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miR-424负向调节人脂肪源间充质干细胞向成脂细胞分化
目的 研究miR-424对人脂肪源间充质干细胞(hAMSCs)向成脂分化的影响.方法 用real-time PCR检测hAMSCs成脂分化前后细胞内miR-424水平的变化.在脂质体介导下,用人工合成的miR-424模拟物转染hAMSCs提高细胞内miR-424的含量,随后对其进行成脂诱导.用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,用real-time PCR和Western blot检测成脂关键转录因子PPARγ及相关标记物mRNA的表达.结果 hAMSCs成脂分化后,miR-424表达下调.与对照组细胞相比,转染miR-424模拟物的实验组细胞中miR-424含量明显升高.成脂诱导第8天油红O染色结果显示,实验组脂滴形成显著少于对照组.PPARγ和成脂相关标记物的表达量也出现下调.结论 miR-424可负向调节hAMSCs向脂肪细胞分化.
关键词： miR-424 人脂肪源间充质干细胞 成脂分化 -
1型糖尿病患者外周血单个核细胞miR-146a、miR-150和miR-424的异常表达及临床意义
目的 探讨微小RNA(miR-150、miR-146a、miR-181a、miR-424、miR-142-3p)在T1DM患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况及临床意义.方法 应用实时荧光定量聚合酶反应检测69例T1DM患者、46例T2DM患者和56名健康对照者(NC) PBMCs miRNAs的表达水平.应用受试者工作特征(ROC)曲线评价有差异表达的miRNAs对T1DM的诊断价值,同时将其表达量与临床指标进行相关性分析.结果 与NC组和T2DM组比较,T1DM组PBMCs中miR-146a、miR-424、miR-150相对表达量降低(P＜0.05).T1DM组和NC组ROC曲线下面积(AUC)分别为(0.860±0.061)、(0.905±0.058)和(0.844±0.066);T1DM组和T2DM组AUC分别为(0.868±0.068)、(0.921±0.064)和(0.698±0.065);与GADAb抗体阴性者比较,miR-146a、miR-150、miR-424在GADAb抗体阳性的T1DM患者中进一步下降.结论 miR-146a、miR-150、miR-424在T1DM患者PBMCs中低表达,可能与自身免疫状态有关,有助于早期发现T1DM患者.
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miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响
目的 探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响.方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达.结果 miR-424在肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P<0.01).与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P<0.01),细胞活力下降(P<0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P<0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P<0.01).结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭.
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MicroRNA－424参与多种疾病发生发展的分子机制研究进展
近20余年大量研究发现miRs靶向mRNA，通过降解mRNA或抑制其翻译，控制细胞增殖、分化、凋亡等多种生理病理过程，参与个体发育和疾病的发生发展。近年研究发现miR?424是血管生成的重要调节因子，参与了多种疾病的发生发展过程，本文对miR?424在感染性疾病、血管性疾病、中枢神经系统疾病及生殖系统疾病等多种疾病中的表达变化、作用及机制进行了综述。
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人子宫内膜细胞中miRNAs的表达及功能分析
目的：探索微小RNAs（miRNAs，miR）-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜中的表达及功能。方法收集自然周期患者（增殖期和分泌期）和促排卵周期患者（高孕组和非高孕组）的子宫内膜标本，体外分离培养子宫内膜上皮细胞和间质细胞，并用免疫荧光验证。实时定量PCR检测miR-125b、miR-30b和miR-424的表达。结果增殖期，间质细胞中miR-125b、miR-30b和miR-424的表达高于上皮细胞；分泌期，间质细胞中miR-125b和miR-424的表达仍高于上皮细胞，而miR-30b的表达低于上皮细胞。上皮细胞中，分泌期miR-125b、miR-30b和miR-424的表达显著高于增殖期，而间质细胞中3种miRNAs的表达差异无统计学意义。HCG日高孕组上皮细胞中miR-125b的表达高于非高孕组，间质细胞中miR-30b的表达高于非高孕组。miR-125b、miR-30b和miR-424的靶基因功能分析发现，其涉及的生物过程主要有细胞迁移、运动、细胞间黏附连接等，主要富集的信号通路包括胰岛素信号通路、VEGF信号通路、MAPK信号通路、焦点黏附和Wnt信号通路。结论 miR-125b、miR-30b和miR-424在子宫内膜不同细胞类型、不同时期和HCG日高孕酮患者中的表达存在差异，可能参与子宫内膜容受性的调节。
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miR-424在人脂肪来源间充质干细胞成骨分化中的调控作用
目的 探讨miR-424在人脂肪来源间充质干细胞(hASC)成骨分化中的表达及miR-424对hASC体外成骨分化的生物学作用.方法 qPCR检测miR-424在hASC成骨分化不同阶段的表达水平.通过慢病毒颗粒在体外感染hASC,使miR-424过表达或抑制其表达,进行Western blotting、细胞免疫荧光试验及碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色试验,研究miR-424对骨形态发生蛋白2(BMP-2)及成骨诱导液诱导hASC成骨分化过程的影响.预测miR-424的靶基因,并利用qPCR及Western blotting验证.结果 qPCR结果显示miR-424在hASC的表达量随着成骨诱导时间延长逐渐下降(P＜0.05).在BMP-2诱导下,过表达组的碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)蛋白水平均下降,而抑制组的表达增加(P＜0.05).细胞免疫荧光显示,过表达miR-424的细胞骨唾液酸蛋白(BSP)阳性率显著下降(P＜0.05).ALP和ARS染色显示,过表达组ALP活性降低,钙盐沉积下降,而抑制组ALP活性升高,矿化能力增强.过表达miR-424能降低hASC中Smad5的mRNA和蛋白水平,而抑制miR-424则使其水平升高(P＜0.05).结论 miR-424在hASC成骨分化中表达下调,其在hASC体外成骨分化过程中起抑制作用.
