第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究
目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.
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脂肪细胞谷氨酰胺合成酶抑制结肠癌细胞的腹腔转移及血管生成
目的 探讨脂肪细胞谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)对结肠癌腹腔转移及血管生成的影响.方法 转基因小鼠的鉴定:Western blot检测野生型(WT)小鼠及脂肪细胞GS转基因(TgGs)小鼠脂肪细胞GS蛋白的表达.体内实验:分别构建WT小鼠及TgGs小鼠的腹腔转移模型,观察结肠癌细胞在腹腔的种植情况;免疫组化检测移植瘤的血管生成情况.体外实验:取WT及TgGS小鼠的脂肪进行无菌培养,收集条件培养基;通过小管形成实验、CCK8实验、Transwell实验观察条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的小管形成、增殖及迁移的影响.结果 Western blot检测结果显示,TgGs小鼠较WT小鼠脂肪细胞GS蛋白水平显著上调(P＜0.05).TgGs小鼠较WT小鼠腹腔移植瘤数量明显减少[(6.33±4.04)vs(16.00±6.56),P＜0.05],体积明显减小[(2.35±1.93)vs(9.37±5.07),P＜0.01].免疫组化结果显示,TgGs小鼠肿瘤血管生成明显少于WT小鼠(P＜0.05).体外小管形成实验显示TgGs组较WT组HUVECs小管形成总长度明显缩短(P ＜0.05);CCK8实验显示TgGs组及WT组HUVECs的增殖差异无统计学意义(P＞0.05);Transwel实验显示TgGs组HUVECs细胞迁移数量明显少于WT组[(15.33±5.50)vs (78.33 ±13.58),P＜0.01].结论 脂肪细胞GS可抑制结肠癌腹腔转移及肿瘤血管生成.
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鲍曼不动杆菌噬菌体SWH-Ab-1分离鉴定及其重要功能基因的生物信息学分析
目的 分离鲍曼不动杆菌噬菌体,测定其基因组DNA序列,分析预测穿孔素和裂解酶等重要功能基因及其编码蛋白的性质和功能.方法 利用双层琼脂平板法从医院污水中分离鲍曼不动杆菌噬菌体,透射电子显微镜观察噬菌体的形态特征;提取噬菌体基因组DNA,采用Illumina Hiseq2000测序仪进行全基因组测序;利用生物信息学方法对噬菌体基因组DNA序列进行功能编码基因定位、同源性分析以及对噬菌体重要功能基因编码蛋白的结构和生物功能等进行预测.结果 成功从医院污水中分离获得1株鲍曼不动杆菌噬菌体,命名为噬菌体SWH-Ab-1.噬菌体SWH-Ab-1属长尾噬菌体,对鲍曼不动杆菌具有显著裂解性.噬菌体SWH-Ab-1基因组为全长41 567 bp的双链DNA,G+C％含量为39.42％,包含51个预测功能基因,穿孔素基因和裂解酶基因分别位于噬菌体基因组的ORF02(320 ～655 bp)和ORF03(642～1 199 bp)开放阅读框,穿孔素基因序列全长336 bp,共编码111个氨基酸,其编码的HolSA1为疏水性Ⅰ型跨膜蛋白,相对分子质量为11.957 96×103,理论等电点为4.87,可能在脂肪酸代谢、转运载体及信号转导中发挥重要作用.裂解酶基因序列全长558 bp,共编码185个氨基酸,其编码的LysSA1为亲水性蛋白,相对分子质量为21.010 4×103,理论等电点为9.56,无跨膜区,可能参与氨基酸生物合成、脂肪酸代谢、辅因子生物合成等重要生理过程.两种功能蛋白均不存在信号肽序列,二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主.结论 噬菌体SWH-Ab-1是一种新分离的长尾裂解性噬菌体,其基因组的ORF02和ORF03开放阅读框是穿孔素和裂解酶的编码基因,编码的HolSA1和LysSA1可能组成“二元裂解系统”,协同参与噬菌体对宿主菌的裂解过程.
