第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9分泌的影响
目的 建立体外破骨细胞(osteoclasts,OCs)诱导分化模型,研究CD147对体外破骨细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)合成与分泌的影响.方法 采用健康成人外周血分离单个核细胞贴壁培养,应用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)与NF-κB受体活化因子配体(receptor or activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导单个核细胞向Ocs分化.实验分为对照组(RANKL+M-CSF)与蛋白诱导组(RANKL+M-CSF+CD147蛋白).应用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)及骨吸收实验检测鉴定OCs的分化成熟,Real-time PCR技术检测CD147、MMP-2和MMP-9 mRNA在破骨前体细胞(osteoclast precursor cells,OPCs)中表达变化,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中MMP-2、MMP-9的表达.结果 ①TRAP染色和骨吸收实验检测到破骨样细胞形成并具有骨吸收功能,建立体外Ocs诱导分化模型成功.②在24、48 h蛋白诱导组CD147 mRNA [(1.344±0.207)、(1.816±0.222)]、MMP-2 mRNA[(1.187±0.077)、(1.437±0.231)]及MMP-9 mRNA [(1.128±0.107)、( 2.353±0.679)]的相对表达量均高于相应的对照组(P<0.05),且MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量与CD147 mRNA的表达量呈正相关(r分别为0.818、0.758,P<0.01).③24、48 h蛋白诱导组MMP-2蛋白[(386.71±40.66)、(367.35±20.72)μg/L]、MMP-9蛋白[(1 177.78±66.42)、(1 514.37±68.56)μg/L]表达均高于相应对照组(P<0.05),蛋白诱导组MMP-2蛋白的表达在24 h与48 h间无统计学差异(t=1.190,P>0.05),而MMP-9蛋白的表达在48 h显著高于24 h(t=7.589,P<0.05).结论 外源性CD147蛋白可以促进OCs分化成熟过程中MMP-2 及MMP-9的合成与分泌,但MMP-2分泌的增加不呈时间依赖性.
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猪源生物型人工心包可行性及疗效的实验研究
目的 探讨用生物材料进行心包修复重建的可行性及疗效.方法 对6只中国杂种犬进行右侧开胸,切除直径为8 cm类圆形心包,用生物材料人工心包进行修复重建.术后2周、1个月、3个月、6个月、1年、2年分别进行心脏彩超检查,观察有无粘连、积液、破损及增厚钙化.术后1年及2年各解剖2只动物,分别进行大体检查,观察人工心包的内外表面、组织的柔韧性及生物膜性组织有无钙化、增厚;进行组织学检查,观察内膜组织构成及完整性,了解纤维结缔组织层有无血管形成及神经纤维长入.余下2只进行长期观察,以预测人工心包长期置入体内的可能性及转归.结果 6例动物全部长期存活,心脏彩超动态随访观察未发现人工心包有破损、积液、粘连及钙化增厚等情况发生,大体观察见人工心包浆膜层光滑、无粘连,人工心包与犬正常心包连接处内光滑,无接痕;组织学检查发现人工心包内膜与正常心包已无缝连接,组织结构相同,在人工心包内见到血管及神经纤维结构.结论 猪源生物型人工心包是一种优质心包重建材料,置入机体后具有自体化倾向.
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2006-2009年重庆市男男性行为人群HIV感染者情况分析
目的 了解男男性行为人群(man who have sex with men,MSM)人群中HIV感染者的特征及艾滋病相关因素的变化趋势,为MSM人群干预提供针对性的建议.方法 对2006-2009年4次横断面调查发现的HIV感染者的资料进行统计分析,比较趋势变化.结果 2006-2009年发现的HIV感染者呈现低龄化,未婚比例、大专及以上文化程度感染者的比例及学生所占比例呈上升的趋势.近1次与男性发生肛交时安全套使用率由2006年的48.4%上升至2009年的68.0%,近6个月与男性发生肛交时每次都使用安全套的比例由2006年的17.2%上升至2007年的34.9%(P=0.016),梅毒感染率由2006年的16.3%上升至2009年的27.0%.2006-2009年接受干预服务的比例均低于40%.结论 MSM人群中的HIV感染者呈现低龄化、安全套使用率及接受干预服务比例低,合并梅毒感染率高,急需对MSM人群及其感染者开展更具针对性的干预工作.
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insig-1基因siRNA干扰质粒的构建及对炎症状态下细胞胆固醇代谢的影响
目的 构建针对insig-1 基因的siRNA 表达载体,观察其对炎症状态下RAW264.7小鼠巨噬细胞胆固醇代谢的影响.方法 根据insig-1核苷酸序列,设计并构建针对insig-1 基因mRNA的3个特异性siRNA表达载体(si-1、si-2、si-3)和1个无同源性的阴性对照载体(si-nc),经酶切和测序鉴定确认 siRNA 载体构建成功后,转染RAW264.7小鼠巨噬细胞,RT-PCR、免疫组化法检测insig-1 基因的表达,筛选出佳抑制基因后,应用酶学方法 和油红O 染色观察炎症处理后RAW264.7细胞内胆固醇含量的变化.结果 经酶切证实,siRNA表达载体构建成功,RT-PCR、Western blot、免疫组化法显示与未转染组相比,si-1、si-2、si-3组RAW264.7细胞中insig-1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),其中si-2干扰效果强.酶学方法 和油红O 染色结果 表明,炎症状态下细胞insig-1沉默后胆固醇的含量和油红O 颗粒增多.结论 成功构建了insig-1基因 siRNA干扰质粒,insig-1缺失对炎症状态下细胞胆固醇摄取有促进作用.
