制仍不清楚.本研究旨在探讨miR-125b对结肠癌SW480细胞侵袭的影响及机制,为阐明结肠癌发病机制提供理论依据.方法 将miR-125b导入结肠癌SW480细胞,观察miR-125b高表达对SW480细胞侵袭的影响.Targetscan 6.2及荧光素酶报告基因进行miR-125b对MCL1基因的靶向性分析;构建MCL1干扰载体,观察干扰MCL1表达对SW480细胞侵袭的影响.结果 miR-125b在SW480细胞中高表达后,细胞的侵袭率降低(miR-125b vs miR-ctr为85±12 vs 214±36;t=21.254,P=0.0054),细胞凋亡率增加,而Cleaved Caspase-3与Cleaved PARP蛋白质表达增加;miR-125b与MCL1基因启动子区域3′UTR的2613~2620位核苷酸位点结合;miR-125b在SW480细胞中高表达后MCL1蛋白表达降低;MCL1低表达后SW480细胞侵袭率降低(si-MCL1 vs si-ctr为108±16 vs 225±42;t=19.542,P=0.0068),细胞凋亡率增加,而Cleaved Caspase-3与Cleaved PARP蛋白质的表达增加.结论 miR-125b通过靶向抑制SW480细胞中MCL1基因表达,激活Caspase-3信号转导通路,使SW480细胞侵袭能力降低.
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miR-23a和miR-125b在进展期结直肠癌中表达水平的研究
目的 分析miR-23a和miR-125b作为结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)诊断标记的潜能,并分析肿瘤分期对miR-23a和miR-125b表达水平的影响.方法 采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析miR-23a在CRC患者肿瘤和瘤旁组织之间的表达谱,并分别分析miR-23a和miR-125b在II、III期CRC中的表达水平.结果 miR-23a和miR-125b在II、III期CRC患者及混合样本中的均为下调表达,且miR-125b在三组结直肠中下调表达均具有统计学意义(P<0.05).结论 miR-23a和miR-125b具有作为结直肠癌诊断标记的潜能,但肿瘤分期对miR-23a和miR-125b的表达水平不一定具有明显影响.
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miR-125b通过靶向结合ETV6调控Hs578T的侵袭转移
目的 研究miR-125b在乳腺癌中的表达,尤其是其对乳腺癌迁移侵袭的作用以及该过程所涉及的分子机制.方法 ①用实时荧光定量PCR检测23对临床组织样本中miR-125b及靶基因ETV6的表达水平;②用实时荧光定量PCR、双荧光报告验证靶基因;③在细胞中瞬时转染miR-125b mimics,并用划痕、transwell迁移、侵袭及Western blot检测体外乳腺癌细胞的迁移侵袭能力及上皮间质转化的变化;④用靶基因敲减实验进一步验证靶基因的准确性.结果 ①与正常组织相比,乳腺癌组织中miR-125b的表达显著降低(P ＜0.001),ETV6的表达显著增高(P＜0.05);②ETV6为miR-125b的靶基因;③与对照相比,上调的miR-125b可显著抑制Hs578T的迁移和侵袭(P＜0.001),并抑制EMT的发生;④敲减ETV6对Hs578T的作用与miR-125b过表达一致.结论 miR-125b在乳腺癌中低表达,miR-125b通过靶向结合ETV6 3'UTR抑制该基因的表达,从而抑制Hs578T的迁移、侵袭及上皮间质转化的发生.因此,miR-125b可作为抑癌基因发挥作用.
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结节性甲状腺肿合并桥本甲状腺炎女性患者微小RNA-125b及其靶蛋白的表达
对2015年6月至2016年8月期间手术治疗的11例单纯结节性甲状腺肿(NG)女性患者(NG组)、13例NG合并桥本甲状腺炎(HT)女性患者(NG+ HT组)的甲状腺结节组织、结节旁正常组织及血清行微小RNA(miR)-125b表达的检测,甲状腺结节组织、结节旁正常组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的检测,以同期17例初诊为HT但无结节的女性患者(HT组)和20例健康女性(健康对照组)血清为对照.miR-125b检测采用实时定量-PCR的方法;TNF-α蛋白水平检测采用Western blot方法.miR-125b在NG+ HT组患者的甲状腺结节组织中表达水平下调,是NG组的0.55倍(分别用结节旁甲状腺组织做校正),差异有统计学意义(=2.873,P＜0.01);在血清中miR-125b表达水平NG组、HT组和NG+ HT组分别是正常对照组的1.06、0.92和0.79倍,健康对照组及NG组与NG+ HT组比较差异有统计学意义(q=4.350、4.717,均P＜0.01);TNF-α水平在NG+ HT患者甲状腺组织中表达明显高于NG患者.提示miR-125b在NG合并HT患者甲状腺结节组织及血清中表达下调.
