第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
目的 实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达.方法 用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2*-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性.结果 成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血.结论 在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性.
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纳米微粒介导反义寡脱氧核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的实验研究
目的 探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响.方法 采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检测转染48 h后细胞耐药基因mdr-1、mrp的表达;MTT法检测经转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素(ADR)、表柔比星(epimbicin)、5-氟脲嘧啶(5-FU)和紫杉醇(paditaxel)的敏感性.结果 纳米微粒介导mdr-1、mrpASODN转染48 h后,MCF-7/ADR细胞的mdr-1、mrp在mRNA和蛋白质表达水平上均显著降低(P<0.05);细胞对ADR、表柔比星、5-氟脲嘧啶和紫杉醇的耐药指数均显著降低(P<0.05).结论 耐药基因反义寡脱氧核苷酸能在体外抑制耐药基因的表达,从而提高细胞的药物敏感性;纳米微粒具有较好的体外介导反义寡脱氧核苷酸转染效果.
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卡维地洛对心肌梗死后心衰大鼠心肌肌浆网Ca2+泵活性和Ca2+释放通道密度的影响
目的 探讨B受体阻滞剂卡维地洛干预慢性心衰对心肌肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+泵活性和Ca2+释放通道(Type 2 Ryanodine receptor,RyR2)密度的影响及意义.方法 通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心衰模型,以大剂量卡维地洛(60 mg·kg-1·d-1)进行干预,对照观察血流动力学、左室心肌SR Ca2+泵活性、[3H]-ryanodine与RyR2大结合量(Bmax)及Kd值.结果 与假手术组(SH组)相比,心衰组(HF组)左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.01),左室压力上升、下降大速度(+dp/dmax、-dp/dtmax)显著降低(P<0.01),卡维地洛(Carv组)LVEDP显著低于心衰组(P<0.01),+dp/dtmax、-dp/dtmax显著高于心衰组(P<0.01);心衰组心肌SR Ca2+泵活性、[3H]-ryanodine与RyR2大结合量Bmax显著低于假手术组(P<0.01),卡维地洛组显著高于心衰组(P<0.01),3组Kd值差异不显著(P>0.05).结论 大剂量卡维地洛长期干预心梗后慢性心衰,能够改善心肌SR Ca2+泵活性,增加RyR2密度,并改善心肌舒缩功能.
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MHC-I荧光四聚体载体的构建及其真核表达
目的 构建MHC-I荧光四聚体真核表达质粒,并表达、纯化该蛋白,以更简便地检测特异性T细胞.方法 运用分子克隆技术,构建sKb-ZsGreen-6 × His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化.结果 经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-I荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化,并经SDS-PAGE电泳证实.结论 得到了纯化的MHC-I荧光四聚体,并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别,为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法.
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经典眨眼条件反射建立后豚鼠小脑齿状-中位核突触超微结构的变化
目的 观察经典眨眼条件反射建立后豚鼠小脑齿状-中位核(D-I nuclei)突触超微结构的变化,探讨联合型学习和突触超微结构变化的关系.方法 实验动物分为配对组(n=4)和非配对组(n=4).采用500 ms正弦波纯音和100 ms束状氧气流进行配对刺激训练配对组动物,而非配对组动物则接受声音和气流的非配对刺激.训练6 d后,电镜下观察各组动物小脑齿状-中位核突触超微结构,应用图像分析软件比较突触超微结构相关参数的差异.结果 配对组动物在6 d的条件反射训练后均可获得90%以上的条件反应率,而非配对组动物6 d内条件反应率均低于10%;相对于非配对组,配对组动物小脑齿状-中位核突触密度无显著增加(P>0.05),但突触后膜致密区厚度增厚(P<0.05),突触活性区域增多(P<0.05).结论 经典眨眼条件反射建立可能与小脑齿状.中位核突触超微结构的变化有关.
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188Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究
目的 探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像.方法 以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像.结果 采用SPSS 13.0进行分析.结果 188Re标记QKRKRKKSRYKS在佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24 h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5 h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1 h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30).此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3 h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退.结论 188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织.
