快速眼动期睡眠剥夺对大鼠海马齿状回神经元增殖与凋亡的影响

目的 探讨快速眼动期(rapid eye movement,REM)睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对大鼠海马齿状回神经元增殖与凋亡的影响.方法 45只Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为3组:①普通鼠笼对照组(cc,n=15)；②睡眠剥夺组(SD,n=15)；③睡眠恢复组(RS,n=15).采用改良多平台睡眠剥夺法连续72 h剥夺大鼠REM睡眠后,利用BrdU标记增殖细胞,运用免疫组织化学方法观察大鼠海马齿状回神经元增殖情况,并利用免疫荧光染色检测大鼠海马齿状回新生神经元标记物微管相关蛋白(doublecortin,DCX)和星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)的表达情况.采用TUNEL法观察大鼠海马神经元凋亡情况.结果 免疫组化结果显示SD组及RS组每张切片BrdU阳性细胞平均数均明显少于CC组(P＜0.01),但是RS组与SD组相比无显著性差异(P＞0.05).免疫荧光染色结果显示,DCX阳性细胞在BrdU阳性细胞中所占比例大,各组间BrdU/DCX、BrdU/GFAP双阳性细胞的百分比相差不显著(P＞0.05).CC组、SD组及RS组各组海马区均未见TUNEL阳性细胞.结论 REM睡眠剥夺抑制海马齿状回神经元增殖,短期睡眠恢复后无显著改善.REM睡眠剥夺对海马齿状回神经元的分化和凋亡无影响.

携Fe3O4靶向血栓聚乳酸-羟基乙酸微球的制备及体外MR成像研究

目的 制备携Fe3O4靶向血栓的聚乳酸-羟基乙酸(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)微球,探讨其理化性质并在MR监测下观测其对体外血栓的靶向能力.方法 以PLGA为载体,通过双乳化溶剂挥发法及碳二亚胺法制备携带MR造影剂Fe3O4及表面修饰血栓亲和性短肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser,RGDS)的PLGA微球(RGDS-Fe3O4-PLGA微球),对其理化性质进行表征,通过体外靶向血栓实验探究其对血栓的靶向能力,并评价其MR显影效果.结果 成功制备了RGDS-Fe3O4-PLGA微球,激光粒径仪测得微球的粒径为(1 105 ±83)nm,其形态规则,大小均匀,呈球形,分散性好,火焰原子吸收光谱法测得Fe3O4携带率为43.6％,流式细胞仪检测RGDS的连接率为23.57％.在MR监测下,体外血栓寻靶实验证实该微球可有效靶向血栓并明显降低血栓周边T2信号.结论 本实验制得的RGDS-Fe3O4-PLGA微球对体外血栓有良好的亲和性,MR对比增强效果好.

经皮加压钢板与动力髋螺钉治疗老年股骨粗隆间骨折的对照研究

目的 探讨经皮加压钢板(percutaneous compression plate,PCCP)与动力髋螺钉(dynamic hip screw,DHS)治疗老年骨质疏松性股骨粗隆间骨折的临床疗效并进行对比分析.方法 对2008年1月至2011年6月在我院采用PCCP和DHS内固定治疗且获得随访的年龄≥60岁的股骨粗隆间骨折患者的病历资料进行回顾性分析.DHS组67例,包括男性27例,女性40例,年龄60～106岁,平均81.3岁.按AO分型,A1型17例,A2型43例,A3型7例.PCCP组76例,包括男性30例,女性46例,年龄61～100岁,平均80.7岁.按AO分型,A1型20例,A2型47例,A3型9例.对手术时间、术中出血量、术后输血量、术后血红蛋白下降值、住院时间、骨折愈合时间、Harris髋关节功能评分、颈干角变化等情况进行对比分析.结果 PCCP组和DHS组患者在年龄、性别、骨折分型、术前ASA评分、术后输血量等方面的差异无统计学意义(P＞0.05).PCCP组较DHS组在手术时间[(50.45±16.22) min vs (76.04±13.30) min]、术中出血量[(43.33±16.49)mL vs (240.00±108.56) mL]、术后血红蛋白下降值[(12.38 ±5.37) g/L vs (15.73 ±5.80) g/L]、住院时间[(9.95±4.13)d vs (16.15±6.34)d]明显下降(P＜0.05).术后随访12～28个月,平均17个月,骨折愈合时间2组无明显差异(P＞0.05),但PCCP组在Harris髋关节功能评分、颈干角变化等明显优于DHS组(P＜0.05).结论 PCCP治疗老年骨质疏松性股骨粗隆间骨折具有微创、稳定等优点,在手术创伤、功能恢复等方面优于DHS.