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骨保护素抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应
目的 运用小鼠植骨气囊模型,研究骨保护素(osteoprotegerin,OPG)减少破骨细胞骨破坏的吸收效应.方法 在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内制作气囊模型.实验分成3组:空白组(气囊内注入生理盐水)、颗粒组(气囊注入聚乙烯颗粒和生理盐水)、OPG组(气囊内注入聚乙烯颗粒和OPG).3周后取囊壁和植入颅骨组织进行HE染色检测炎症反应情况及炎症细胞渗出量;取组织匀浆液应用ELISA方法 检测炎性细胞因子IL-1、TNF-α浓度;抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞的分化成熟情况及应用扫描电镜检测骨片吸收情况.结果 ①HE染色检测炎症细胞渗出量:颗粒组[(3 812±628)个/视野]与OPG组[(3 665±297)个/视野]明显多于空白组[(1 820±598)个/视野,P<0.05].②ELISA法检测炎性细胞因子IL-1、TNF-α浓度:颗粒组[IL-1、TNF-α浓度分别为(210.57±4.26)、(188.36±7.33)pg/ml]与OPG组[IL-1、TNF-α浓度分别为(198.59±6.90)、(179.28±2.11)pg/ml]明显多于空白组[IL-1、TNF-α浓度分别为(138.34±2.32)、(156.14±4.17)pg/ml,P<0.05].③抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性区域面积与视野面积的百分比:颗粒组[(4.34±1.53)%]明显多于空白组[(0.89±0.12)%,P<0.05];OPG组[(0.96±0.55)%]与颗粒组相比,明显减少(P<0.05).④应用扫描电镜检测骨片吸收陷窝面积与视野面积的百分比:颗粒组[(14.58±2.68)%]明显多于空白组[(3.09±0.62)%,P<0.05].OPG组[(3.25±0.78)%]与颗粒组相比,有统计学差异(P<0.05).讨论成功建立小鼠植骨气囊模型,并证实OPG对于聚乙烯颗粒所引起的炎症反应并未起到明显抑制作用,但OPG能抑制破骨细胞的分化成熟,有效减少聚乙烯磨损颗粒所致的骨吸收效应.
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PARG抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达调控的初步研究
目的 初步探讨多聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶[poly-(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]抑制对小鼠结肠癌CT26细胞VEGF-C蛋白表达影响.方法 分为实验组(GLTN处理)与对照组(GLTN未处理),采用Western blot法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞的PARG、PARP-1、NF-κB及VEGF-C的蛋白表达变化;RT-PCR分析实验组与对照组的VEGF-C mRNA水平变化;ELISA法检测2组小鼠结肠癌CT26细胞上清液VEGF-C蛋白表达变化.结果 PARG抑制后小鼠结肠癌CT26细胞表达的PARG和NF-κB蛋白较对照组下降(P<0.01),PARP-1和VEGF-C蛋白较对照组降低(P<0.01).RT-PCR结果 显示,实验组CT26细胞株VEGF-C mRNA表达[相对灰度值为(0.39±0.08)]较对照组[相对灰度值为(0.63±0.04)]显著下降(P<0.01).实验组小鼠结肠癌CT26细胞分泌的VEGF-C蛋白量 [(95.86±5.43)pg/ml]较对照组[(1 99.32±0.75)pg/ml]明显降低(P<0.05).结论 在小鼠结肠癌CT26细胞中,抑制PARG可下调 PARP-1和 NF-κB的表达,从而使VEGF-C表达下降,这可能在抑制肿瘤淋巴管形成中起重要作用.
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人膝关节交叉韧带血供的显微解剖学研究
目的 探讨人类膝关节交叉韧带血供系统的具体形态.方法 对12侧交叉韧带健康成人尸体膝关节进行肉眼和手术显微镜下解剖、组织学断层切片观察.结果 交叉韧带全段均可见血管纵行交错分布,血管口径呈节段性变化,血管口径(0.03±0.01)～(0.09±0.02)mm.交叉韧带间束中存在大量的血管及脂肪组织,其表面血管口径大为(0.18±0.04)mm.结论 交叉韧带本身拥有足够充分的血供来源,存在自我修复的可能.
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cFLIP反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞SW620的增殖
目的 研究cFLIP反义寡核苷酸(cFLIP-asODN)对人结肠癌细胞株SW620细胞增殖的影响.方法 利用脂质体将cFLIP-asODN转染入SW620细胞,并设空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组作为对照.荧光倒置显微镜检测复合物对细胞的转染效率;荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中cFLIP mRNA和蛋白的表达水平的变化;MTT法分析复合物对SW620细胞增殖的影响;流式细胞术分析转染后细胞凋亡情况.结果 与空载体+cFLIP-asODN转染组、脂质体+无意义ODN转染组和空白对照组相比,脂质体递送cFLIP-asODN进入细胞后,SW620细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05);转染cFLIP-asODN后,SW620细胞中的cFLIP mRNA和蛋白的表达水平降低(P<0.05);且细胞凋亡率(29.5±2.4)%也明显高于空载体+cFLIP-asODN转染组(5.8±0.7)%、脂质体+无意义ODN转染组(5.5±0.8)%和空白对照组(5.2±0.5)%(P<0.05).结论 通过在体外转染cFLIP-asODN可有效抑制结肠癌细胞株SW620的增殖.