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单壁碳纳米角+空心纳米铂链复合物的类夹心免疫新型穿孔素适配体电化学传感器的构建
目的 构建一种基于单壁碳纳米角(single-walled carbon nanohorns,SWCNHs)与空心纳米铂链(hollow Pt chains,HPtCs)复合物(SWCNHs@HPtCs)的电化学适配体传感器.方法 将单壁碳纳米管(single-wall carbon nanotubes,SWCNTs)溶液滴加在洁净的玻碳电极上(glassy carbon electrode, GCE),使之在电极表面形成一层膜,通过循环伏安法(cyclic voltammetry,CV)在电极表面电沉积纳米金(Au nanoparticles,AuNPs),得到AuNPs/SWCNTs/GCE.进一步通过金硫键将穿孔素适配体固载在电极表面.制备SWCNHs@HPtCs复合物,固载穿孔素抗体和氨基二茂铁(aminoferrocene,AFc),当目标物穿孔素存在时,可与适配体和抗体形成夹心结构,使标记有AFc的SWCNHs@HPtCs复合物连接到电极表面,通过示差脉冲伏安法(differential pulse voltammetry,DPV)检测AFc还原峰电流值变化,实现对穿孔素的定量检测.结果 成功制备了SWCNHs@HPtCs复合物.反应底液的佳pH值为6.5,复合物佳孵育时间为60 min.在优化实验条件下,连续扫描50圈,峰电流值下降6.3％.穿孔素浓度在1～20 nmol/L范围内与DPV峰电流值呈良好的线性关系,检出限为0.56 nmol/L.结论 该电化学传感器具有电流响应快,灵敏度高,稳定性好,选择性好的特点,可应用于穿孔素的检测.
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二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积与线粒体融裂基因变化的关系
目的 探讨肝脏线粒体融裂相关基因表达变化在二氢杨梅素抑制高脂喂养小鼠肝脏脂肪蓄积中的可能作用.方法 45只6周龄C57BL/6J雄性小鼠,按随机数表法分为普通饲料组(CON),高脂饲料组(HFD)和高脂加二氢杨梅素组(HFD+ DHM),每组15只,干预12周.检测小鼠体质量、肝脏指数、血清生化指标;分别采用HE染色和油红O染色观察肝细胞脂肪变性和脂滴数量与形态.使用增强型ATP试剂盒检测肝脏ATP含量;采用荧光定量PCR和Western blot分别检测肝脏线粒体融合与分裂相关基因[动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、分裂蛋白1(fission 1,Fis1)、融合蛋白2(mitofusion 2,Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy1,Opa1)]的mRNA及蛋白表达.结果 与CON组相比,HFD组小鼠体质量、肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素水平、甘油三酯、总胆固醇、低密度胆固醇明显增高(P＜0.05),肝脏ATP含量显著降低(P＜0.05),HE染色见明显的肝内脂肪空泡和肝细胞气球样变,油红O染色见大量的脂滴蓄积,肝脏组织Fis1、Drp1 mRNA和蛋白表达显著增高(P＜0.05),而Mfn2、Opa1明显降低(P＜0.05).二氢杨梅素干预显著抑制高脂喂养诱导的肝脏指数、空腹血糖、空腹胰岛素和血甘油三酯的升高,肝脏脂肪蓄积以及肝脏ATP含量的降低,并且明显拮抗高脂诱导的线粒体分裂与融合基因mRNA和蛋白的表达水平变化.结论 二氢杨梅素可明显改善高脂喂养小鼠肝脏的脂肪蓄积,该效应可能与其调节肝脏线粒体的融合与分裂有关.
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GP73通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡
目的 探讨高尔基蛋白73(GP73)对乳腺癌细胞MCF-7的增殖、凋亡的影响及相关机制.方法 利用干扰及过表达GP73质粒转染乳腺癌细胞MCF-7,并利用CCK-8检测处理后细胞的增殖能力,利用流式细胞术方法检测处理组细胞的凋亡水平,利用qRT-PCR和Western印迹法测定GP73和p53 mRNA和蛋白的表达.采用qRT-PCR测定20例临床乳腺癌和癌旁组织中GP73和p53的mRNA水平,并分析乳腺癌组织中GP73和p53的mRNA水平的相关性.结果 过表达GP73后MCF-7较对照组增殖能力上升(P＜0.05),凋亡水平下降(P＜0.05);干扰GP73后MCF-7增殖能力下降(P＜0.05),凋亡率升高.同时过表达GP73和p53的乳腺癌细胞较单独过表达GP73的MCF-7细胞的增殖能力下降,凋亡水平上升.乳腺癌组织中GP73和p53 mRNA表达也呈负相关(r=-0.528,P＜0.01).结论 GP73可能通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡.