肺结核患儿外周血单个核细胞中microRNA表达的初步研究

目的 探讨肺结核患儿与健康儿童外周血单核细胞中microRNA表达水平的差异及在儿童肺结核中的诊断价值.方法 提取肺结核及健康儿童外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中RNA,进行microRNA芯片检测,筛选出差异表达的microRNA,并用实时荧光定量PCR进行验证,运用t检验对结果进行分析,对目标microRNA进行生物信息学初步分析.结果 通过microRNA芯片检测到21个差异表达的microRNA,15个表达上调,6个表达下调,终选取6个microRNA(hsa-miR-193a-3p、hsa-miR-144、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-31、hsa-miR-33a、hsa-miR-142-3p).经实时荧光定量PCR验证,与正常组相比,肺结核患儿PBMC中hsa-miR-193a-3p、hsa-miR-144表达上调(P＜0.05),hsamiR-342-5p、hsa-miR-31表达下调(P＜0.05).生物信息学初步分析提示4种microRNA在结核与宿主细胞相互作用的相关信号通路中可能有发挥一定的作用.结论 与成人肺结核中microRNA表达相比,儿童肺结核有其特异表达的microRNA,并可能参与结核病发生、发展的相关的一些信号通路,可作为儿童肺结核潜在的诊断价值.

PHILOS锁定钢板治疗肱骨近端骨折的临床疗效观察

目的 探讨采用PHILOS锁定钢板治疗肱骨近端粉碎性骨折的临床疗效.方法 收集2010年1月至2012年6月应用PHILOS锁定钢板治疗16例肱骨近端骨折患者,通过影像学资料、Constant-Murley评分(Constant-Murley score,CMS)及美国肩肘外科医师(American shoulder and elbow surgeons,ASES)评分对患者骨折愈合情况、肩关节功能及并发症等进行评估.结果 16例患者均获随访,平均随访时间17(6 ～25)个月.16例(100％)患者获得骨性愈合,14例患者基本获得解剖复位(87.5％),1例(6.2％)患者术后肩关节轻度疼痛,1例(6.2％)患者术后肩关节功能严重障碍.所有病例无钢板螺钉断裂、肱骨头缺血性坏死发生；平均ASES评分为80.5(40 ～96)分,平均Constant评分为72.4 (32～93)分；其中患肢肩关节功能优12例(75.0％)、良3例(18.8％)、差1例(6.2％).结论 采用PHILOS锁定钢板治疗肱骨近端粉碎型骨折,尤其对老年性骨质疏松患者,不仅可提供稳定的骨折固定,而且能进行早期功能锻炼,从而取得较好的疗效.

全血γ干扰素诱导蛋白-10释放试验对活动性肺结核的诊断价值

目的 探讨全血γ干扰素诱导蛋白-10(IP-10)对活动性结核病的辅助诊断价值.方法 检测66例活动性肺结核病患者、40例非结核呼吸疾病患者及40例健康对照者血浆中非特异性IP-10的水平；分别应用纯化的结核分枝杆菌特异性蛋白早期分泌性靶抗原石(EAST-6)和培养液蛋白10 (CFP10)体外刺激患者全血,检测活动性结核病组、非结核呼吸疾病组和健康对照组人群全血中IP-10的释放水平；绘制受试者工作特征曲线,比较非特异性IP-10和特异性IP-10对活动性肺结核的诊断效能.结果 活动性结核病组患者血浆中非特异性IP-10的水平为(139.6±124.2) pg/mL,明显高于健康对照组[(33.5±17.7) pg/mL,P＜0.05]；而与非结核呼吸疾病组[(88.1±73.3) pg/mL]无明显差别(P＞0.05).经ESAT-6及CFP10诱导后,活动性结核病组患者全血IP-l0释放水平为(146.0±167.1) pg/mL,显著高于非结核呼吸疾病组[(26.6 ±9.7) pg/mL,P＜0.01]与健康对照组[(24.2±9.7) pg/mL,P＜0.01].经过ROC分析,结核特异性的IP-10诊断结核病的临界值为41.2 pg/mL,敏感度为68.2％,特异度为93.7％.特异性IP-10 ROC曲线下面积为0.905,高于非特异性IP-10(0.747,P＜0.01).结论 IP-10可作为活动性结核病的辅助诊断方法.采用结核特异性IP-10较血浆非特异性IP-10能够提高活动性肺结核的诊断效能.

98例足月儿、早产儿化脓性脑膜炎临床分析

目的 探讨足月儿、早产儿患化脓性脑膜炎(purulent meningitis,PM)临床特点的异同.方法 对我院新生儿中心2007年2月至2013年2月98例确诊化脓性脑膜炎的患儿进行回顾性分析,按胎龄分为足月儿组、早产儿组,对两组的临床特征进行对比分析.结果 足月儿组以发热(x2=12.529,P＜0.001)、抽搐(x2=5.286,P=0.022)为突出表现,而早产儿组则以肌张力降低为突出表现(x2=11.113,P=0.001).足月儿组治愈患儿的治疗时间为(22.92±7.69)d,早产儿组为(33.88±15.16)d.电话随访结果显示,足月儿组、早产儿组遗留后遗症的比例分别为25.00％、29.41％.结论 早产儿较足月儿缺乏发热、抽搐等颅内感染的典型表现,治愈所需时间较长,且遗留严重后遗症比例更高,故需加强重视早产儿化脑的早期诊疗.