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PPAR-γ和PTEN在肝细胞癌组织中的表达及预后价值
目的 探讨人肝细胞癌组织中PPAR-γ和PTEN蛋白的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法 检测78例肝细胞癌及21例正常肝组织中PPAR-γ和PTEN蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征及预后的关系.结果 肝细胞癌组织中PPAR-γ蛋白的阳性表达率为51.3%,显著高于正常肝组织(19.0%,P<0.05),PTEN蛋白的高表达率为42.3%,显著低于正常肝组织(90.5%,P<0.05).PPAR-γ蛋白的表达与肿瘤直径、门静脉癌栓及TNM分期有关(P<0.05);PTEN蛋白的表达与肿瘤直径、门静脉癌栓、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05,P<0.01).PPAR-γ与PTEN蛋白表达无明显相关性(r=-0.100,P=0.384).PTEN蛋白低表达患者术后生存率低于高表达患者(P=0.000);PPAR-γ蛋白的表达与患者术后生存率无关(P=0.175).COX模型多因素分析结果 显示,TNM分期是影响肝细胞癌预后的独立因素.结论 肝细胞癌组织中PPAR-γ和PTEN蛋白的表达水平与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,PTEN有助于评价患者预后.
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应用高浓度Ⅱ型胶原蛋白构建组织工程软骨支架
目的 构建有利于种子细胞黏附、增殖和分化的软骨组织工程海绵支架.方法 依据天然软骨主要成分,提取透明软骨Ⅱ型胶原蛋白,将提取的胶原蛋白通过高速离心进行浓缩,真空冷冻干燥制得海绵支架材料,应用化学交联剂EDC/NHS进行化学交联,对支架采用组织化学染色、体外降解实验、扫描电镜和接种细胞静态培养的方法 进行相关检测.结果 支架具有良好的孔隙结构,孔径40～130 μm,孔隙率在90%以上,细胞在支架上增殖、分化良好.结论 构建的高浓度Ⅱ型胶原蛋白海绵支架具有良好的生物相容性,有较好的应用前景.
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微创人工关节置换治疗髋关节强直
目的 探讨微创全人工关节置换治疗髋关节强直的疗效.方法 2006年6月至2009年7月,13例(21髋)髋关节强直患者在微创入路下行人工全髋关节置换,年龄20～66岁(平均46岁),病因为:强直性脊柱炎5例(10髋),类风湿性关节炎4例(6髋),股骨头无菌性坏死继发严重骨性关节炎2例(3髋),髋关节感染后遗强直畸形2例(2髋).患者患髋均无活动度,均选用生物型人工关节,13髋为解剖头金属对金属界面,8髋为陶瓷对陶瓷界面.结果 手术顺利,手术时间(80±12)min(短60 min),术中出血量(380±156)ml.所有患者术后获得随访,随访时间12～48个月,术后X线评价人工关节位置良好,术中无骨折,术后无假体松动、关节脱位、感染及深静脉栓塞等并发症.Harris评分由术前(45.6±6.2)分升到术后至后1次随访(86.6±7.3)分,差异有统计学意义(P<0.05).结论 对于外展肌功能存在的髋关节强直患者行微创人工关节置换,能有效改善髋关节功能,提高患者生活质量,创伤小,恢复快.
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沉默供体肝脏内核糖体蛋白S3基因减轻大鼠移植肝脏缺血再灌注损伤
目的 采用 RNA干扰技术沉默供体肝脏内核糖体蛋白S3(ribosomal protein S3,RPS3)基因的表达,观察其对核转录因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的影响以及对肝移植后早期缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建以腺病毒(Ad)为载体的RPS3基因特异性短发夹RNA(shRNA)表达颗粒,按随机数字表法将实验大鼠分为3组:Ad-RPS3-shRNA组、空白腺病毒对照组(空白对照组)、生理盐水对照组(NS对照组).于肝移植前48 h分别用Ad-RPS3-shRNA颗粒、空白腺病毒载体、生理盐水处理3组供体大鼠.收集血液及肝脏组织检测血清转氨酶、血浆炎症因子水平、肝脏组织病理改变、炎症因子mRNA、肝组织提取物中NF-κB活性和表达水平指标的变化.结果 肝移植后恢复灌注3 h Ad-RPS3-shRNA组大鼠血清ALT水平(725.9±67.3)U/L、AST水平(863.7±72.7)U/L,血浆TNF-α水平(223.7±16.8)ng/L、IL-1β水平(242.5±18.7)ng/L、ICAM-1水平(258.4±24.9)ng/L,Suzuki评分(3.72±0.31),肝组织mRNA水平:TNF-α(0.252±0.026)、IL-1β(0.217±0.028)、ICAM-1(0.226±0.017)、RPS3(0.094±0.007),肝组织NF-κB蛋白水平(0.216±0.022)及其活性(92.4±9.5)均显著低于空白对照组和NS对照组(P<0.01),而空白对照组、NS对照组比较无统计学差异(P>0.05);恢复灌注12 h Ad-RPS3-shRNA组各检测指标与3 h变化趋势相同.结论 沉默供体肝脏内RPS3基因可显著降低肝脏细胞NF-κB活性和表达量,从而降低炎症因子表达,有效减轻肝移植后早期缺血再灌注损伤.