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促红细胞生成素联合粒细胞集落刺激因子对乳鼠缺氧心肌细胞的保护作用
目的 研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)联合粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)对缺氧心肌细胞的保护作用.方法 分离乳鼠心肌细胞.采用95%N2+5%CO:气体充分置换的1%胎牛血清DMEM培养液培养24 h,建立缺氧心肌细胞模型.研究不同浓度的EPO和G-CSF对缺氧心肌细胞的保护作用.观察在佳作用浓度时,EPO、G-CSF和联合用药对缺氧心肌细胞的保护作用.采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的存活率、凋亡率和坏死率.结果 缺氧心肌细胞的死亡率(26.73%)和其中凋亡细胞与总死亡细胞的比例(70.05%)明显高于正常心肌细胞(5.63%、37.83%).EPO 1 U/ml浓度开始发挥对缺氧心肌细胞的保护作用,5、25和125 U/ml的保护作用相似;G-CSF 6ng/ml开始发挥对缺氧心肌细胞的保护作用,150ng/ml保护作用强,30、750 ng/ml保护作用相似.EPO(5 U/ml)、G-CSF(30 ng/ml)和联合用药[EPO(5 U/ml)+G-CSF(30 ng/ml)]明显减少缺氧心肌细胞的凋亡率[(8.01±2.28)%、(7.08±0.16)%、(4.57±0.99)%,与缺氧心肌细胞(18.73±1.08)%比较,P<0.01]和总死亡率[(11.88±3.69)%、(11.60±0.65)%、(8.15±3.16)%,与缺氧心肌细胞(26.73±1.30)%比较,P<0.01);EPO组与C-CSF组保护作用相近(P>0.05);联合给药组保护作用明显强于单独EPO或G-CSF给药组(P<0.01).结论 EPO和G-CSF对缺氧心肌细胞具有保护作用,5 U/ml EPO和30 ng/ml G-CSF是减轻缺氧心肌细胞损伤的佳剂量.二者联合给药,保护效果优于单独用药.
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人工全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎髋关节病变
目的 分析人工全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎患者的中期疗效.方法 对17例(26髋)强直性脊柱炎患者行人工全髋关节置换术.随访时间平均3.8(2～7)年.临床随访根据Harris评分系统进行评分,并进行X线分析.结果 Harris评分由术前的平均27(4～47)分提高到了术后的平均81.3(57～90)分,优良率88.5%;X线片未见假体松动、脱位或折断;异位骨化发生率15.3%(4髋).结论 人工全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎患者髋关节病变,近、中期疗效较肯定.
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靶向FAK的siRNA对喉癌细胞增殖及侵袭能力的抑制作用
目的 运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断喉癌Hep-2细胞株中FAK基因的表达,探讨FAK基因沉默后对Hep-2细胞株产生的影响.方法 针对FAK基因,构建2条干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1和FAK-pGen-esil-CH2,1条阴性对照重组质粒FAK-pGenesil-HK;在脂质体的介导下转染喉癌Hep-2细胞株,用RT-PCR和Westem blot分析FAK mRNA及蛋白的表达;MTT法、流式细胞技术及体外侵袭实验测定十扰重组质粒对Hep-2细胞株的增殖、侵袭能力的影响.结果 重组质粒能有效地阻断Hep-2细胞株中FAK基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P<0.05);重组质粒转染Hep-2细胞后,细胞增殖抑制率分别为58.34%、52.78%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干扰组G0~G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少(P<0.05);FAK-pGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2作用Hep-2细胞株48 h后,Hep-2细胞穿过Matrigel膜的个数分别为(56.0±6.7)、(51.0±5,1),与阴性对照组(152.0 ±9.4)、正常对照组(139.0 ±8.1)比较有统计学差异(P<0.05).结论 干扰重组质粒能有效地抑制转染Hep-2细胞株的FAK mRNA及蛋白的表达,并能抑制Hep-2细胞株的增殖及侵袭能力.