髓样分化因子促进卵巢癌细胞耐药性的机制研究

目的 探讨髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)参与调节卵巢癌细胞耐药性的具体机制.方法 在卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中采用特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)抑制MyD88的表达,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况以及细胞在紫杉醇处理后的存活情况.Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)以及多药耐药蛋白(multidrug resistance 1,MDRl)的表达情况.进一步在A2780/Taxol细胞中通过LY294002抑制PKB/Akt信号通路,通过小干扰RNA抑制MDR1的表达,CCK-8试剂盒检测细胞在紫杉醇处理后的存活情况.结果 在A2780/Taxol细胞株中抑制MyD88的表达,细胞的增殖速度明显低于对照组(P＜0.05).A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性也明显降低,半数抑制浓度(IC50)降低至对照组的50％(P＜0.01),且p-Akt、XIAP和MDR1在药物刺激下的升高也被明显抑制.同时抑制p-Akt通路的活性或抑制MDR1的表达后A2780/Taxol细胞的耐药性也出现明显下降,IC50分别降低至对照组的80％和50％,且差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MyD88蛋白通过调节PKB/Akt信号通路、XIAP抗凋亡蛋白以及MDR1的表达参与卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性.通过抑制MyD88可望改善卵巢癌治疗中的耐药现状.

新兵新训应激后成长与自我接纳和心理弹性的关系

目的 考察新兵新训应激后成长与自我接纳和心理弹性的关系.方法 2013年某部队新兵新训1个月时,采用正性情绪量表(PAS)、Connor-Davidson心理弹性问卷(CD-PISC)、应激后成长问卷(PTGI)、自我接纳问卷(SAQ)和心理应激自评问卷(PSET)对651名新兵进行调查.结果 ①新兵新训应激后成长总分为(45.90±18.59),文化程度高的新兵在新训应激后成长得分相对较高(P＜0.01).②应激后成长高分组在正性情绪、心理弹性总分、自我接纳总分上均显著高于应激后成长低分组(P＜0.01),在心理应激总分上显著低于应激后成长低分组(P＜0.01).③正性情绪在应激程度、自我接纳对应激后成长的影响中起到完全中介作用,在心理弹性对应激后成长的影响中起到部分中介作用.结论 新兵新训期间的正性情绪、心理弹性、自我接纳、应激程度与应激后成长密切相关,且正性情绪和心理弹性是新兵新训应激后成长的重要预测因素.

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白的差异表达研究

目的 检测强直性脊柱炎外周血单个核细胞中急性时相反应蛋白表达水平,探讨其与强直性脊柱炎发病的关系.方法 收集10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照,提取外周血单个核细胞,采用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中的急性时相反应蛋白表达水平,并运用Western blot方法进行验证差异表达的触珠蛋白(Hp)和铜蓝蛋白(Cp).结果 基于质谱分析的蛋白组学显示,19种急性时相反应蛋白在强直性脊柱炎外周血单个核细胞中蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),主要包括补体C3、纤粘蛋白(FN1)、血浆酶原(PLG)、转铁蛋白(TF)、Hp和Cp；Western blot检测Hp和Cp的表达水平与相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术检测结果具有相同的变化趋势.结论 急性时相反应蛋白差异表达可能参与了强直性脊柱炎的发生、发展,有望作为强直性脊柱炎的临床生物标记物.

类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染A549细胞模型的建立

目的 建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染人肺癌上皮细胞A549的细胞模型.方法 优化类鼻疽伯克霍尔德杆菌感染A549细胞的感染条件(如MOI、感染时间),通过活细胞工作站动态观察、Giemsa染色、激光共聚焦、透射电镜确证胞内感染和宿主细胞的形态变化,通过炎症因子IL-8和TNF-α的检测,分析病原菌入胞率和宿主反应性,评价该模型中病原菌侵入A549导致多核巨细胞(muhinuclear giant cell,MNGC)形成的特点和病理损伤规律.结果 透射电镜结果显示类鼻疽伯克霍尔德氏菌侵入到胞内的时间早是4h.通过Giemsa染色形态观察,类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染后早8h可观察到典型MNGC的形成.随着感染时间的延长,MNGC形成率和炎症因子IL-8逐渐升高,而TNF-α在此模型中变化不明显.结论 成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染A549细胞模型.

植物雌激素通过缺氧诱导因子-1α与核因子-κB下调缺氧肺泡上皮细胞膜联蛋白A1的表达

目的 从人肺泡上皮细胞甲酰肽受体激动剂——膜联蛋白A1(Annexin A1,AnxA1)的表达变化,探讨植物雌激素影响缺氧肺部炎症浸润的机制.方法 人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)接种于60 mm培养皿中常规培养,待培养皿中细胞长满约70％,根据是否用药分为:对照组(溶剂DMSO对照)、染料木黄酮(genistein,Gen)组、大豆苷元(daidzein,DD)组,每组细胞再根据是否缺氧再分为常氧组(N)、缺氧组(H).Gen组、DD组于缺氧处理前分别加入Gen及DD,终浓度均为15 μmol/L.缺氧组细胞置于缺氧培养箱(1％O2)24h.取细胞培养上清及细胞裂解离心上清,结合甲酰肽受体特异性抑制剂tBoc2,通过趋化实验,检测其甲酰肽受体激动活性.用Western blot分析AnxA1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子-κB (NF-κB)在蛋白水平的变化,用RT2-PCR法分析其mRNA水平的变化.结果 缺氧后的细胞冻融上清及培养上清趋化活性显著高于常氧组(P＜0.05),而植物雌激素处理后,两种上清的趋化活性均显著高于对照组(P＜0.05).Western blot与RT2-PCR检测结果显示,缺氧组AnxA1在蛋白水平和mRNA水平均高于常氧组(P＜0.05),两种植物雌激素不同程度地削弱了缺氧对AnxA1的上调效果,同时对HIF-1α、NF-κB的蛋白水平也产生同样的影响.结论 植物雌激素削弱了缺氧对AnxA1基因表达的上调效应,其机制与HIF-1 α、NF-κB信号途径有关.