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人子宫内膜细胞中miRNAs的表达及功能分析
目的：探索微小RNAs（miRNAs，miR）-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜中的表达及功能。方法收集自然周期患者（增殖期和分泌期）和促排卵周期患者（高孕组和非高孕组）的子宫内膜标本，体外分离培养子宫内膜上皮细胞和间质细胞，并用免疫荧光验证。实时定量PCR检测miR-125b、miR-30b和miR-424的表达。结果增殖期，间质细胞中miR-125b、miR-30b和miR-424的表达高于上皮细胞；分泌期，间质细胞中miR-125b和miR-424的表达仍高于上皮细胞，而miR-30b的表达低于上皮细胞。上皮细胞中，分泌期miR-125b、miR-30b和miR-424的表达显著高于增殖期，而间质细胞中3种miRNAs的表达差异无统计学意义。HCG日高孕组上皮细胞中miR-125b的表达高于非高孕组，间质细胞中miR-30b的表达高于非高孕组。miR-125b、miR-30b和miR-424的靶基因功能分析发现，其涉及的生物过程主要有细胞迁移、运动、细胞间黏附连接等，主要富集的信号通路包括胰岛素信号通路、VEGF信号通路、MAPK信号通路、焦点黏附和Wnt信号通路。结论 miR-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜不同细胞类型、不同时期和HCG日高孕酮患者中的表达存在差异，可能参与子宫内膜容受性的调节。
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miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力
目的 研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响.方法 运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化.结果 与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P＜0.01).双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性.过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P＜0.01).结论 miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力.
关键词： miR-125b STAT3 侵袭 迁移 人胃癌SGC-7901细胞 -
miR-125b在胶质瘤中的表达与预后的相关性研究
目的 探讨miR-125b在胶质瘤中的表达及其与预后的相关性,分析其作为胶质瘤预后判断指标的可能性.方法 采用荧光实时定量PCR方法检测miR-125b在不同级别胶质瘤及正常组织中的表达情况.建立受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下的面积(AUC)来评估miR-125b在胶质瘤组织和瘤旁正常组织中表达水平差异性.通过Kaplan-Meier法为高表达群体及低表达群体建立生存曲线,并用Log-rank检验评估两组生存曲线的差异.结果 miR-125b在胶质瘤组织中的表达水平显著高于正常组织,与胶质瘤的病理级别呈正相关.在生存分析中,miR-125b高表达水平的胶质瘤患者预后较差.结论 miR-125b是胶质瘤恶性程度的重要标志物,可做为胶质瘤级别分类及预后判断的生物学标记物.
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miR-125 b调控ART4蛋白对肝癌细胞增殖和侵袭的影响
目的:探讨miR-125b对ART4蛋白的调控作用及在肝癌细胞中对其增殖和侵袭能力的影响.方法:qPCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-125b的表达情况;过表达miR-125b后qPCR检测ART4的表达;双荧光素酶实验检测miR-125b和ART4的关系;MTT实验检测过表达miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-125b的过表达对肝癌细胞侵袭能力的影响;MTT实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞侵袭能力的影响.结果:miR-125b在肝癌细胞中表达水平较低,过表达miR-125b可以有效抑制ART4蛋白的表达;过表达miR-125b可以抑制肝癌细胞的增殖侵袭能力;过表达ART4后可以逆转肝癌细胞被miR-125b抑制的增殖侵袭能力.结论:miR-125b在肝癌中表达下调,同时miR-125b可以调控ART4的表达影响肝癌细胞增殖和侵袭能力.
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miR-125b靶向Sema4C调控STAT3信号通路影响非霍奇金淋巴瘤的侵袭迁移
目的:研究miR-125b靶向Sema4C调控STAT3信号通路影响非霍奇金淋巴瘤的侵袭迁移.方法:运用QT-PCR法检测miR-125b在非霍奇金淋巴瘤组织和细胞株中的表达;运用免疫组化法检测Sema4C在正常淋巴组织和非霍奇金淋巴瘤组织中的表达;用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对Sema4C转录活性的影响;用Transwell小室侵袭实验和划痕实验检测miR-125b的表达对NK-92细胞侵袭能力的影响;用 Western blot法检测过表达miR-125b后NK-92细胞Sema4C的表达变化;Western blot法检测沉默Sema4C后NK-92细胞STAT3信号通路的蛋白表达水平变化.结果:与正常淋巴组织比较,miR-125b在非霍奇金淋巴瘤组织中表达明显降低[(0.48±0.05)% vs (1.59±0.38)%,P<0.05],Sema4C在非霍奇金淋巴瘤中表达较高[(1.36±0.25)% vs (0.34±0.08)%,P<0.05];过表达miR-125b后,NK-92细胞的侵袭和转移能力明显降低[(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%],Sema4C的表达水平下调[(84.26±6.94)% vs (15.61±4.68)%,P<0.05].沉默Sema4C后,NK-92细胞JAK和STAT3蛋白表达下调[(85.26±6.94)% vs (12.61±4.32)%,P<0.05];双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控Sema4C的转录活性.结论:在非霍奇金淋巴瘤组织和细胞株中,miR-125b可靶向Sema4C的表达,从而调控非霍奇金淋巴瘤细胞的侵袭和迁移能力.