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支气管哮喘患者外周血、痰液中IL-33的含量及其相关性分析
目的 检测支气管哮喘患者外周血和痰液中IL-33的含量,探讨其含量与患者症状、肺功能、血液和痰液中嗜酸性粒细胞数的关系.方法 ELISA法检测80例支气管哮喘患者及20例正常对照者外周血中IL-33的含量,对哮喘患者行24 h症状评分和肺功能测试,依据FEV1将支气管哮喘患者分为3组:FEV1≥80%为轻度哮喘组,60%≤FEV1＜80%为中度哮喘组,FEV1＜60%为重度哮喘组,并记录哮喘患者外周血中嗜酸性粒细胞数.ELISA法检测18例哮喘患者和8例正常对照者痰液中IL-33的含量,显微镜下计数其痰液中的嗜酸性粒细胞数.结果 外周血IL-33水平在正常对照组和轻度哮喘组之间无明显差异[(26.62±3.04)pg/ml vs(30.26±5.23)pg/ml,P>0.05],但中、重度哮喘组的IL-33的水平要明显高正常对照组[(41.36±11.82)pg/ml vs(26.62±3.04)pg/ml,(84.10±20.17)pg/ml vs (26.62±3.04)pg/ml,P<0.05],且与患者夜间症状评分呈正相关(r=0.317,P<0.05),而与白天症状评分和外周血嗜酸性粒细胞数无明显相关(r=0.173,P>0.05,r=0.082,P>0.05),与患者FEV1和PEF均呈明显的负相关(r=-0.638,P<0.05;r=-0.552,P<0.05).支气管哮喘患者诱导痰中IL-33的含量与痰液中嗜酸性粒细胞数目呈正相关(r=0.693,P<0.05).结论 血液中的IL-33可作为一种评价哮喘患者肺功能下降程度的指标,是哮喘患者病情恶化的促进因子.IL-33水平增高可能是诱导哮喘患者气道嗜酸性粒细胞浸润的原因之一.
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4例高IgE综合征的临床分析和基因诊断
目的 探讨高IgE综合征(hyper-IgE syndrome,HIES)的临床特征和基因诊断价值.方法 用NIH评分系统对2009年1-7月在重庆医科大学附属儿童医院就诊的4例(男性3例,女性1例)疑似HIES患儿进行评分,总分大于40分为临床诊断标准.用RT-PCR及PCR直接测序法,分析患儿STAT3基因.结果 4例患儿均有反复顽固的湿疹、肺炎、血清IgE异常增高及嗜酸性粒细胞增多.除例4外,其余3例均有反复金黄色葡萄球菌感染.例1～4 NIH评分分别为60、48、72、48分.除例4无STAT3基因突变外,例1～3均有STAT3杂合的错义突变,包括1例新型突变,2例热点突变.结论 临床诊断的4例HIES中3例有自发性STAT3基因突变,其中1例为新型突变.对临床怀疑HIES患者应进行NIH评分,超过40分者分析STAT3基因可确诊或排除常染色体显性遗传高IgE综合征.
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沉默Ku70促进PARP1、ligase3和XRCC1在DNA双链断裂染色质聚集
目的 研究碱基切除修复途径(base excision repair,BER)关键因子PARP1、ligase3和XRCC1在Ku70缺失的条件下与DNA双链断裂(double-strand break,DSB)所在染色质的结合及抑制PARP1所产生的影响.方法 采用可经药物诱导Ku70 shRNA的细胞株,以高效的DNA双链断裂诱导剂刺孢霉素calicheamicin诱导DSB.分离不同组分蛋白联合稳定同位素标记定量差异蛋白组分析法鉴定Ku70下调后在损伤染色质聚集增多的蛋白,Western blot进行验证并检测PARP1抑制剂DIQ对其染色质聚集的影响.结果 在药物Doxy作用下,Ku70明显下调,其余蛋白的表达不受影响.稳定同位素标记定量蛋白组学方法 鉴定出PARP1、ligase3和XRCC1在Ku70下调后在损伤染色质聚集增多.Western blot进行了验证并显示PARP1、ligase3和XRCC1在损伤染色质的聚集随DSB程度增加而增加.施加PARP1抑制剂DIQ,随着DIQ浓度的上升,ligase3在损伤染色质的聚集逐渐减少.结论 沉默Ku70后,PARP1、ligase3和XRCC1在DSB染色质聚集增加,这种聚集与DSB程度变化一致,并且ligase3的染色质聚集具有一定程度的PARP1依赖性.
