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microRNA-30b在非小细胞肺癌中的表达及预后分析
目的 探讨微小RNA-30b(miRNA-30b)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况,并进一步分析miR-30b与NSCLC患者预后的相关性.方法 收集41例NSCLC患者的肿瘤组织及其正常组织(距离肿瘤组织＞5cm),采用real-time PCR法检测miR-30b的表达情况,并对预后进行分析.结果 肿瘤组织miR-30b的表达水平显著低于正常组织(P＜0.01);miR-30b的表达水平与临床分期、淋巴结转移及EGFR基因突变显著相关(P＜0.05).Kaplan-Meier分析显示肿瘤组织中miR-30b高表达组的生存时间明显高于低表达组(P＜0.05).结论 MiR-30b在NSCLC中的表达是下调的,可作为NSCLC预后的一个新的潜在标志物.
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骨髓微环境对多发性骨髓瘤细胞microRNA-21和microRNA-30b表达的影响
目的 研究骨髓微环境对多发性骨髓瘤(MM)细胞mieroRNA(miR)-21和miR-30b的调变作用.方法培养破骨细胞,采用MACS法分选纯化CD138*骨髓瘤细胞.采用实时定量PCR的方法检测MM患者瘤细胞和细胞株以及与破骨细胞共培养的MM患者瘤细胞miR-21和miR-30b的表达量.结果 MM患者的外周血单个核细胞经破骨细胞培养基培养后10～14 d形成破骨细胞,瘤细胞与破骨细胞共培养组和未与破骨细胞共培养组相比较,细胞活力明显增高,miR-21的表达量增高了1.3～5.9倍,miR-30b表达量降低27.5%～76.9%.在正常浆细胞、MM患者瘤细胞和MM细胞株,miR-21表达水平分别为1.9±0.8、6.5±4.9和35.1±36.2,而miR-30表达分别为13.6±1.8、7.2±6.3和4.5±1.9.结论骨髓微环境可调控miR-21和miR-30b的表达,miR-21起癌基因作用,而miR-30b起抑痛基因作用.
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miR-30b对结直肠癌细胞转移潜能的影响
目的：明确miR-30b对结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的影响。方法：RT-qPCR检测20对配对结直肠癌组织标本中miR-30b的表达；Transwell和划痕实验检测过表达和抑制miR-30b后结直肠癌细胞侵袭和迁移潜能的改变；应用生物信息学方法预测miR-30b的作用靶点；Western Blot及双荧光素酶报告基因实验验证过表达和抑制miR-30b后靶点Snail和EMT（epithelial mesenchymal transition）标志物的表达情况。结果：癌组织中miR-30b表达水平明显低于正常肠黏膜组织；Transwell及划痕实验结果显示过表达miR-30b后结直肠癌细胞的侵袭迁移能力降低，抑制miR-30b后侵袭迁移能力增强；生物信息学预测结果显示miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR，双荧光素酶检测结果进一步证实miR-30b能够作用于Snail 3'-UTR；Western Blot结果显示过表达miR-30b后Snail的表达下降，EMT标志物Vimentin表达下降和E-cadherin表达升高，而抑制miR-30b后结果相反。结论：miR-30b在结直肠癌中表达水平下降，并通过靶向Snail调节结直肠癌细胞的侵袭和迁移。
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过表达miR-30b对人胃癌细胞株SGC-7901和AGS生物学功能及其肿瘤形成的影响
目的 研究过表达miR-30b对人胃癌细胞株SGC-7901和AGS的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭等生物学功能的影响及对体内肿瘤形成的抑制作用.方法 SGC-7901和AGS细胞中转染miR-30b类似物和miR-对照后,qRT-PCR检测转染后细胞miR-30b的表达变化;Western blot检测eIF5A2蛋白的表达;CCK-8检测SGC-7901和AGS细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell实验检测细胞体外侵袭能力.转染miR-30b类似物和miR-对照的SGC-7901和AGS细胞,分别注射裸鼠体内,观察肿瘤的形成及肿瘤组织中eIF5A2蛋白的表达.结果 qRT-PCR结果表明miR-30b类似物组的相对表达量显著高于miR-对照组(P＜ 0.05);Western blot结果显示,miR-30b类似物组的eIF5A2蛋白表达降低;CCK-8实验表明miR-30b类似物组中细胞增殖受到抑制;流式细胞术显示miR-30b类似物组的细胞周期减慢,凋亡增加;在Transwell迁移实验中,miR-30b类似物组细胞侵袭能力明显低于miR-对照组(P＜0.05).细胞体内成瘤实验显示,miR-30b过表达抑制肿瘤的形成,肿瘤组织中eIF5A2蛋白表达降低.结论 miR-30b过表达抑制人胃癌细胞的增殖、侵袭和肿瘤的形成,降低eIF5A2蛋白的表达,为胃癌治疗提供了一个潜在的靶点.