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外周T细胞淋巴瘤APE1和P53蛋白联合表达的临床意义
目的 研究外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphomas,FrCLs)APE1和P53蛋白联合表达与临床特征、化疗效果及预后的关系.方法 免疫组化法检测178例PTCLs患者瘤细胞APE1和P53蛋白表达情况,采用单因素和多因素分析比较APE1和P53蛋白表达及联合表达与临床特征、预后的关系.结果 PTCLs患者APE1和P53蛋白表达阳性率分别为82.6%(147/178)和40.5%(72/178),其中血管免疫母T细胞淋巴瘤(ATL)和外周T细胞淋巴瘤-非特异型(PTCL-U)患者的APE1表达阳性率显著高于结外NK/T细胞淋巴瘤(NK/TL)、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤(CTCL)和间变大T细胞淋巴瘤(ALCL)患者(P<0.05).具有APE1+/P53+共表达患者的临床分期以Ⅲ+Ⅳ为主,中、高危患者比例高;APE1+/P53-组与APE1+/P53+组患者化疗疗效显著低于APE1-/P53-组和APE1-/P53+组(P<0.01);APE1+/P53-组和APE1+/P53+组患者总生存率明显低于APE1-/P53-和APE1-/P53+2组(P<0.01),APE1+/P53+组患者无病生存时间(DFS)明显低于其他3组(P<0.01);单因素生存分析显示APE1及P53呈阳性表达、APE1+/P53-和APE1+/P53+联合表达与患者预后不良有关(P<0.05),APE1+/P53-和APE1+/P53+联合表达均与3年生存率有关(P<0.05,P<0.01);多因素生存分析显示APE1+/P53+共表达患者预后差(P<0.01).结论 APE1、P53表达阳性,以及APE1+/P53-、APE1+/P53+联合表达的患者预后不良;APE1+/P53+共表达为PTCLs患者独立预后因素.
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兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性评价
目的 探讨兔眼角膜基质内注射两性霉素B的安全性,寻找角膜基质内注射两性霉素B的安全浓度.方法 健康家兔20只(40眼)按随机数字表法分为5组(每组8眼).A组:角膜基质内注射0.1 ml平衡盐溶液(BSS);B、C、D、E组角膜基质内分别注射0.1 ml浓度为5、10、15、20 μg/0.1 ml的两性霉素B注射液,每4天注射1次,共注射5次.观察角膜透明性、上皮完整性、角膜新生血管生长情况,测鼍角膜厚度,第5次注射后30 d处死动物,行角膜病理组织学检查、内皮细胞活性率测定及角膜内皮超微结构观察.结果 兔角膜基质内注射浓度为5、10μg/0.1 ml的两性霉素B注射液后不影响兔角膜正常生理功能,角膜透明、上皮完整,角膜内皮细胞无异常,与BSS组比较,未见明显差异(P>0.05).15、20 μg/0.1 ml浓度组,角膜出现明显水肿,角膜上皮脱落,严重的角膜新生血管长入,与BSS组比较,差异显著(P<0.05).结论 角膜基质内注射药物可能是一种可选择的、简单易行的给药途经.两性霉素B的药物浓度在5μg/0.1 ml、用量在0.1 ml范围内是安全的;两性霉素B的药物浓度在10 μg/0.1 ml、用量0.1 ml可能安全.角膜基质内注射安全浓度的两性霉素B可能是治疗顽同真菌性角膜溃疡的一种较好选择.
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前列腺特异启动子驱动的自杀基因对雄激素非依赖前列腺癌的杀伤作用
目的 将前列腺特异性启动子驱动的自杀基因导入到雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independent prostale Cancer,ALPC)细胞,观察其对AIPC细胞的杀伤作用.方法 将rPB-DR(6)启动子驱动的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因融合分子插入到逆转录病毒载体pLNCX,构建pLN-rPB-DR(6)-CD重组逆转录病毒载体,PA317包装,获得重组逆转录病毒,后者感染前列腺癌细胞PC-3,获得CA18抗性细胞PC-3CD.在培养基中加入维甲酸、5-氟胞嘧啶,观察其对PC-3CD的杀伤作用.结果 经酶切和测序证实成功构建了pLN-rPB-DR(6)-CD重组逆转录病毒载体,PCR证实在PC-3CD基因组DNA中扩增出了CD基因,RT-PCR证实PC-3CD有CD mRNA表达.在培养基中加入维甲酸、5-氟胞嘧啶后,PC-3CD细胞大量死亡,生长显著被抑制.结论 前列腺特异性启动子驱动的自杀基因可杀伤雄激素非依赖性前列腺癌细胞,并显著抑制其生长.