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铁离子通过ROS-乙酰化P53促进巨噬细胞M1型极化
目的 探讨铁离子在促进巨噬细胞向促炎型表型(经典激活型,M1)极化的具体机制.方法 Western blot、qRT-PCR、流式细胞术(FCM)、组织免疫荧光、ROS探针(DCFH-DA)分别检测巨噬细胞极化指标(IL-1β、TNF-α、IL-10、TGF-β、CD86及CD206等)、p53、乙酰化p53和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过还原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)和P300/CBP乙酰化转移酶抑制剂(C646)分别处理巨噬细胞后,观察巨噬细胞的极化状态;通过皮下注射H22肝癌细胞,建立BALB/c裸鼠皮下H22肝癌细胞模型,给予铁剂处理后,观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)极化状态.结果 铁剂处理促鼠源性巨噬细胞(RAW 264.7)向M1型极化并高表达乙酰化P53(P ＜0.05);抑制p300/CBP乙酰化转移酶,能够明显抑制p53乙酰化、减弱M1极化效应(P＜0.05);小鼠皮下瘤模型中,经铁剂处理后,小鼠皮下瘤组织中CD86高表达、CD206低表达,并有更多的ROS产生.结论 细胞内铁过载促巨噬细胞向M1型极化,其机制可能与ROS产生,提高p300/CBP乙酰化转移酶活性,促进p53乙酰化有关.
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水通道蛋白9在2型糖尿病大鼠肝脏中的表达变化
目的 探讨水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)在2型糖尿病(T2DM)鼠肝脏中的表达情况及其可能的调控机制.方法 采用高脂高糖饲养联合低剂量链脲霉素诱导T2DM模型;通过HE染色法检测不同组SD大鼠肝脏的形态学改变;免疫荧光染色法观察不同组大鼠肝脏中AQP9的分布情况;Western blot检测不同组大鼠肝脏中AQP9和MAPK蛋白水平的表达变化.结果 相较于对照组,HE染色显示,2型糖尿病鼠的肝脏细胞排列混乱,细胞间隙增宽,细胞水样变性显著,水肿明显,伴随大量炎性细胞浸润;免疫荧光显示,水通道蛋白9在对照组表达较少,而在糖尿病组大量表达,主要呈环形集中分布在肝细胞朝向肝血窦面的细胞膜上;Western blot分析表明,糖尿病组肝脏AQP9的表达水平明显升高(P＜0.05),p-JNK/JNK的表达升高(P＜0.05),p-p38/p38的表达下降(P＜0.05),p-ERK/ERK的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AQp9的表达水平在T2DM鼠肝脏中显著上升,高糖环境下p38-MAPK,JNK-MAPK可能对AQP9的表达具备调控作用.
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HBV+肝细胞癌患者lncRNA-mRNA共表达网络分析及作用
目的 分析乙型肝炎病毒阳性(HBV+)肝细胞癌患者肝组织长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和信使RNA(messenger,mRNA)的共表达网络,探讨关键lncRNA的作用.方法 下载GEO(GSE54238) lncRNA/mRNA表达谱芯片数据,通过生物信息数据分析方法获得不同临床进展阶段的肝细胞癌患者与正常人均具有显著差异的肝组织lncRNA、mRNA表达谱,并构建被DNA元素百科全书数据库(Encyclopedia of DNA Elements,ENCODE)收录的差异lncRNA-mRNA共表达网络.继而分析共表达网络中的mRNA参与的GO、KEGG;并分析与核心lncRNA高度相关的mRNA与患者生存曲线的相关性.结果 与5个ENCODE收录的差异lncRNA具有共表达关系的mRNA共有81个(相关系数＞0.90).lncRNA-mRNA共表达网络中的mRNA主要参与的GO通路有氧化还原、呼吸电子链传递和脂肪酸代谢过程;KEGG信号通路主要有脂肪酸降解、过氧化物酶体增殖物激活受体和p-丙氨酸代谢.与核心LINC01018(又名SRHC)、EHHADH-AS1和F11-AS1高度相关的mRNA SLC2A2、PCK2、EHHADH、F11、FM04和NR1 I3与患者生存曲线具有极显著相关性(P＜0.01).结论 LINC01018、EHHADH-AS1、F11-AS1等lncRNA居于LncRNA-mRNA共表达网络的核心位置,在HBV+肝细胞癌发生、发展中具有关键作用,有望成为HBV+肝细胞癌新的诊断和预后指标.