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PTEN基因调控口腔鳞癌细胞TCA-8113增殖及凋亡
目的 评估PTEN基因在人口腔鳞癌细胞系TCA-8113中的增殖抑制和促凋亡功能.方法 利用PTEN真核表达质粒转染TCA-8113细胞,另设PBS处理作为空白组,转染pcDNA3.1质粒和Lipofectamine处理作为对照组.采用MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用流式细胞术、TUNEL和Western blot法检测细胞凋亡.结果 pcDNA3.1-PTEN转染TCA-8113细胞得到高效的外源性表达.克隆形成实验结果 表明,空白组、Lipofectamine处理组、空载体质粒组和PTEN转染组的克隆数分别为(107.34±4.62)、(79.27±3.71)、(72.03±2.38)和(19.73±1.02),PTEN转染组抑制率为72.60%,与空载体质粒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);MTT实验结果 显示PTEN基因的表达对TCA-8113细胞的抑制率在48 h和72 h分别为18.16%和42.74%,PTEN转染组与空载体质粒组比较有统计学差异(P＜0.05);流式细胞术检测结果 显示,PTEN基因能引起62.12%的细胞死亡;TUNEL检测PTEN基因高表达能引起(45.67±2.31)%的细胞凋亡;Western blot检测结果 表明,PTEN能抑制Bcl-2的表达并激活Bax的表达.结论 PTEN在TCA-8113细胞中的表达能显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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β防御素2在恶性黑色素瘤B16细胞中的稳定表达及其生物学效应研究
目的 建立稳定表达防御素mBD2的恶性黑色素瘤细胞B16-mBD2,研究mBD2对B16细胞生物学特性的影响.方法 在前期构建好mBD2真核表达质粒的基础上,脂质体法转染恶性黑色素瘤B16细胞,G418筛选得到稳定表达细胞株B16-mBD2,RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白角度鉴定mBD2分子的表达;MTT法鉴定其生长曲线;流式细胞仪分析细胞周期分布、凋亡情况及细胞膜表面分子CD80、CD86、MHCⅠ(H-2Kd)、MHCⅡ(I-Ad)的表达.结果 成功构建稳定表达mBD2的B16细胞,RT-PCR和Western blot分别从mRNA及蛋白水平验证了mBD2分子表达;稳定表达mBD2的细胞B16-mBD2与转染空载体的B16-p细胞及野生型B16细胞相比,细胞增殖明显减慢,从48 h开始,各时间点细胞活力显著降低(P<0.05);B16-mBD2细胞处于S期的比例(36.03±0.97)%显著增高(P<0.05);凋亡率及细胞膜表面分子CD80、CD86、MHCⅠ(H-2Kd)、MHCⅡ(I-Ad)表达无明显差异(P>0.05).结论 mBD2明显抑制恶性黑色素瘤B16细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期S期阻滞有关;mBD2对细胞凋亡率及细胞膜表面免疫分子的表达无影响.
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竹节参不同提取部位预处理对冠脉结扎诱导大鼠急性心肌缺血损伤的影响
目的 研究竹节参不同提取部位预处理对冠脉结扎诱导大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用.方法 将50只实验大鼠按完全随机设计分组法分为假手术组、模型组和竹节参不同提取部位组;竹节参不同提取部位组大鼠分别灌胃给予竹节参不同提取部位(乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水提部位),给药7 d后制作大鼠急性心肌缺血模型,术后12 h记录大鼠心电图,取血,分离血清后测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,取心脏组织,分别进行心肌组织2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色和HE染色.结果 竹节参的乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组和水提部位均有对抗ST段升高作用,对心肌缺血大鼠心肌梗死面积有较强的降低作用,依次为(10.7±2.4)%、(9.8±2.6)%、(11.0±2.0)% vs (14.8±3.5)%,均具有统计学差异(P<0.05),心肌炎性浸润和溶解坏死现象均有所减轻;在抗氧化损伤和降低cTnI方面,它们能明显增加SOD、GSH-Px酶活性,降低MDA和cTnI含量,与模型组比较,竹节参正丁醇部位均具有统计学差异(P<0.01),水提部位除MDA外,均具有统计学差异(P<0.05,P<0.01).结论 竹节参不同提取部位预处理对冠脉结扎诱导大鼠急性心肌缺血损伤具有较强的保护作用,其中以正丁醇部位为显著,水提部位次之.
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解剖型股骨柄假体植入并发股骨近段骨折与股骨近段髓腔解剖分析
目的 分析Ribbed解剖型股骨柄假体植入并发股骨近段骨折的原因,探讨股骨髓腔解剖因素在股骨近段骨折中的重要影响.方法 2004年1月至2009年1月,我们采用德国Link公司解剖型股骨柄假体Ribbed柄对213例(254髋)行全髋关节置换术.对213例患者的髓腔形态归纳分析,随访时间短的1年,长的5年,平均3.6年,髋关节功能采用Harris评分.结果 82.63%(176/213)患者的髓腔形态为正常型,香槟型占9.39%(20/213),只有7.98%(17/213)的患者髓腔为烟囱型.术中有11例发生股骨近段的骨折(包括股骨颈骨折5例,大转子骨折6例),占了手术并发症的26.19%(11/42),占本组病例的5.16%(11/213).骨折主要发生在香槟型患者中,占63.64%(7/11).213例患者全部得到随访,11例股骨近段骨折患者术后无1例发生假体无菌性松动,95.31%(203/213)患者术后仍能从事原工作岗位,91.55%(195/213)的患者可以下蹲和穿鞋袜.按照Harris评分标准,术前平均为40.8分,术后平均为93.0分,优良率达到94.84%(202/213).结论 解剖型股骨柄假体植入时发生股骨近段骨折或植入困难和股骨髓腔的解剖形态有关系,选择解剖型假体时,应该考虑股骨近段的解剖形态.