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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响
目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.
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基质细胞衍生因子-1α在皮肤创伤愈合过程中的表达特点
目的 探讨小鼠全层皮肤缺损伤创面愈合过程中基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)的表达规律及其在创伤愈合中的可能作用.方法 建立小鼠背部正中近颈侧皮肤1.5 cm × 1.5 cm的正方形全层缺损伤模型,分别于伤后1、2…3 4 5、7、10、14 d获取创缘组织,应用RT-PCR方法检测SDF-1α mRNA表达,Western blot和免疫组织化学方法检测SDF-1α的蛋白表达.结果 RT-PCR检测结果显示创面SDF-1α呈双峰表达,损伤后1 d,与正常皮肤组织相比,表达显著增加(P<0.05),3 d表达低(P<0.05),5 d表达达峰值(P<0.05);Western blot检测结果显示创面SDF-1α蛋白也呈双峰表达,峰值分别在伤后2 d(P<0.05)和7 d(P<0.05),免疫组织化学检测结果显示SDF-1α主要表达在新生表皮细胞和血管内皮细胞.结论 SDF-1α可能参与了皮肤的创伤愈合过程.
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羧基-D-氨基葡萄糖对人食管癌Eca-109细胞caspase-3活化及bcl-2蛋白表达的影响
目的 探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养Eca-109细胞;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内半胱氨酸酶3(caspase-3)活化程度及bcl-2蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果 COPADG作用显著增加Eca-109细胞凋亡率,且Eca-109细胞内caspase-3活性和bcl-2表达平均荧光强度明显增高.结论 COPADG能显著诱导Eca-109细胞凋亡发生,并使Eca-109细胞内caspase-3显著活化以及bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.
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CT灌注成像对大鼠急性脑缺血及再灌注模型的评价
目的 在活体状态下应用CT灌注成像(CT perfusion imaging,CTPI)技术,评价大鼠急性脑缺血及再灌注模型的可靠性及准确性.方法 用改良线栓法制作大鼠急性脑缺血及再灌注模型,分别行CTPI检查、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色及HE染色.结果 ①每组CTPI各时间点脑血流量(cerebral bloodflow,CBF)图核心区与脑血容量(cere-bral blood volume,CBV)图低灌注区体积比较无统计学差异(P>0.05),两者所示体积与TTC染色梗死区体积比较无统计学差异(P>0.05),与平均通过时间(mean transit time,MTT)图缺血区体积比较有统计学筹异(P<0.05).MTT缺血区体积与TTC染色梗死区体积比较有统计学差异(P<0.05).②CTPI各参数图与TTC染色梗死体积间均呈正相关关系,其中CBV相关性好(r=0.74).③梗死区CBF、CBV较对侧均明显减低,MTT延长;缺血半暗带区(Ischemic penumbra,IP)CBF较对侧明显减低,CBV较对侧正常或升高,MTT轻度延长;周围相对正常区CBF、CBV及MTT较对侧未见明显改变.④取梗死区脑组织做HE染色,结果显示以神经细胞死亡表现为主;取IP区脑组织做HE染色,显示以神经细胞变性损伤为主.结论 CTPI可在活体状态下快速、准确、无创地评价脑缺血再灌注动物模型的脑部血流动力学改变,显示脑梗死区及缺血半暗带区的部位、大小、程度,对超急性期脑梗死治疗及复查具有较强的临床应用价值.