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醋甲唑胺对小鼠的抗缺氧效能及在预防人群急性高原反应中的作用研究
目的 研究醋甲唑胺(Methazolamide,MTZ)的抗缺氧效应及其在预防急性高原反应中的作用.方法 小鼠灌胃给予MTZ后,通过密闭缺氧实验、心肌缺氧实验、大脑缺血缺氧实验、亚硝酸钠中毒实验,分别检测小鼠密闭缺氧状态下的标准耐受时间、小鼠心肌缺氧标准耐受时间、断头处死后张口动作持续时间、亚硝酸钠中毒后存活时间等指标.在高原现场比较志愿者口服MTZ或安慰剂后,急性高原病的发病率、血氧饱和度及心率.结果 MTZ 400、200、100 mg/kg组的小鼠密闭缺氧状态下的标准耐受时间均显著高于对照组[25.01 (2.40)、21.11 (4.64)、16.39(5.14)vs14.62(3.62) min/100 mL,P＜0.05].同时,200 mg/kg的MTZ还可以显著延长小鼠心肌缺氧标准耐受时间[(13.08±1.35)min/100 mLvs(8.30±0.94) min/100 mL,P＜0.01]和断头处死后张口动作持续时间(43.22±8.23)s vs(20.44±2.60)s,P＜0.01].人群试验表明MTZ显著降低急性高原病的发病率(19.4％ vs 3.45％,P＜0.05),并显著提高急进高原人群的血氧饱和度[85％(4％)vs87％(3.5％),P ＜0.05],降低心率[100(17)/minvs90(21.5)/min,P＜0.05].结论 MTZ可显著提高机体抗缺氧能力,能有效预防急性高原病.
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口腔鳞癌相关成纤维细胞糖代谢的初步研究
目的 通过对口腔鳞癌相关成纤维细胞(carcinoma-associate fibroblasts,CAFs)糖代谢相关指标的检测,探讨肿瘤微环境CAFs糖代谢的可能方式并分析其作用和意义.方法 培养CAFs和癌旁正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),詹纳斯绿B染色观察线粒体的数量及分布,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位的改变.培养1、2、3、4d,通过定磷法用可见分光光度计检测细胞中ATP的含量,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测细胞摄取葡萄糖的能力,乳酸酶法检测细胞分泌乳酸情况.结果 与NFs组相比,CAFs线粒体詹纳斯绿B和JC-1荧光染色强度明显下降,显示CAFs线粒体活性下降.随着培养时间的延长,CAFs较NFs组摄取葡萄糖增多,ATP产能却减少,分泌乳酸增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);以培养第4天差异更明显,CAFs和NFs组培养基葡萄糖浓度分别为(10.85 ±1.42)、(16.04±1.09) mmol/L,产生ATP浓度分别为(42.99 ±4.64)、(57.37±2.75) μmol/g,产生乳酸浓度分别为(12.1±0.81)、(7.06±0.95) mmol/L.结论 口腔鳞癌CAFs细胞糖代谢方式发生了改变,以糖酵解为主.
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经自然腔道内镜外科手术在不明原因腹水诊断中的价值
目的 探讨经自然腔道内镜外科手术(natural orifice transluminal endoscopic surgery,NOTES)在不明原因腹水诊断中的应用价值.方法 收集2015年1月至2017年3月在我科住院的行NOTES术诊断(11例)及行腹腔镜术诊断(12例)不明原因腹水患者的病历资料,比较两组患者确诊率、术后疼痛、术后并发症、住院至手术时间、住院费用等,并进行统计学分析,评价两种诊断方法在不明原因腹水中的价值.结果 23例不明原因腹水患者行NOTES术及诊断性腹腔镜手术后均获确诊,两组患者术后均未出现出血、穿孔、感染等并发症,行NOTES术患者术后疼痛VAS评分显著低于诊断性腹腔镜手术组(P ＜0.05);NOTES术组患者的住院时间、住院费用显著低于诊断性腹腔镜组(P＜0.05).结论 NOTES术在不明原因腹水的确诊率与诊断性腹腔镜探查术相当,可显著降低患者术后疼痛、缩短住院时间、减少住院费用.