聚己内酯/胶原支架纳米纤维方向对小鼠成骨前体细胞形态、增殖和分化的影响

目的 探讨聚己内酯/胶原(PCL/COL)支架纳米纤维方向对小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)形态、增殖、分化的影响.方法 通过扫描电子显微镜(SEM)对非取向和取向的PCL/COL纳米纤维支架的形貌进行观察；将MC3T3-E1细胞接种在非取向与取向的PCL/COL纳米纤维支架上,通过SEM及激光共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞在两组材料上的生长形态,CCK-8法检测细胞在两组材料上的增殖情况,Real-time RT-PCR检测细胞在两组材料上成骨分化的功能性基因Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)的表达情况.结果 非取向PCL/COL纳米纤维支架的纤维方向无规则,取向PCL/COL纳米纤维支架的纤维方向相同,两者纤维直径差异无统计学意义(P＞0.05),分别为(586±239) nm和(625±155)nm;SEM及LSCM检测结果显示MC3T3-E1细胞在非取向的纳米纤维上呈星形生长,细胞骨架呈不规则形态,而在取向纳米纤维上呈扁长形生长,且细胞骨架沿纳米纤维方向整齐排列；CCK-8检测结果显示在1、3、5d和7dMC3T3-E1细胞在非取向与取向PCL/COL纳米纤维支架上的增殖率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；Real-time RT-PCR检测结果显示MC3T3-E1细胞在两组材料上COLⅠ表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05),而细胞在非取向组较取向组能表达更多的ALP和OCN,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 非取向和取向的PCL/COL纳米纤维支架均能提供一个良好的微环境,利于MC3T3-E1细胞的生长、增殖,同时非取向PCL/COL纳米纤维支架较取向PCL/COL纳米纤维支架更有利于MC3T3-E1细胞的成骨分化,是一种有应用前景的骨组织工程支架材料.

和厚朴酚自微乳化给药系统的研究

目的 筛选并优化了和厚朴酚自微乳化给药系统(honokiol-SMEDDS)的处方.方法 利用溶解度,辅料配伍实验及伪三元相图筛选空白处方,以粒径和体外释放评价为指标选取佳处方.结果 优化后的honokiol-SMEDDS处方油相为辛癸酸甘油酯(MCT),表面活性剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油(Cremophor RH40),助表面活性剂为二乙二醇单乙基醚(Transcutol P),油相比例20％,表面活性剂与助表面活性剂的比值Km为2,载药量为10％,平均粒径为28 nm.结论 成功制备了honokiol-SMEDDS,显著提高了和厚朴酚的溶解度.

芳樟醇R-和S-对映异构单体的体外抗菌活性研究

目的 研究芳樟醇R-和S-对映异构单体的体外抗菌活性.方法 采用琼脂稀释法和微量稀释法检测R-和S-芳樟醇的抗菌活性指标,包括MIC、MBC、B/I、抑菌曲线、半数抑制量(IC50)、杀菌曲线.结果 R-和S-芳樟醇对金黄色葡萄球菌(ATCC29213、25923)、表皮葡萄球菌(ATCC12228、ATCC35984)、大肠杆菌(ATCC25922)均具有抗菌活性,敏感细菌的MIC值位于1.024～4.096 mg/mL,R-芳樟醇对部分细菌抗菌活性稍强于S-芳樟醇,两种构型芳樟醇B/I值均处于1～2范围内.而铜绿假单胞菌(ATCC27853)未检测出MIC值(MIC＞8.192 mg/mL).R-芳樟醇对金黄色葡萄球菌(ATCC25923、ATCC29213)的IC5o小于S-芳樟醇(P＜0.05).两者的抗菌效应曲线均具有明显的时效和量效关系.结论 R-和S-芳樟醇具有良好的抗菌活性,两者抗菌活性可能存在细微的差异.

外源性硫化氢对原代神经元早老素1和β淀粉样蛋白的影响

目的 探讨外源性H2S对原代培养皮质神经元早老素1(presenilin 1,PS1)和β淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的影响及机制.方法 ①NaHS为外源性H2S的供体,不同浓度NaHS(0、5、10、20、30、40、50μmol/L)作用于原代培养的皮质神经元,TUNEL法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测Aβ1-42水平,Western blot检测PS1蛋白表达水平.②神经元分为对照组(0 μmol/L NaHS)、20 μmol/L NaHS组、A干预组(NaHS 20 μmol/L加PI3K通路阻断剂LY294002 20 μmol/L)和B干预组(NaHS 20 μmol/L加MAPK通路阻断剂PD98059 20 μmol/L),Western blot检测PSI蛋白表达.结果 ①5 ～ 20μmol/L浓度NaHS干预时,不引起明显神经元凋亡；30～50 μmol/L时,神经元凋亡明显增加(P ＜0.05)；10、20 μmol/L浓度NaHS显著降低Aβ1-42水平和PS1蛋白表达水平(P＜0.05).②与对照组相比,20 μmol/LNaHS组和B干预组PS1蛋白表达降低(P＜0.05),而A干预组PS1蛋白表达无改变(P＞0.05)；而20 μmol/L NaHS组和B干预组间无差异(P＞0.05)；与A干预组相比,B干预组PS1蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 低浓度外源性H2S(30 μmol/L浓度NaHS范围内)不引起神经元明显凋亡,降低Aβ1-42水平和PS1蛋白表达,并可能通过PI3K信号通路发挥降低PS1蛋白表达的作用.