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中国海域分离的啮氏艾肯菌致病性和抗生素敏感性研究
目的 就中国海域分离的啮氏艾肯菌对小鼠的毒力及伤口感染情况进行研究,并进行抗生素敏感性实验.方法 昆明小鼠腹腔注射啮氏艾肯菌悬液,观察一般状态、白细胞计数和血培养.第5天脱颈处死后解剖取脏器甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜观察;昆明小鼠致伤后浸泡在含啮氏艾肯菌的人工海水中45～60 min,打捞后分笼于层流柜中饲养.于致伤浸泡后不同时间做白细胞计数及血培养,并观察一般状态和伤口炎性反应,定时取伤肢分泌物做细菌培养;实验完毕后伤肢甲醛同定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜检查;用K-B法做啮氏艾肯菌对各种抗生素药物敏感性实验.结果 小鼠注射啮氏艾肯菌液后,白细胞升高,感染12 h后20%小鼠心和肝脏有细菌生长.小鼠感染啮氏艾肯菌后,病变部位以肺、肝及.肾脏为重,病变性质主要是造成血液循环障碍,引起不同程度的充血、出血及血停滞现象.致伤小鼠经含啮氏艾肯菌的海水浸泡后,6、12、24、48、72 h伤肢培养均为阳性,感染后48 h时20%小鼠肠组织细菌培养阳性,其余时间点和其他组织细菌培养均为阴性.伤肢组织可见肌纤维排列疏松、紊乱、断裂,横纹肌间较多炎细胞浸润.啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性仅为67%,对其他抗生素均表现为敏感.结论 中国海域分离的啮氏艾肯菌具有致病力,啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性较低,对其他抗生素均表现为敏感.
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ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型的影响
目的 以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORCl基因表达抑制后对VSMCs表型的影响.方法 实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性siRNA组.应用Western blot检测ORC1基因表达的变化;免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察细胞形态结构;应用流式细胞仪检测细胞表型标志蛋白表达.结果 ①siRNA转染后,阳性siRNA组ORCI基因表达水显著降低,而正常对照组及阴性siRNA组间ORC1基因表达水平无显著差异.②siRNA转染后,阳性转染组细胞呈现收缩型形态特征,空白对照组及阴性对照组细胞呈现合成型形态特征.③siRNA转染使ORCI表达减弱后,VSMCs收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM actin)和平滑肌肌动蛋白重链2(SM-2)表达水平明显升高.合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin)表达水平明显降低,空白对照组及阴性对照组间3种标志物表达水平无显著差异.结论 RNA干扰介导的ORC1基凶沉寂可促使VSMCs由合成型向收缩型转化.
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应用组织芯片技术研究非小细胞肺癌中MMP-2、MMP-9的表达及临床病理意义
目的 利用组织芯片技术,结合免疫组化方法,研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及临床病理意义.方法 80例NSCLC石蜡标本制成组织芯片,免疫组化(S-P)法检测MMP-2、MMP-9表达.结果 MMP-2、MMP-9在NSCLC中均有较高表达率,分别为81.25%(65/80)和73.75%(59/80),而且二者表达呈高度正相关;MMP-2、MMP-9的表达在NSCLC性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度上无显著差异(P>0.05);有淋巴结转移的患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为84.72%(61/72)及77.78%(56/72),无淋巴结转移的患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为50%(4/8)及37.50%(3/8)(P<0.05);临床分期为Ⅰ+Ⅱ期患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为57.14%(16/28)及53.57%(15/28),Ⅲ期患者MMP-2、MMP-9的阳性表达率分别为94.23%(49/52)及84.61%(44/52)(P<0.05).结论 利用组织芯片技术,结合免疫组化法可以快速、高效地检测MMP-2、MMP-9在NSCLC中的表达;MMP-2、MMP-9在NSCLC中的表达与患者性别、年龄、肿块大小、病理类型、分化程度无关,而有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组,且随着临床分期增加表达明显升高;MMP-2、MMP-9的过度表达与NSCLC的发展、淋巴结转移有密切关系,可作为临床评估NSCLC进展的重要指标之一.