关键词： 人脂肪来源间充质干细胞 miR-424 Smad5 成骨分化 -
MiRNA-424对人结肠癌细胞系Lovo细胞增殖及Rspo3基因表达的影响
[目的]探讨miR-424对人结肠癌Lovo细胞增殖及Rspo3基因表达的影响.[方法]运用实时荧光定量PCR检测Lovo细胞和正常结肠上皮组织NCM460细胞中miR-424与Rspo3 mRNA的表达水平.miR-424抑制剂(inhibitor)转染Lovo细胞后,观察细胞增殖能力,及miR-424、Rspo3 mRNA、miR-15/16/103表达水平,Western blot检测Rspo3蛋白表达水平.通过在线软件预测靶向Rspo3基因的miRNA,并用双荧光素酶报告基因实验验证.[结果]MiR-424与Rspo3 mRNA在结肠癌Lovo细胞中过表达(P＜0.05).miR-424 inhibitor组Lovo细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05),且Rspo3基因表达量显著下降(P＜0.05),miR-15/16/103均上调,其中miR-103上调显著(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验验证mi R-103可靶向调控Rspo3基因的表达.[结论] miR-424抑制剂可阻滞Lovo细胞增殖且通过反馈性上调miR-103靶向抑制Rspo3基因的表达.
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miR-424和miR-503对人直肠癌细胞系增殖的影响
目的 探讨miR-424和miR-503对人直肠癌细胞株SW620和SW480细胞增殖的影响,并筛选其靶基因.方法 直肠癌细胞株SW620和SW480分为SW480组、SW480 miR-424组、SW480-miR-503组、SW620组、SW620-miR-424组、SW620-miR-503组;SW480组和SW620组细胞正常培养,SW480-miR 424组、SW480 miR-503组、SW620-miR-424组和SW620-miR-503组细胞分别采用慢病毒载体pSLIK-Zeo构建miR-424和miR-503直肠癌细胞系;SW620细胞系各组于不同培养时间进行细胞计数并绘制细胞生长曲线;采用荧光定量PCR法检测SW480组、SW620组细胞中miR-424和miR-503表达水平;采用RNA-seq法筛选miR-424和miR-503的靶基因,并采用Western blot对靶基因进行验证.结果 miR-424和miR-503在SW480细胞中呈高表达,在SW620细胞中呈低表达;SW480组miR-424-3p(9.572±2.171)、miR-424-5p(13.891±1.124)和miR-503(6.792±1.412)表达水平高于SW620组(1.026±2.874、1.103±0.411、0.984±0.847),差异有统计学意义(P＜0.01);各时间点SW620-miR-424组和SW620-miR-503组细胞数量均少于SW620组(P＜0.01),SW620 miR-503组少于SW620-miR-424组(P＜0.01);RNA-seq测序分析结果显示,SW620和SW480细胞共有1 413个差异表达基因,其中有50个肿瘤标志物,WEE1蛋白为极高表达者,miR-424和miR-503均可与WEE1的3'UTR序列结合,且miR-424的结合能力高于miR-503;SW620组细胞WEE1蛋白表达水平(8.69±3.24)高于SW480组(5.94±2.37) (P＜0.01),SW480-miR-424组和SW480-miR-503组细胞WEE1蛋白表达水平(2.19±1.72、3.45±2.16)明显低于SW480组(P＜0.01),SW620-miR 424组和SW620-miR-503组细胞WEE1蛋白表达水平(4.31±2.63、5.37±3.25)明显低于SW620组(P＜0.01).结论 miR-424和miR-503抑制细胞周期检查点激酶WEE1的表达,进而调节细胞的增殖能力,参与肿瘤发生、发展过程.
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miR-424慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响
目的：构建hsa‐miR‐424基因慢病毒表达载体，并鉴定miR‐424在细胞内表达水平，研究hsa‐miR‐424对宫颈癌 He‐la 细胞增殖的影响。方法以人基因组 DNA 为模板，设计合成 miR‐424的上下游引物，PCR 扩增目的片段，回收产物将其连入pMD18T 载体中，进行测序。再以 pMD18T‐miR424为模板进行 PCR 扩增，将其中表达 pMD18T‐miR424的结构经酶切后插入pLentis‐CMV‐GFP‐MCS‐PGK‐PURO 载体，构建成 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424‐PGK‐PURO ，在293T 细胞中与 pSPAX2、pMD2．G包装产生所需的慢病毒，再用含慢病毒的上清液感染 Hela 细胞。结果 miR‐424基因与慢病毒载体连接成功，测序结果证明了插入到质粒载体中的 miR‐424前体序列完全正确，成功构建 pLentis‐CMV‐GFP‐miR424重组慢病毒载体，用其感染宫颈癌Hela 细胞后上调 miR‐424的表达近60倍。采用 M TT 法检测增殖结果提示：感染 miR‐424慢病毒的宫颈癌 Hela 细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了 miR‐424慢病毒载体，建立了高效稳定表达 miR‐424的细胞株，并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌 Hela 细胞，成功抑制了 Hela 细胞的增殖，为后续相关的研究奠定了良好的基础。
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miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制
背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖，抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力，而其对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F63’UTR区的荧光素酶报告载体，验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后，A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后，A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后，A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后，细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。