TMP线性二联体多肽的筛选及其对辐射损伤小鼠血小板减少症的救治作用

目的 筛选具有显著促进巨核细胞增殖、分化和血小板生成活性的血小板生成素模拟肽(TMP)二联体线性多肽,并观察其对血小板减少症的救治作用.方法 设计合成系列TMP二联体线性多肽,其中两个头尾串联的TMP之间设置不同长度的连接肽,CCK-8法检测并筛选促巨核细胞增殖活性强的TMP二联体多肽,Western blot分析TMP二联体多肽激活STAT5和ERK1/2磷酸化情况,流式细胞术分析小鼠骨髓来源Sca+-Ⅰ细胞经TMP二联体多肽处理后巨核细胞标志分子CD41、CD61的表达变化.BALB/c小鼠用5 Gyγ射线全身一次性照射后皮下注射TMP二联体多肽,每天1次,连续用药7d,分析外周血血小板水平变化和骨髓造血组织病理改变.结果 连接肽长度和氨基酸组成可显著影响TMP二联体多肽的促巨核细胞增殖活性,其中由1个脯氨酸(P)和8个甘氨酸(G8)连接的TMP二联体活性较为突出.TMP-PG8-TMP多肽处理能够显著促进巨核细胞中STAT5和ERK1/2的磷酸化,该多肽连续作用14 d能够较IL-3对照组显著上调Sca+-Ⅰ细胞CD41、CD61的双阳性表达率[(83.26±5.38)％vs(15.70±2.12)％,P＜0.01].此外,体内应用该多肽能够较辐照对照显著提高急性辐射损伤小鼠外周血血小板低值水平(164.8×109/L vs 53.0×109/L),并使血小板水平提前4d恢复.结论 通过筛选连接肽终获得具有显著促巨核细胞增殖和血小板生成活性的TMP二联体线性多肽.

透明软骨材料经脱细胞处理后细胞外基质成分变化的比较

目的 比较Triton X-100和十二烷基硫酸钠(SDS)试剂对人关节软骨脱细胞处理后细胞外基质成分的变化,指导筛选适宜的制备.方法 首先制备人关节软骨微粒,再采用两种不同试剂分别作用于软骨细胞微粒,清洗和消化步骤相同,脱细胞完成后分别进行DNA、总氨基酸及总胶原和葡萄糖胺聚糖(GAG)含量检测,分为Triton X-100组和SDS组,并与对照组(正常软骨组织)进行基质成分的比较分析.结果 Triton X-100组、SDS组和对照组经脱细胞处理后其GAG含量分别为(84.71 ±3.72)、(122.63±6.05)、(232.78 ± 75.33)μg/mg,羟脯氨酸含量分别为(24.92±1.74)、(24.23±1.68)、(24.54±2.99) μg/mg,DNA含量分别为(0.242±0.065)、(0.225 ±0.057)、(5.679±1.873)μg/mg.结论 Triton X-100和SDS两种试剂均能将软骨微粒中软骨细胞成分有效去除,胶原成分保留量在两组中无明显差异；但是应用SDS行脱细胞处理后能保留更多的GAG成分,更有利于维持软骨细胞功能,是较好的材料制备技术.

模拟微种植体植入上颌后牙区外周骨密度的锥形束CT测量分析

目的 模拟微种植体不同高度与角度植入成年人上颌后牙区并通过锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)测量分析其周围骨密度值.方法 选取30例成人CBCT影像资料为研究对象,对上颌骨进行扫描重建,从上颌第一前磨牙远中开始,将每个牙根间区域(不包括上颌结节)距离牙槽嵴顶2、4、6、8、10 mm处作为模拟植入点,分别测量与牙槽骨表面成30°、45°、60°、90°的4个不同角度模拟植入的直径为1.5 mm、长度为6.0mm的种植体外周1 mm的骨质密度.结果 在不同高度同一角度,不同角度同一高度,骨密度值对比均存在统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).在同一高度时,30°的骨密度值均大于其他各组,在同一角度时,位置越高骨密度值越大.结论 通过CBCT测量分析了不同高度与角度将模拟微种植体植入上颌后牙区的外周骨密度大小.

