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补肾壮骨中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达的影响
目的:通过骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,探讨绝经后骨质疏松症(PMOP)的发病机制以及补肾壮骨中药复方的疗效机理.方法:去卵巢复制骨质疏松症大鼠模型按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、补肾组、钙尔奇D组、骨疏康组,灌胃12周检测骨密度、Dlx5 mRNA及蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组股骨骨密度明显降低,骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显降低;与模型组比较,补肾组、骨疏康组股骨骨密度明显升高,补肾组、骨疏康组骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显上调.结论:PMOP的发病机制之一可能是骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达降低,补肾壮骨中药复方可能通过上调骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,有效防治绝经后骨质疏松症.
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Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化
背景:Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用.目的:探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制.方法:采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200 μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用.结果与结论:用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200 μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平.说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化.
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室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中骨形成蛋白2及DLX5的作用
背景:目前神经干细胞应用的大障碍还在于分化的调控,而对干细胞分化调控机制尚知之甚少.室管膜前下区是目前公认的神经干细胞富集区之一.在此区的神经干细胞可以长距离迁移到嗅球而保持神经干细胞不分化,后在嗅球分化为中间神经元.骨形成蛋白2及DLX5在室管膜前下区神经干细胞向嗅球迁移分化过程中起着重要作用.目的:研究室管膜前下区神经干细胞的构筑及迁移特点,以及目前国内外有关骨形成蛋白2及DLX5在此区神经干细胞迁移分化中的作用,希望对神经干细胞的分化调控机制有一定的认识.方法:由第一作者利用中文检索词"神经干细胞,室管膜前下区,骨形成蛋白2,DLX5"及英文检索词"neural stem cells,SVZa,BMP-2,DLX5",在PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)、中国期刊全文数据库(www.cnki.net/index.htm)、万方数据库(http://www.wanfangdata.com.cn)中检索1997-01/2009-01关于骨形成蛋白2、DLX5在室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中作用的文献.排除内容陈旧或重复文献.结果与结论:初检得到121篇文献,中文86篇,英文35篇.后对符合标准的28篇文献作进一步的分析.结果提示,室管膜前下区神经干细胞具有其独特细胞构筑和长距离迁移的特点,骨形成蛋白2及DLX5在其迁移分化过程中起着重要作用,但其具体作用机制仍不清楚.
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2型糖尿病大鼠骨痂内Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合
背景：研究表明Osx、Dlx5等基因的表达水平与骨折愈合障碍可能存在一定关系。目的：分析2型糖尿病大鼠牵引骨痂中Osx、Dlx5表达变化与骨折愈合障碍的关系。方法：选择8周龄SD大鼠32只，随机分为2组，实验组(18只)高糖高脂饲料喂养8周，链脲佐菌素腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型；对照组喂普通大鼠饲料予以同样剂量柠檬酸腹腔注射。2组大鼠同时建立骨折牵引模型，定期延长外固定架，牵引模型建立后15 d处死大鼠并收集血液标本检测生化指标，X射线观察骨痂生长情况，取左胫骨骨痂组织进行组织学观察，检测骨痂组织中Dlx5、Osx蛋白及相关基因的表达。结果与结论：X射线摄片结果：实验组牵引骨痂较对照组明显减少，骨痂组织苏木精-伊红染色显示：实验组较对照组的微骨柱明显减少；初始基质前沿浅染。而骨痂的组织学定量分析则显示：实验组新生骨痂的形成面积较对照组减少而骨折近端脂肪细胞数量增多(P <0.01)。QPCR检测则显示：实验组较对照组骨痂组织中Osx表达降低(P <0.05)，Dlx5表达降低(P <0.05)。结果提示，2型糖尿病大鼠骨折愈合较正常大鼠明显减慢，可能与2型糖尿病Osx、Dlx5表达降低具有相关性。
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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响
目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.
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Dlx5 mRNA在室管膜前下区神经干细胞中的表达规律及其对神经元分化的影响
目的研究Dlx5 mRNA在培养的室管膜前下区(anterior subventriculor zone, SVZa)神经干细胞(NSCs)中的表达规律及其对SVZa NSCs方向分化的影响. 方法提取每一代培养的SVZa NSCs的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Dlx5及Er81 mRNA表达的情况;将重组质粒pEGFP-mDlx5用电穿孔的方法转染不表达Dlx5 mRNA代次的NSCs,再检测Dlx5 mRNA的表达情况,并将转染细胞分化后进行免疫荧光染色,分析基因转染细胞与神经元分化的关系;另外,还用100 ng/ml的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)处理不表达Dlx5 mRNA的NSCs,24 h后检测Dlx5 mRNA的表达情况.后将不同Dlx5 mRNA表达情况的NSCs分化后用流式细胞仪检测神经元分化的比例. 结果细胞传代至第4代时Dlx5 mRNA表达消失,相应地,其神经元分化比例为(8.34±0.36)%,比表达Dlx5 mRNA的第3代NSCs的(19.16±0.75)%明显下降;用Dlx5基因转染该代 NSCs后,外源转染基因能够使内源性Dlx5 mRNA恢复表达,神经元分化比例也明显升高,为(35.66±0.58)%,免疫荧光染色也证实基因转染细胞分化成了神经元;而BMP-2处理也能诱导Dlx5 mRNA重新表达,神经元分化比例也有一定程度上升,与第3代NSCs的相似,为(22.27±0.12)%.除第3代NSCs分化组与BMP-2诱导组神经元分化比例差异无统计学意义外,其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P《0.05). 结论随着传代次数的增加,到第4代时,SVZa NSCs Dlx5 mRNA表达消失,而外源性Dlx5基因转染及BMP-2可以诱导其重新表达;Dlx5基因能使新生大鼠来源的SVZa NSCs向神经元方向分化.