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人子宫内膜细胞中miRNAs的表达及功能分析
目的：探索微小RNAs（miRNAs，miR）-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜中的表达及功能。方法收集自然周期患者（增殖期和分泌期）和促排卵周期患者（高孕组和非高孕组）的子宫内膜标本，体外分离培养子宫内膜上皮细胞和间质细胞，并用免疫荧光验证。实时定量PCR检测miR-125b、miR-30b和miR-424的表达。结果增殖期，间质细胞中miR-125b、miR-30b和miR-424的表达高于上皮细胞；分泌期，间质细胞中miR-125b和miR-424的表达仍高于上皮细胞，而miR-30b的表达低于上皮细胞。上皮细胞中，分泌期miR-125b、miR-30b和miR-424的表达显著高于增殖期，而间质细胞中3种miRNAs的表达差异无统计学意义。HCG日高孕组上皮细胞中miR-125b的表达高于非高孕组，间质细胞中miR-30b的表达高于非高孕组。miR-125b、miR-30b和miR-424的靶基因功能分析发现，其涉及的生物过程主要有细胞迁移、运动、细胞间黏附连接等，主要富集的信号通路包括胰岛素信号通路、VEGF信号通路、MAPK信号通路、焦点黏附和Wnt信号通路。结论 miR-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜不同细胞类型、不同时期和HCG日高孕酮患者中的表达存在差异，可能参与子宫内膜容受性的调节。
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miR-30b的生物学功能研究进展
微小RNA(miRNAs)是一类细胞内源性表达的小分子非编码RNA,在转录后调控基因表达中起着重要作用.近年来,在乳腺癌、肺癌和胃癌等多种肿瘤中发现miR-30b表达下调,研究表明miR-30b可通过抑制肿瘤细胞增殖和侵袭.对于miR-30b调控的靶基因及相关信号通路的深入研究,有助于阐明肿瘤发生发展的分子机制,并有望为临床肿瘤治疗提供新的靶点.本文就miR-30b的靶基因在肿瘤中的生物学作用作一综述.
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miR-30b/Snail调控糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT
目的:探讨miR-30b/Snail调控高糖诱导人源肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的可能机制,为糖尿病肾病(DN)间质纤维化的防治提供新的实验依据及思路.方法:通过生物信息学预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNA、Snail以及EMT相关蛋白的表达改变.结果:调控Snail的候选miRNAs共6个,分别是miR-30b-5p、miR-25-3p、miR-199a-5p、miR-128-3 p、miR-22-3p、miR-27-3p,其中miR-30b与Snail存在明显负相关,r2=0.77549;高糖诱导HK2细胞miR-30b表达下调,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-30b-5p可抑制HK2细胞Snail表达,同时上调E-cadherin表达,而Vimentin、α-SMA表达下调.结论:miR-30b/Snail参与调控高糖引起的肾小管上皮细胞EMT.
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miR-30b的组织特异性研究
目的:研究miR-30b的组织特异性,检测其在心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中的表达情况.方法:选取C57BL/6J雄性小鼠6只,用real-time PCR方法检测小鼠心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中miR-30b的表达量.结果:miR-30b在小鼠肝脏中表达量低,与肝相比,在心,脑,肾,脾和骨骼肌中的相对表达量分别为13.13±0.899,9.497±0.717,4.478±1.031,6.751±0.596,2.538±0.79.且与肝相比均具有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-30b在各组织中的表达存在差异,在心脏中的表达量高,提示miR-30b可能与心脏的发生发展密切相关,为深入探索miR-30b的功能奠定了基础.
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miR-30b在肺癌细胞HCC-827侵袭中的作用及相关通路研究
目的 研究miR-30b在肺癌细胞HCC-827侵袭中的作用及对相关通路的影响.方法 培养HCC-827细胞,并种植于6孔细胞培养板上,将miR-30b通过脂质体转染至HCC-827细胞中.48h后,逆转录PCR(RT-PCR)检测HCC-827细胞miR-30b的表达水平,Transwel侵袭实验检测HCC-827细胞的侵袭能力.Werstern blot方法 检测HCC-827细胞p-EGFR、p-AKT表达水平.结果 与未转染组、空载体组比较,转染miR-30b组细胞侵袭能力受到显著抑制,p-EGFR与p-AKT的表达水平(0.57±0.02、0.32±0.01)显著下降.结论 过表达miR-30b使HCC-827细胞的侵袭能力受到显著抑制,同时p-EGFR与p-AKT的表达水平降低,提示过表达miR-30b可能是通过EGFR/AKT通路抑制HCC-827肺癌细胞的侵袭能力.
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血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量对帕金森病的诊断效能
目的 评价血清miR-103a、 miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森病中的诊断效能.方法 采用RT-PCR法检测90例帕金森病患者(观察组)及24例健康人(对照组)外周血清中miR-103a、miR-30b、miR-29a.采用受试者工作曲线法观察血清miR-103a、miR-30b、miR-29a用于诊断帕金森病的效能.结果 观察组外周血清miR-103a、 miR-30b、miR-29a相对表达量分别为1.12±0.10、1.57±0.37、1.23±0.09,对照组分别为0.43±0.03、 0.97±0.07、0.51±0.04,观察组外周血清miR-103a、 miR-30b、miR-29a相对表达量均高于对照组,P均<0.05.外周血清miR-103a诊断帕金森病的AUC为0.816,选择0.715为诊断阈值时约登指数大,此时外周血清miR-103a诊断帕金森病的灵敏度为71.3%,特异度为83.9%.外周血清miR-30b诊断帕金森病的AUC为0.789,选择1.120为诊断阈值时约登指数大,此时外周血清miR-30b诊断帕金森病的灵敏度为70.5%,特异度为84.6%.外周血清miR-29a诊断帕金森病的AUC为0.756,选择1.001为诊断阈值时约登指数大,此时外周血清miR-29a诊断帕金森病的灵敏度为72.1%,特异度为80.8%.结论 帕金森病患者外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量升高.外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森疾病中的诊断效能好.