茶多酚对草甘膦致小鼠睾丸支持细胞氧化损伤及凋亡的保护作用

目的 探讨不同剂量的茶多酚(tea polyphenol,TP)对草甘膦(glyphosate,GLY)诱导小鼠睾丸支持细胞(sertoli 细胞)氧化损伤及凋亡的拮抗作用.方法 体外原代培养小鼠sertoli细胞,90 mg/L GLY培养液处理细胞形成sertoli细胞损伤模型,加入不同剂量TP(浓度分别为10、20、40、80 mg/L),形成4个拮抗组,另设由正常培养基形成的对照组；各组细胞培养24h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变；四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性；TUNEL法检测细胞凋亡情况；检测细胞中超氧化物歧化酶(super oxidase dimutase,SOD)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.结果 GLY处理组细胞出现收缩变小、脱落、甚至破碎,细胞的存活率明显低于对照组(P＜0.05),为对照组的47.03％；细胞内LDH活性明显高于对照组；细胞凋亡指数为(37.0±4.0)％,明显高于对照组(P＜0.05)；细胞内SOD活性、GSH含量与对照组相比明显降低,而MDA含量明显升高(P＜0.05).各拮抗组与GLY处理组相比,细胞形态有不同程度改善,尤其是拮抗组4(TP 80 mg/L)细胞生长状况明显好转,碎片明显减少；细胞的存活率、SOD活性及GSH含量明显升高(P ＜0.05,P＜0.01)；细胞凋亡指数、LDH活及MDA含量明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 GLY对小鼠sertoli细胞具有诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,降低细胞抗氧化能力的影响,TP对GLY造成的这些损伤有一定的保护作用.

NVP-BEZ235增敏左旋棉酚杀伤肝癌HepG2细胞的作用

目的 探讨PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235增敏左旋棉酚[(-)-gossypol]杀伤肝癌细胞HepG2的作用及可能机制.方法 用NVP-BEZ235、左旋棉酚或二者联合处理HepG2细胞,CCK-8法检测不同处理对细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响,Western blot检测不同处理对细胞中mTOR磷酸化水平以及Mcl-1蛋白水平的影响.结果 联合使用NVP-BEZ235和左旋棉酚可显著抑制HepG2细胞增殖,并促进细胞凋亡,其中左旋棉酚可上调HepG2细胞中mTOR磷酸化水平及Mcl-1蛋白水平,导致抵抗发生,NVP-BEZ235能够剂量依赖性抑制mTOR磷酸化(P＜0.01),并抑制左旋棉酚对Mcl-1的上调作用.结论 NVP-BEZ235可通过抑制mTOR进而下调Mcl-1来增强左旋棉酚杀伤HepG2细胞的效果.

肠分化细胞黏蛋白O-型糖链合成抑制导致MUC2表达减低以及对细菌侵袭易感

目的 探讨O-型糖链合成的抑制对肠分化细胞内细菌侵袭数量和细胞内MUC2表达水平的影响.方法 对肠分化细胞(HT-29-Gal)用O-型糖链抑制剂(benzyl-N-acetyl-α-D-galactosaminide,benzyl-α-GalNAc)处理,采用Real-time PCR和Western blot检测MUC2 mRNA和蛋白的表达情况.并将HT-29-Gal细胞及benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞分别与肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157∶ H7) 37℃孵育2h,再加入100 μg/mL的庆大霉素,杀灭细胞外及粘附于细胞表面的细菌.后采用系列稀释克隆计数法观察benzyl-α-GalNAc 处理的HT-29-Gal细胞对细菌侵袭的影响.结果 Real-time PCR和Western blot检测发现经benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞MUC2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).侵袭入benzyl-α-GalNAc处理的HT-29-Gal细胞的EPEC和EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著增加(P＜0.05).结论 抑制HT-29-Gal细胞黏蛋白O-型糖链的合成导致侵袭入细胞内细菌数量增加和MUC2的表达降低.

含川芎嗪UW液保存不同时间对异体神经再生的影响

目的 探讨在4℃条件下用含川芎嗪的UW液保存不同时间后大鼠异体神经再生的影响,阐明川芎嗪在短期内能促进异体神经再生.方法 取3月龄雄性清洁级成年健康Wistar大鼠56只(受体),体质量200～ 250 g,随机数字表法分为A、A'、B、B'、C、C'、D组,每组8只.取3月龄雄性清洁级成年SD大鼠24只(供体),体质量200～250 g,切取双侧坐骨神经干约15 mm,共取48条神经,经生理盐水冲洗后随机放入24根冻存管中(每根冻存管含2条供体神经),随机分为6组,于4℃条件下,任选3组分别经含川芎嗪的UW液分别保存4、6、12周后,作为实验A、B、C组神经修复供体,剩余3组用不含川芎嗪的UW液分别保存4、6、12周后,作为对照A'、B'、C'组神经修复供体.D组为新鲜自体神经移植组.术后4、8、12周行大体观察,术后12周行电生理检测,光镜、电镜观察神经再生情况.结果 术后12周检测腓肠肌湿质量、电生理情况,A、D两组优于其他组,但D组优于A组,组间有统计学差异(P＜0.05).术后12周移植神经段行HE染色光镜观察结果显示,C组及C'组炎症反应重且空泡变性为明显,D组炎症反应轻,镜下见A、D两组神经纤维排列较规则.术后12周行透射电镜检测结果显示,A、D两组再生的有髓神经纤维较多,并可见少许无髓神经纤维,髓鞘完整,呈同心圆排列,细胞器丰富；B组镜下情况差于A组,C、C'组再生的有髓神经纤维较少,并见结缔组织结构.结论 在4周内保存异体神经,川芎嗪可改善其神经再生效果.