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特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化
目的 以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法 并优化.方法 以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件.得到优PCR反应条件后,将该方法 用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法 的有效性和特异性.结果 共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283～672、760～1 061、771～1 193片段,优化后PCR反应条件为:94 ℃预变性4 min,94 ℃变性40 s,54.5 ℃退火20 s,72 ℃延伸40 s,24个循环,后延伸1 min;特异性分析发现此方法 能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断.结论 成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法 能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌.
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小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞蛋白表达的分析
目的 利用双向电泳和质谱技术对小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)表达的蛋白质进行分析.方法 IL-4和GM-CSF诱导未成熟DC的分化,提取细胞总蛋白,定量.双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取蛋白点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定,MS-Fit分析质谱数据.结果 细胞生长情况和表面标志物检测表明获得了高纯度的未成熟DC.图像分析结果 显示,DC中检测到了(660±10)个蛋白点,主要分布在相对分子质量28×103～100×103,等电点5.0～9.0之间.鉴定了87个蛋白点,其中与未成熟DC免疫调节功能相关的蛋白质有40个(45.98%);与大分子代谢相关的有37个(42.53%).结论 成功分离到了约660个小鼠骨髓来源未成熟DC表达的蛋白质,鉴定出了其中87个蛋白.
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细胞周期素D2启动子曲古菌素A效应区域的研究
目的 研究在曲古菌素A(trichostatin A,TSA)处理条件下细胞周期素D2的调控机制.方法 细胞周期素D2的mRNA水平通过RT-PCR方法 检测.细胞周期素D2的启动子片段以A549细胞基因组DNA为模板,通过高保真PCR扩增获得,并克隆到pGL3-BASIC载体中;并以此为基础通过高保真PCR扩增出不同长度的启动子片段.启动子相对活性通过萤火虫酶报告基因方法 确定.结果 在TSA处理条件下,细胞周期素D2的mRNA水平上升.共构建4个以不同长度细胞周期素D2启动子片段驱动的报告基因质粒,分别命名为pGL3-1816CD2-LUC、pGL3-1358CD2-LUC、pGL3-720CD2-LUC和pGL3-524CD2-LUC.在TSA处理条件下,启动子活性的变化在-524 bp删切质粒时消失.结论 TSA条件下细胞周期素D2 mRNA水平上升是启动子依赖的;细胞周期素D2启动子的TSA效应区域在-720～-524 bp之间.
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采用闭合式单针法修复21例大范围虹膜根部离断的疗效分析
目的 探讨严重钝性眼外伤行前后节联合手术时对大范围虹膜根部离断修复简便有效方法.方法 对≥90°虹膜根部离断严重钝性眼外伤21例21眼,在联合行玻璃体切割术前行闭合式单针虹膜根部离断修复术,先切除脱入前房内的玻璃体,用粘弹剂将卷曲虹膜回复至原位,将预先穿入10-0尼龙线1 ml注射器针头自角膜缘1 mm 切口进针,将离断虹膜缝合至相应部位板层巩膜瓣下.如伴有睫状体离断者同时缝合离断的睫状体(6例);再行晶体切除及玻璃体切除术.结果 21眼虹膜均复位,瞳孔呈圆形或近圆形.瞳孔直径4～8 mm.大部分患眼视力均不同程度提高,其中15眼佳矫正视力≥0.1.眼压:7.0～28.0(14.0±8.7)mmHg.4眼继发性青光眼,药物控制.结论 对伴大范围虹膜根部离断严重眼外伤前后节联合手术中,应用闭合式虹膜根部离断修复术,损伤小,操作简便,效果良好.
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鱼藤酮和MPTP慢性帕金森病小鼠黑质共同差异蛋白研究
目的 通过比较鱼藤酮和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)两种慢性帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠与对照组小鼠黑质蛋白表达谱,找出两种PD模型小鼠共同的差异蛋白,探索筛选出PD的疾病特异性蛋白.方法 构建鱼藤酮和MPTP慢性PD小鼠模型组以及其各自的对照组1和对照组2,并进行行为学评价以及黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化.分别挖取黑质,提取总蛋白,进行双向凝胶电泳.运用PDQuest 8.0图像分析软件对鱼藤酮组与对照组1、MPTP与对照组2的电泳图谱分别进行分析,找出各自的差异表达蛋白.差异蛋白酶切后,MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定.后将所得到的肽质量指纹图(PMF)进行数据库搜索以及生物信息学分析.结果 鱼藤酮组与对照组1、MPTP组与对照组2小鼠间行为学差异具有统计学意义(P<0.05),且黑质TH阳性细胞计数差异也具有统计学意义(P<0.05).鱼藤酮组与对照组1比较发现有22个差异蛋白,MPTP组与对照组2比较发现有28个差异蛋白,其中有7个为共同的差异蛋白.我们成功鉴定其中3个共同的差异蛋白:PPP2R1A、吡哆醛激酶、peroxiredoxin-2.结论 鉴定出3个在PD蛋白质组学中少见报道的蛋白.这些蛋白水平的上调或下调可能与PD的发病密切相关,可作为PD的疾病特异性蛋白.