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miR-30b 在肾癌中的表达和临床意义
目的：通过检测 miR-30b 在肾癌组织及其配对癌旁正常组织中的表达水平,探讨其与临床病理特征之间的相关性,为进一步研究在肾癌发生、发展过程中 miR-30b 的作用奠定基础.方法从33例经手术切除的肾癌组织及其配对癌旁正常组织中分别提取各自的RNA,经逆转录得到 cDNA,使用 RT-qPCR检测两者 miR-30b 的表达水平,通过统计学软件进一步分析其表达量与患者临床病理特征的相关性.同时,通过检测 miR-30b 在不同肾癌细胞系的表达量,分析 miR-30b在正常细胞系和肾癌细胞系的表达差异.结果 miR-30b 在肾癌组织中的表达量明显高于配对的癌旁正常组织(P＜0.001),其中22例肾癌标本 miR-30b呈现高表达.肾癌组织中 miR-30b的表达水平与患者的年龄、性别、肾癌组织类型、TNM分期及 UICC/AJCC 临床分期均无显著相关性(P＞0.05).miR-30b在不同肾癌细胞系表达水平不同,但均高于正常组织细胞系(P＜0.05).结论肾癌组织中 miR-30b的表达明显上调,提示其可能与肾癌的发生、发展相关.
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异染色质相关蛋白1γ促进卵巢癌的进展并受微小RNA-30b的调控
目的:为了明确异染色质相关蛋白1γ(HP1γ)在卵巢癌中的作用,为卵巢癌的诊断和治疗提供新的策略.方法:RT-qPCR检测卵巢癌标本中HP1γ的表达量;cck8实验检测A2780,SKOV3细胞的增殖;RNA干扰技术来敲低A2780,SKOV3中HP1γ的表达.结果:HP1γ高表达于卵巢癌组织,其促进A2780,SKOV3细胞的增殖,Mir-30b抑制卵巢癌细胞的增殖.结论:HP1γ可以促进卵巢癌细胞的增殖和进展,且其受到Mir-30b的负向调控.
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耳蜗毛细胞miR-30b对Dynamin基因靶向调控的研究
目的 观察正常成年小鼠耳蜗毛细胞中miR-30b的表达,研究其对靶基因(Dynamin1,DNM1)的调控是否会影响内毛细胞中突触囊泡内吞关键蛋白Dynamin的表达.方法 取正常成年C57小鼠耳蜗基底膜行原位杂交,观察耳蜗毛细胞中miR-30b的表达分布;构建荧光素酶报告基因载体,转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确DNM1是否为miR-30b的靶基因;通过耳蜗圆窗显微注射过表达miR-30b的腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV),14 d后通过real time-PCR检测miR-30b和DNM1的mRNA表达,免疫印迹实验(Western blot)检测Dynamin蛋白表达.结果 miR-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞胞质和胞核均有表达;miR-30b可抑制DNM1载体的荧光表达(P＜0.05),而突变型DNM1载体的荧光表达无抑制作用;转染AAV-miR-30b后miR-30b的相对表达量增高,DNM1和Dynamin蛋白表达降低.结论 miR-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞均有表达;miR-30可以靶向下调DNM1基因从而抑制Dynamin蛋白表达.
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A549与A549/DDP细胞株中肺癌顺铂耐药相关microRNA的表达差异研究
目的：研究非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株 A549及顺铂(DDP)耐药株 A549/DDP miRNAs 表达的差异.方法：利用 microRNA 芯片检测 NSCLC 细胞株A549及耐药株 A549/DDP 中 miRNA 的表达差异性；采用实时荧光定量 PCR 验证结果；利用流式细胞仪检测转染 miRNA 的模拟物后细胞的凋亡，分析细胞凋亡情况.结果：microRNA 芯片结果显示,耐药株 A549/DDP 与亲本细胞系 A549比较存在多个表达差异的 miRNA,其中 miR-30b 表现出与众不同的特性,耐药组细胞中 miR-30b 的表达相对于药物敏感组显著低表达，表达趋势与芯片的检测结果一致；同时，可以发现，转染模拟物组对比转染 NC 组细胞的凋亡显著增加，P≤0.01，差异具有统计学意义.结论：A549/DDP 与 A549的 miRNA 的表达谱存在差异,miRNA 可能参与 NSCLC DDP 耐药,为进一步研究 miRNA 在 NSCLCDDP 耐药机制中的作用奠定基础.