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miR-125b对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响及相关机制
目的 探讨miR-125b对急性白血病(AL)细胞人早幼粒白血病细胞(HL)-60增殖与凋亡的影响及相关机制.方法 利用LipofectamineTM2000脂质体将miR-125b inhibitor,miR-125b NC转入白血病细胞HL60中,RT-PCR法检测miR-125b表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期变化,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin) A1,CyclinD1,Bax,Bcl-2蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平.结果 与miR-125b NC比较,miR-125b inhibitor组miR-125b inhibitor表达下调,细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,CyclinA1,Bcl-2及p-ERK表达下调,CyclinD1及Bax表达上调(均P＜0.01).结论 miR-125b inhibitor能显著抑制白血病细胞HL60增殖,诱导细胞凋亡,可能与下调ERK磷酸化水平有关.
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miRNA-125b在膀胱癌中的表达和意义
目的:探讨膀胱癌组织中miR-125b的表达在膀胱癌发生发展中的作用及其临床意义.方法:采用应用茎环RT-PCR的方法检测66例膀胱尿路上皮癌组织标本的miR-125b的表达,另有16例正常膀胱黏膜组织作对照,并结合临床病理资料进行统计学分析.结果:miR-125b在膀胱癌组织中的表达显著高于非肿瘤的正常膀胱黏膜组织(p＜0.05),miR-125b的水平还与表达水平与膀胱癌的组织学分级、肿瘤转移、术后复发均明显相关性(P＜0.05).结论:miR-125b在膀胱癌组织中表达量升高,且与组织学分级、肿瘤转移、术后复发相关,可能作为膀胱癌诊断和预后指标.
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卵巢癌血清相关miRNAs的筛选及其临床意义
背景与目的：卵巢癌预后较差，发现时通常是晚期，需找寻与卵巢癌发生、发展相关的诊治方法。该研究检测miRNA在上皮性卵巢癌患者术前外周血清及良性卵巢肿瘤患者外周血清中表达情况的差异，筛选差异有统计学意义的miRNA并分析其与上皮性卵巢癌患者临床病理特征、预后等的关系。方法：定制研究相关的48种miRNA表达谱芯片，通过TaqMan低密度微阵列芯片，筛选出有统计学意义的miRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)法验证筛选的miRNA在卵巢良、恶性肿瘤患者血清中的表达情况，选择具有统计学意义的miRNA行大样本验证并分析其与肿瘤分期、组织病理及预后等的关系。结果：通过TaqMan低密度微阵列芯片筛选和RTFQ-PCR验证，发现miR-125b在上皮性卵巢癌患者血清中的表达高于良性肿瘤患者(P=0.039)，miR-125b在早期患者中的表达量高于晚期患者(P=0.003)，术后无残余肿瘤患者表达量高于术后有残余肿瘤患者(P=0.013)。血清miR-125b高表达有利于卵巢癌患者无进展生存期(progression-free survival，PFS)延长(P=0.003)，但对总生存期(overall survival，OS)无明显影响(P=0.069)。结论：miR-125b在上皮性卵巢癌的发生、发展中起着关键作用，与患者预后相关，是预测卵巢癌复发的潜在基因，但在肿瘤不同期别的表达情况发生变化，在早期作用比较明显，在晚期或肿瘤残余较多的患者表达较不明显，其作用机制有待进一步研究。
关键词： 上皮性卵巢癌 miRNA表达谱芯片 miR-125b 预后 -
过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制
目的:探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制.方法:收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平.脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段(mimic)与无关序列(scramble mimic)转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组.流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响.结果:人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调(P＜0.05).HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上.转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组(0.53 ±0.06 vs 0.82 ±0.07、0.89 ±0.08,P＜0.01)、细胞凋亡率显著升高[(21.5±3.2)％ vs(14.2±2.3)％、(13.5±2.1)％,均P＜0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低(均P＜0.01),而总AKT表达无明显变化(均P＞0.05).结论:miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关.