FNBP1参与HeLa细胞的形态控制与生长调控

目的 研究FNBP1在HeLa细胞形态控制及生长调控过程中的作用.方法 运用RT-PCR、Western blot法在mRNA和蛋白水平验证FNBP1在HeLa细胞中的表达；运用RT-PCR、Western blot法检测靶向siRNA干扰HeLa细胞内源FNBP1的表达情况,并于完全沉默和表达恢复2个时相点检测HeLa细胞在细胞形态、细胞周期等方面的变化.结果 FNBP1在HeLa细胞中稳定表达；FNBP1表达沉默后,HeLa细胞形态发生纤维状转变；FNBP1表达恢复后,HeLa细胞形态恢复至上皮状；FNBP1表达沉默后,干扰组处于S期的细胞为30.36％,较正常组(25.45％)明显增多(P＜0.05)；而G2期干扰组细胞比例(9.28％)低于正常组(11.88％,P＜0.05)；HeLa细胞周期在S期出现阻滞.结论 FNBP1作为关键调控分子,为HeLa细胞的形态建成及维持所必需；FNBP1可能参与HeLa细胞周期调控相关过程.

Fahr病合并高同型半胱氨酸4例

Fahr病是一种原因不明的神经系统退行性疾病,以基底节及基底节外区域特征性钙化为特征,伴随神经、精神及认知方面的损害[1].临床上主要表现为运动障碍、精神障碍、癫痫发作等.本病具有家族性或散发性(特发性)特点.家族性多为常染色体显性遗传,也有常染色体隐性遗传和性染色体遗传的报道.现将收治的4例Fahr病合并高同型半胱氨酸(hHcy)的患者资料报告如下.

脊髓、颅内广泛浸润的透明细胞室管膜瘤1例

中枢神经系统室管膜瘤属于少见肿瘤,可分布于颅内及脊髓内.其中脑室管膜瘤好发于儿童及青少年,通常位于脑室系统中,多生长在后颅窝,尤以第四脑室底壁多见[1],也见于脑实质内;而脊髓室管膜瘤好发于成人,多起自颈髓,尤以颈延交界区多见[2].现将本院2013年3月收治的1例经病理检查证实的脊髓、颅内广泛浸润的透明细胞室管膜瘤报告如下.

原发性额窦癌侵及颅内、眼眶及筛窦1例

原发性额窦癌临床十分罕见,其发病率仅为鼻窦恶性肿瘤的0.3％[1].该病恶性程度高、进展快、预后极差,加之额窦临近解剖结构复杂,手术全切困难,复发率较高[2].我科于2012年12月收治1例原发额窦癌患者,现报告如下.1 临床资料患者,男性,66岁,因"额部肿物进行性增大4个月伴疼痛1个月"入院.患者入院前4个月前额肿胀,无压痛,当时未予以重视.入院前1个月患者自觉肿块逐渐增大伴疼痛,当地医院行头颅CT检查示:左侧额部大小约4 cm×6 cm肿块影,额骨骨质破坏,患者为求诊治转至我院.入院查体:左侧前额见皮下肿物,右侧眶内侧缘、眶外侧缘,左侧眶内侧缘均可触及肿块,质地硬,活动度差.

舞蹈病-棘状红细胞增多症1例

舞蹈病-棘状红细胞增多症(chorea-acanthocytosis,ChAc)是一种罕见的常染色体隐性遗传病.常伴有棘红细胞增多,主要临床表现为突发的、不规则的、类似亨廷顿舞蹈病样的不自主运动以及特征性的口面部不自主运动,常导致牙齿磨损、舌咬伤、发出怪声、构音障碍等.本科诊治1例,现报告如下.1 临床资料患者,女性,36岁,因"言语不清、行走不稳3年余,加重半年"于2012年10月7日入院.患者于3年前无明显诱因出现言语不清,行走不稳,伴不自主磨牙、不自主右肩耸动,余未诉特殊不适;不影响日常生活,未就诊.

16层螺旋CT不同层厚联合应用对肋骨不全性骨折的诊断价值

随着社会的飞速发展,交通事故或其他外伤所致的肋骨骨折越来越常见,具有社会意义的不全性骨折常常漏诊,因此,对影像诊断提出了较高要求[1-2].多层螺旋CT是胸部创伤影像学检查的重要方法之一,在扫描速度、范围、图像分辨率及后处理功能等方面具有明显优势[3].本研究通过回顾性分析201 1年1月至2012年12月656例肋骨骨折病例,探讨16层螺旋CT不同层厚的联合应用对肋骨不全性骨折的诊断价值,以期为临床诊治及法医学鉴定提供可靠依据,避免医疗纠纷[4].

三磷酸腺苷、维拉帕米及胺碘酮在治疗阵发性室上性心动过速中的疗效观察

目前对于阵发性室上性心动过速的急诊治疗仍以药物为主[1].由于各医院条件及医师经验差异,药物治疗欠规范,导致复律成功率及不良反应发生率差异较大.本研究通过简单随机分组治疗,观察三磷酸腺苷(ATP)、维拉帕米及胺碘酮(分别为三类抗心律失常药物的代表)的疗效及不良反应,进一步探讨治疗的准入条件、药物的优先选择,从而提高治疗的成功率及安全性.