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不同液体对失血性休克大鼠复苏效果的影响
目的 探讨不同液体输注对失血性休克大鼠复苏效果的影响.方法 用SD大鼠制作35%放血失血性休克模型,以乳酸林格氏液(LR)、羟乙基淀粉130(HESl30)、6%右旋糖酐40、高渗氯化钠右旋糖酐(HSD)、LR+右旋糖酐(体积比2:1)和LR+6%HES(体积比2:1)复苏休克动物至适宜血压(80mmHg)1 h后,观察其对失血性休克大鼠平均动脉血压(mean arterial blood pressure,MAP)、左心室收缩压(left intraventricular systolic pressure,LVSP)、左心室压力上升或下降的大速率(the maximal change rate of left intraventricular pressure,±dp/dtmax)的影响,同时观察血气指标和存活时间的变化.结果 输注LR、HES130、LR+6%HES后MAP能较好地维持在80 mmHg水平,而右旋糖酐40、LR+右旋糖酐以及HSD输注后MAP不能达到80 mmHg.HES130、LR+6%HES输注后LVSP和±dp/dtmax明显增加,而输注右旋糖酐、LR+右旋糖酐以及HSD后,LVSP和±dp/dtmaxLR组显著降低(P<0.05),以输注HSD后低.输注HSD后动物存活时间短,输注HES130和LR+6%HES后动物存活时间较其他组长(P<0.05).HES130、LR+6%HES改善血气效果较其他各组好.结论 不同液体对失血性休克大鼠复苏效果存在明显差异,以HES130和LR+6%HES效果较好,HSD效果较差.
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腺病毒介导GRIM19对恶性胶质瘤CHG-5细胞增殖及分化的影响
目的 观察增强外源性GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)基因表达对恶性胶质瘤CHG-5细胞生物学特性的影响,初步探讨其机制.方法 利用已成功构建的Ad-GRIM19腺病毒感染CHG-5细胞,通过形态学、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成等观察增强GRIM19基因表达后CHG-5细胞形态、增殖和体外成瘤能力的变化,台盼蓝染色法检测细胞活力,Real-time PCR及Western blot检测STAT3与PCNA基因表达.结果 Ad-GRIM19在体外感染CHG-5细胞后,明显改变CHG-5细胞生长形态,细胞增殖及体外成瘤减低,STAT3、PCNA基因表达下调.结论 GRIM19过表达可显著抑制CHG-5细胞恶性表型,提示GRIM19基因在调控胶质瘤细胞分化程度及恶性生物学行为方面具有重要作用.
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ICC样细胞在正常豚鼠上尿路的分布及对平滑肌收缩的影响
目的 研究正常豚鼠上尿路不同部位起搏细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的分布及其对局部平滑肌收缩的影响.方法 取10只豚鼠分别取肾盂输尿管交界处、上、中、下段输尿管组织,经全层铺片处理后,行ICCs特异性标志物KIT免疫荧光染色,对各段组织进行细胞计数,单因素方差分析各段ICCs的分布及其差异;再于上述部位(除输尿管壁内段外)分别剪取2 mm×6 mm肌条进行张力测定实验,比较各部位肌条收缩频率及幅度的变化,分析其与ICCs密度变化的相关性.结果 KIT染色阳性、形态与胃肠道起搏细胞ICCs相似的细胞(ICCs样细胞)存在于豚鼠上尿路的各段中,上尿路ICC样细胞密度在肾盂肾盏交界处、输尿管上、中、下段分别为(5.20±0.98)、(3.90±0.98)、(3.03±0.98)、(2.50±0.81)个/视野;各部位肌条收缩频率及幅度不同,但肾盂输尿管交界处、输尿管上段的肌条收缩频率及幅度较输尿管中段和下段明显增大,差异显著(P<0.05),输尿管中段和下段之间没有显著区别(P>0.05);相关性分析结果表明局部平滑肌肌条收缩频率和幅度与ICCs密度呈显著正相关性(P<0.05).结论 豚鼠上尿路平滑肌中存在ICCs,肾盂输尿管各部位ICCs的分布有显著差异,其与上尿路平滑肌局部肌条收缩有密切关系.