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ERK1/2对胆红素诱导的海马神经元损伤及NF-κB表达的影响
目的 研究细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)1/2对胆红素诱导的大鼠海马神经元核转录因子-κB(nuclear transcription factors,NF-κB)表达的影响,及其对抗胆红素神经元毒性的可能机制.方法 将原代培养的海马神经元分为对照组、胆红素组、PD98059(MEK/ERK抑制剂)+胆红素组及芥酸精(erucin,ERN,ERK激活剂)+胆红素组.采用改良噻唑蓝比色法(MTT法)和Annexin V-FITC/PI双染色法,检测各组细胞相对存活率及凋亡率;免疫细胞化学法检测NF-κB p65蛋白表达.结果 正常组、ERN+胆红素组、胆红素组、PD98059+胆红素组细胞相对存活率分别为100%、(80.020±8.552)%、(67.546±3.241)%、(50.591±3.981)%,各组比较有统计学差异(P<0.01).同一时间点各组NF-κB蛋白平均光密度(mean optical density,MOD)值均有统计学差异(P<0.01),对照组低;胆红素组NF-κB蛋白MOD值在胆红素作用3 h(0.266±0.033)时较高,随时间延长逐渐下降,24 h(0.183±0.021)时低(P<0.01);PD98059+胆红素组NF-κB蛋白MOD值变化趋势同胆红素组,但MOD值明显下降(P<0.05);与胆红素组相反,ERN+胆红素组MOD值在胆红素作用3 h(0.128±0.028)时较低,随时间延长逐渐升高,24 h(0.305±0.043)时高(P<0.01).结论 胆红素诱导海马神经元NF-κB表达具有时间依赖性;ERK1/2通路在胆红素诱导的海马神经元损伤过程中起保护作用,可能与ERK1/2通路抑制胆红素诱导的海马神经元NF-κB早期(3～6 h)表达、而促进其晚期(24 h)表达有关.
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X盒结合蛋白1对脂多糖处理的Kupffer细胞炎性因子表达的影响
目的 探讨X盒结合蛋白1 (X-box binding protein 1,XBP1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs) TNF-α表达的影响.方法 将BALB/c小鼠KCs随机区组法分为质粒组、阴性组和空白组.分别给予XBP1-shRNA、空白质粒转染和空白处理,并给予LPS.免疫细胞化学(SABC法)、Real-time PCR和Western blot法检测各组KCs中XBP1基因及蛋白表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测核因子NF-κB活性及培养上清液中TNF-α含量.结果 与阴性组、空白组相比,质粒组XBP1及下游因子TNF-α表达明显降低(P<0.05);而阴性组、空白组间比较比较无明显差异(P>0.05).3组间NF-κB活性比较无明显差异(P>0.05).结论 XBP1-shRNA质粒能明显抑制KCs XBP1基因的表达,并通过非NF-κB通路减少其下游因子TNF-α的释放.
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儿童代谢综合征患儿血清中炎症因子hs-CRP、IL-6、TNF-α的变化及意义
目的 了解正常、超重和肥胖儿童中代谢综合征(metabolic syndrome,MS)的流行特征及MS诊断指标异常儿童血清中炎症因子水平的变化及意义.方法 从重庆市区选取6所小学,用完全随机方法 从各年级抽取2个班,对选中班级的所有学生进行体检,共1 941例,依据2004年中国肥胖问题工作组制定的中国学龄儿童青少年超重、肥胖分类标准,筛选出所有肥胖儿童54例,抽取超重儿童77例,正常儿童72例纳入研究对象,再依据修正的Cook儿童MS诊断标准将研究对象分为3组:正常儿童(74例)、异常非MS儿童 (106例)、MS儿童(23例).常规测量其身高、体质量、腰围、血压,取空腹静脉血检测其空腹胰岛素、血糖和血脂,ELISA方法 测定血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 肥胖儿童中MS的发生率为27.78%(15/54),超重儿童中MS的发生率为10.39%(8/77),正常儿童中没有出现MS,超重和肥胖儿童中MS发生率差异具有统计学意义(P<0.01).MS儿童血清hs-CRP、IL-6水平[分别为(1.45±1.75)mg/ml、(4.84±0.60)pg/ml]高于异常非MS组[(0.71±1.11)mg/ml、(1.71±1.10)pg/ml],异常非MS组血清hs-CRP、IL-6浓度也显著高于正常儿童组[分别为(0.34±0.60)mg/ml、(1.35±0.70)pg/ml],3组间血清中的TNF-α水平无明显差异(P>0.05).结论 随着体质量增加,MS的发生率显著增加,MS诊断阳性指标数量越多血清中的炎症因子hs-CRP、IL-6水平越高,hs-CRP及IL-6是导致MS发生的显著危险因素.
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单支开放前降支闭塞并休克的介入治疗1例及循证证据
1 临床资料患者男性,55 岁.糖尿病史6年,持续性胸痛4 h于2009年10月13日入院.血压95/64 mmHg,心肺无阳性体征.心电图示:V1~V3导联ST段抬高呈单相曲线,V4~V6、Ⅱ、Ⅲ、avF ST段水平压低0.1～0.4 mV,aVRST段抬高0.1 mV.入院诊断:冠心病,急性前间壁心肌梗死(考虑前降支近段或左主干病变).行急诊冠脉造影,有创血压监测为70/40 mmHg.立即予主动脉内气囊反搏(Datascope CS100)支持.造影示:左主干无明显狭窄,前降支中段闭塞,TIMI 0级,回旋支中段闭塞,第一对角支予钝缘支提供3级逆灌注,右冠脉近段闭塞,自身桥侧支形成血流TIMI 2级.以PT GRAPHIX 导丝通过前降支闭塞段,MAVERIC 2.0 mm×20 mm球囊扩张后植入3.0 mm×18 mm垠艺紫杉醇支架,支架远段残余狭窄20%,未进行后扩张.术后血压恢复至90/60 mmHg.