大剂量替罗非班对冠状动脉脉分叉病变复杂策略PCI术后支架内血栓形成及安全性影响

随着经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)技术和器械的进步,很多冠状动脉复杂病变已成为PCI术适应证,但对于冠状动脉分叉病变采用复杂策略PCI术后支架内血栓形成(in-stent thrombosis,ST)的并发症也随之增加,并带来严重心血管事件后果,已成为介入心脏病学发展的巨大障碍[1].作为目前强的抗血小板聚集药物,近来研究证实不同时期应用小剂量血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂——替罗非班具有良好疗效,可减少术后主要心血管事件的发生[2].为了解大剂量替罗非班是否能更有效防治冠状动脉分叉病变复杂策略的Crush或Culottes支架术术后支架内血栓形成及其安全性,本研究对比分析了PCI术后予以常规剂量及大剂量替罗非班的安全性及对支架内血栓的影响.

改良结膜瓣遮盖萎缩眼球角膜后配戴义眼的临床观察

各种原因引起的眼球萎缩、先天性小眼球等,严重影响了面容,为改善外观,临床上采用眼球摘除联合义眼台植入手术,术后配戴义眼[1].部分患者因各种原因不能接受眼球摘除手术,然而,角膜上皮感觉神经丰富,直接配戴义眼片会导致患者眼部疼痛,需要遮盖角膜[2].当外伤后眼球萎缩,眼球形态较稳定、无眼内活动病变者,可采用全结膜瓣遮盖术保留眼球及配戴义眼的办法[3].此方法保留了眼球,但易发生结膜切口裂开、结膜瓣回退及上皮植入性囊肿等并发症[3],而且手术适应证尚无定论.为减少手术并发症和探讨手术适应证,我们改良了结膜瓣遮盖技术,并配戴义眼.2009年2月至2012年12月以来,我院收治眼球萎缩患者41例(41只眼)进行治疗,患者预后良好,达到了满意的美容效果,现报告如下.

自体脂肪颗粒移植在歪鼻微整形中的临床应用

歪鼻畸形多是先天性的,亦有后天外伤引起的[1],患有歪鼻畸形者,往往需要鼻综合整形来矫正[2].临床上矫正歪鼻畸形的方法较多.然而,采用自体脂肪矫治歪鼻的方法目前临床少见报道,我科自2009年2月至2012年12月对26例患者行自体脂肪颗粒移植对歪鼻进行鼻外形微整形取得较好的效果,现报告如下.

76例小儿危重症手足口病治疗分析

重症手足口病包括脑膜炎、脑炎、脊髓炎,神经源性肺水肿和循环衰竭,进入肺水肿和循环衰竭阶段和病死率高达83％[1].探讨重症、危重症手足病临床特征,早期判断重症病例,对手足口病的积极诊治和减少死亡具有重要的意义.现对我院2012年4-8月收治的76例重症、危重症手足口病病例进行分析和总结,现报告如下.

多精受精对胚胎发育及临床结局的影响

目的 了解体外受精-胚胎移植(in vitro fertilizati embryo transfer,IVF-ET)过程中多精受精对胚胎发育及妊娠结局的影响.方法 回顾性分析在本中心2010-2012年IVF-ET治疗周期的资料,根据多精受精率分为3组:正常受精组,多精受精率为0；低频多精受精组,0＜多精受精率≤25％；高频多精受精组,多精受精率＞25％.共分析了1 144个IVF-ET周期的资料,其中正常受精组有593个周期,低频多精受精组有449个周期,高频多精受精组102个周期.比较各组的平均年龄、平均获卵数、成熟卵率、正常受精率(2PN)、正常受精卵裂率(2PN)、正常受精优胚率及临床妊娠率.结果 除了正常受精卵裂率,3组的成熟卵率、正常受精率、正常受精优胚率、临床妊娠率均存在差异(P＜0.05).结论 低水平多精受精率不影响临床妊娠率,高频多精受精不影响优胚率,但会降低临床妊娠率.

低氧对大鼠骨髓间充质干细胞粘附能力的影响

目的 探讨低氧对大鼠骨髓间充质干细胞粘附能力的影响.方法 采用SD大鼠20只,年龄6～8周、雌雄不限、体质量100～120 g,获取骨髓间充质干细胞.流式细胞鉴定实验细胞CD54、CD29、CD90、CD45表达.根据细胞培养及冲涮实验时的细胞氧环境,实验分组为4组:A组(20％ O2培养20％O2冲涮组)；B组(1％O2培养1％ O2冲涮组)；C组(20％O2培养1％O2冲涮组)和D组(1％ O2培养20％O2粘附冲涮组),比较不同组下剪切力冲涮细胞的残留率.研究不同氧浓度变化对骨髓间充质干细胞表达缺氧诱导因子-lα(hypoxia inducible factor,HIF-1 α)和血管细胞粘附分子(vascularcell adhesion molecule,VCAM-1)的影响.结果 骨髓间充质干细胞在1％O2环境下(B、C组)粘附能力增强,在20％O2环境下(A、D组)粘附能力减弱(P ＜0.05)；HIF-1α表达水平在1％O2环境下(B、C组)增强(P＜0.05).结论 骨髓间充质干细胞随着粘附时间越长,细胞粘附能力也逐渐增强,经过低氧处理细胞的粘附力提高时间快于常氧环境.

战创伤休克的研究进展与趋势