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多功能经颅骨颅内穿刺针持续颅内压监测指导颅脑创伤手术丙泊酚麻醉用量
目的 探讨以自行设计的“多功能经颅骨颅内穿刺针(专利号:ZL 2008 2 0100454.6)”持续颅内压监测,指导颅脑创伤手术丙泊酚全身麻醉的临床效果.方法 采用前瞻性随机对照研究设计,筛选重庆市急救中心2013年5月至2016年8月68例颅脑创伤手术患者.其中男性37例,女性31例,年龄(46.3±25.8)岁,体质量(63.7 ±5.6)kg.按随机数字表法分为常规组和试验组(n=34),根据动态监测脑灌注压(cerebral perfusion pressure,CPP)和颅内压(intracranial pressure,ICP)以调整丙泊酚使用.术前利用多功能经颅骨颅内穿刺针行快速颅内压监测颅内压(ICP)、脑灌注压(CPP);比较两组患者麻醉前(T0)、诱导后(T1)、手术1h(T2)、手术2 h(T3)、手术结束前10 min (T4)患者SBP、DBP、MAP、ICP、CPP的变化.结果 在麻醉诱导前两组SBP、DBP、MAP、ICP、CPP指数均无明显差异(P＞0.05);在T2和T3,常规组SBP、DBP、MAP、ICP、CPP下降的程度相对于试验组更加显著(P＜0.05).结论 多功能经颅骨颅内穿刺针在颅脑创伤手术中可有效地监测ICP、CPP改变并能指导丙泊酚的使用,有一定的临床推广价值.
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现代战伤救治系统概述及其对我军战伤救治的启示
Combat casualty care (CCC) system refers to combining a series of interconnected and constrained elements to form an organic whole to ensure order and high-efficient organization of CCC.U.S army had gradually established a sophisticated CCC system,Joint Theater Trauma System (JTTS) in recent war on terror.JTTS helped to reduce the case fatality rate from 19.1％ in World War Ⅱ to historically lowest level (6.0％) till now.The key components of JTTS include ①) administrative components;② a whole and higheffective CCC chain,of which techniques and strategies had been developed according to the demands in each point of CCC chain,such as CCC strategies,et al;③ studies on CCC,including combat theater-based human research protection program,et al.These experiences are very helpful for the construction and organization of CCC of our armed force.For example,we should further optimize the CCC chain and organization,improve our studies in the combat theater-based aspect,and promote military-civilian integration and collaboration in this subject.Thus,we can build a CCC system of our armed force under the modern war,and then improve the rescue rate of casualties in future war.
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基于动物实验的地面坚固工事伤亡特点研究
目的 通过统计分析动物实验数据,研究地面坚固工事伤亡特点.方法 提取武器杀伤生物效应评估实验资料,根据工事毁损状态对实验动物进行分类,通过统计软件对伤亡动物的存活状态、损伤程度和损伤类型,受伤动物的各部位损伤特点进行分析.结果 共160只伤亡山羊被纳入研究,其中69只(43.12％)即刻死亡,91只(56.88％)受伤,伤亡动物新的损伤严重程度评分(new injuryseverity score,NISS)得分为(15.90±13.96)分,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型爆炸伤各占68.75％、63.13％、9.38％、10.91％;91只受伤动物中有33只出现脑损伤,63只出现面部感觉器官损伤,55只出现胸腔器官损伤,27只出现腹腔器官损伤.结论 在地面坚固工事内,即刻死亡动物主要损伤类型为Ⅱ型爆炸伤,受伤动物主要损伤类型为Ⅰ型爆炸伤.在受伤动物中,闭合性损伤出现频率比开放性损伤高,耳、肺是其主要损伤器官.