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人脑胶质瘤中miR-125b和Gli1的表达及临床意义
目的 探讨miR-125b在胶质瘤中的表达及其与Gli1的关系.方法 收集不同病理级别胶质瘤标本25例,以荧光定量PCR方法检测miR-125b和Gli1的表达,分析miR-125b和Gli1表达水平与胶质瘤病理级别及预后的关系.结果 ①miR-125b在各级别胶质瘤[星形细胞瘤(0.754±0.085)、间变星形细胞瘤(0.545±0.075)和胶质母细胞瘤(0.340±0.056)]中的表达较正常脑组织(1.000)下调(均P＜0.05),miR-125b的表达水平与肿瘤的恶性程度呈负相关;②Gli1表达水平在胶质瘤中[星形细胞瘤(1.034±0.093)、间变星形细胞瘤(1.203±0.113)和胶质母细胞瘤(1.578±0.087)]较正常脑组织(1.000)略高,肿瘤的恶性程度与Gli1表达水平呈负相关,间变星形细胞瘤与胶质母细胞瘤比较,差异有统计学意义(P＜0.05);③miR-125b低表达和Gli1过表达与患者的预后呈负相关.结论 miR-125b低表达和Gli1过表达与恶性胶质瘤的发生、发展密切相关.
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非编码小RNA在肝癌发生中的作用及机制研究进展
MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸组成的小分子非编码RNA,主要在转录后水平通过促进靶基因mRNA的降解或抑制其翻译过程而发挥负调控作用.miRNA不但参与生命活动的一些基本过程,如细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞代谢等,而且与人类疾病,尤其与恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为一类新的癌基因及抑癌基因,在癌症的发生发展中起重要作用.近年,我们首次在肝癌染色体变异区内发现新的肝癌转移促进因子miR-151并阐明了其分子作用机制,即RhoGDIA是miR-151下游靶基因,介导了miR-151的促肝癌转移功能；miR-151与其宿主基因FAK协同作用,活化Rac,cdc42及Rho GTPase,进而促进肝癌细胞的迁移、侵袭与转移,为阻断肝癌转移提供了新的治疗靶点.研究发现多个用于肝癌诊断及转移、复发、预后预测的miRNA分子标志物,建立了肝癌诊断、转移、复发及预后的miRNA预测模型；鉴定miR-125b为肝癌侯选抑癌基因,主要通过抑制癌基因LIN28B发挥抑癌作用；发现miR-30d为肝癌转移促进基因,转移抑制基因GNAI2为其功能靶基因；另外,发现miRNA不仅与mRNA的3’非翻译区结合,而且能与基因家族的蛋白编码区结合从而调控基因表达,为研究miRNA在肿瘤中的调控机制提供了新的思路；采用实验方法论证了单个基因能同时被多个miRNA所调控,为建立miRNA与mRNA复杂的相互作用调控网络提供了良好的实验基础.
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miR-125 b对胶质瘤细胞侵袭能力影响的体内研究
目的：探讨体内miR-125 b表达对人脑胶质瘤细胞侵袭力的影响及其可能的机制。方法培养原代胶质瘤细胞，分别转染miR-125b mimics和miR-125b inhibitor 慢病毒载体，上调或下调细胞中miR-125b表达水平，种植乳鼠皮下，Transwell试验评价胶质瘤细胞侵袭能力的变化，Western Blot 验证侵袭相关基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及RECK和TIMP3蛋白的表达。结果转染miR-125b mimics能有效提高原代胶质瘤细胞中miR-125b的表达，miR-125b inhibitor 有效降低miR-125b 的表达；体内实验表明miR-125b mimics及inhibitor对胶质瘤侵袭能力无明显影响，不影响侵袭相关MMP-2、MMP-9及RECK、TIMP3蛋白的表达。结论体内miR-125b表达水平与原代胶质瘤细胞的侵袭能力无明显相关。
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稳定过表达miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响
目的:通过构建稳定表达miR-125b的真核表达载体以探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响.方法:构建重组质粒pSilencer 4.1-miR-125b并转染MCF-7细胞,通过G418筛选得到稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR-125b,并结合二维划痕愈伤实验、三维Transwell侵袭小室实验和集落形成实验考察过表达miR-125b对乳腺癌细胞系转移能力的影响.结果:成功获得了稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR-125b,其在二维和三维水平的迁移能力均明显强于MCF-7细胞,细胞新生克隆数较MCF-7亦有显著提高.结论:miR-125b可使乳腺癌细胞转移能力增强.