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人体胸部有限元模型研究
目的 建立人体胸部的三维有限元模型,以用于单兵防护工程研究.方法 以CT的扫描数据为重建源图像,利用医学图像重建软件Mimics进行三维重建;在有限元前处理软件ANSYS ICEM CFD中进行单元网格划分,并为模型各部分指定相应的材料特性参数;在有限元软件ANSYS LS-DYNA中完成有限元模型建模,并参照既往尸体实验数据检验模型有效性.结果 建立了近似人体胸部解剖结构的有限元模型,模型的模拟计算结果和既往尸体实验结果基本相符.结论 利用人体断层数据和专业软件,能够完成有限元模型的重建,模型能够满足单兵防护工程研究中进行人体胸部冲击相关数值分析的需要.
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鼻咽癌伴副肿瘤综合征1例
副肿瘤综合征是指由肿瘤引起,与肿瘤原发灶、转移、侵袭、治疗或因肿瘤导致的营养不良无直接关系的各种症状、体征[1,2].
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非常规术式经皮球囊二尖瓣成形术1例
1 临床资料患者,女性,45岁,因"间歇性心悸、气促20年,加重5 d"以"风心病二尖瓣狭窄"收住入院.既往有"风心病"病史加年.人院查体:BP 120/80 mmHg.未见颈静脉充盈,甲状腺不大,双肺(-),心尖部可扪及舒张期细震颤,心率90次/min,第一心音拍击样亢进,心尖部闻及舒张中晚期隆隆样递增型杂音,胸骨下段左缘闻及典型开瓣音,肝脾未及,双下肢无浮肿.
关键词： 二尖瓣狭窄 经皮球囊二尖瓣成形术 -
前路椎体部分切除减压短节段固定术治疗胸腰椎爆裂骨折
目的 探讨前路椎体部分切除减压短节段内固定术治疗胸腰椎爆裂骨折的手术方法和临床疗效.方法 本院收治的Altas分类B型胸腰椎爆裂骨折12例患者(18～43岁),行骨折椎体上1/4～1/2切除、椎管减压、短节段内固定融合手术治疗.结果 所有病例脊髓均获有效减压,椎管恢复有效容积,手术时间为(172±33)min,手术中出血量为(435±53)ml,术后随访6个月至3年,未有脊柱后凸畸形及钢板螺钉断裂、松动、腰痛等并发症.脊柱畸形矫正均为近解剖复位,12例均获骨性融合.结论 前路椎体部分切除减压、相邻椎体融合、短节段内同定术治疗胸腰椎Altas B爆裂骨折,脊髓减压彻底,脊柱畸形矫正,重建脊柱稳定,恢复了脊柱生理曲线,减少相邻节段退变的机会.
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高效液相色谱串联质谱联用法测定培养基中丝裂霉素C残留量
目的 建立液相色谱-电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定培养基中丝裂霉素C残留量的方法.方法 培养基样品经乙腈直接沉淀蛋白后,采用Thenno Hypurity C18柱(2.1 mm×150 mm,5μm)分离,流速为0.2 ml/min,以乙腈:0.1%甲酸=40:60为流动相等度洗脱.通过电喷雾离子源进入质谱,以二级质谱多反应监测(MRM)方式进行检测.结果 丝裂霉素的线性范围分别为0.098～50 ng/ml,低检测浓度为0.098 ng/ml,平均相对回收率在91.30%～105.46%范围内,日内和日间精密度<15%.结论 本法简单、快速、灵敏、重现性好,可用于丝裂霉素C的培基中残余量的测定和监控.
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登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒.方法 RT-PCR扩增NSI-NS2a基因片段后,将其克隆人真核表达载体pReceiver-M01a;过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒.结果 经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-NS1-NS2a;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示细胞质中有登革2型病毒特异性蛋白的表达.结论 成功构建了真核表达质粒pRe·NS1-NS2a.