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贵州省毕节地区10086例颅脑损伤患者临床分析
颅脑损伤 (traumatic brain injury,TBI)严重地影响人类的生命及生存质量,国外资料显示颅脑损伤死亡率是其他损伤的10倍[1].毕节市地处西部欠发达地区,地广人稀,交通落后,医疗资源不足,对颅脑损伤患者的院前急救及临床治疗相对滞后,在西部地区具有一定代表性.本研究回顾性分析毕节地区医院2000年9月至2010年9月收治的10 086例颅脑外伤患者的临床资料,旨在探索西部欠发达地区颅脑外伤的临床特征.
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内固定在头颈交界区神经鞘瘤切除手术中的应用
头颈交界区中枢神经系统神经鞘瘤发病率较低,约占脊髓神经鞘瘤的5%,手术切除该部位神经鞘瘤的难度和技术要求高,且该部位活动度大,术后的不稳定等并发症多[1],因此术中内固定也非常重要.本研究探讨头颈交界区中枢神经系统神经鞘瘤的切除方法及其内固定的意义.
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Fibroscan检测慢性HBV感染者肝纤维化的临床意义
乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)感染导致肝炎、肝纤维化发生,进而发展至肝硬化、肝癌.肝纤维化是可逆的病理过程,而一旦形成肝硬化则不可恢复.肝纤维化程度的测定在评价慢性乙肝患者病情、指导抗病毒治疗、追踪治疗效果等方面显得极为重要.肝脏弹性测定(Fibroscan)是近年用于肝纤维化无创检测的一种新方法,国外已在丙肝病毒感染者肝纤维化诊断及治疗随访过程中广泛使用[1].我们研究不同乙肝病毒感染者Fibroscan检测情况,进一步探讨其影响因素及临床运用价值.
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荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义
儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)和肺炎衣原体(chlamydiapliel pneumoniae,CP)也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体.由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题.目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法(如ELISA)为主.但近年来随着分子生物学技术的发展,聚合酶链(PCR)反应,尤其是荧光定量PCR技术的广泛使用[2],为病原体的检测提供了新的技术与手段.本研究拟同时采用ELISA和荧光定量PCR技术对儿童呼吸道感染病原体进行检测,比较2种方法对病原体检出的阳性率、一致性和优越性.
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颈动脉瞬时波强在评价冠心病患者心功能中的作用
目的 探讨颈动脉瞬时波强评价心功能的临床价值.方法 选2009年1-9月解放军总医院心内科住院的冠心病心功能不全患者51例,其中男性34例,女性17例,年龄(66±10)岁.常规行超声心动图及瞬时波强(wave intensity,WI)检测,记录左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室舒张末内径(left ventricular diastojic dimension,LVDd)、左室舒张末容积(end diastolic volume,EDV)、左室收缩末容积(end systolic volume,ESV)、左房内径(left atril dimension,LAd)、颈动脉瞬时加速度波强(accelerating wave intensity,W1)、颈动脉瞬时减速度波强(decelerating wave intensity,W2);超声检查完毕即刻测量6 min步行距离(6 minutes walking distance,6MWD);之后在2 h内行冠状动脉造影,造影显示每位患者至少有1处病变狭窄≥50%,其中47例导管测量左室压力,记录左室大压力变化(LV+dp/dtmax);分析51例患者上述超声指标与6MWD之间的相关性.结果 线性回归分析显示W1、LVEF、LVDd、EDV、ESV、LV+dp/dtmax 与6MWD均显示明显相关(r分别为0.687、0.591、-0.552、-0.450、-0.513、0.693,P<0.01);其中W1对6MWD影响程度大(标准回归系数Beta依次为W1 0.789、ESV 0.701、LVEF 0.567、LV+dp/dtmax 0.540、EDV 0.485、LVDd 0.067).结论 作为更加简便的评价心功能的方法,WI可能较传统的超声指标具有更加准确的临床价值.
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药物及介入治疗对症状性大脑中动脉狭窄患者预后的影响
目的 探讨症状性大脑中动脉狭窄患者药物及介入治疗对疾病转归和预后的影响.方法 将符合入选标准的56例症状性大脑中动脉狭窄患者按治疗方法 不同分为两组,支架介入治疗组(n=21)和药物治疗组(n=35),支架介入治疗组进行大脑中动脉狭窄支架置入治疗,药物治疗组单纯应用药物治疗;两组病例观察疗效并随访1年,观察脑血管事件发生率.结果 支架介入治疗组患者均成功置入支架,但2例发生脑出血,1例死亡,1例病情加重,术后随访19例有4例(21.1%)发生原狭窄动脉供血区的轻微卒中;药物治疗组患者7例(20.0%)再发卒中.两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 支架介入治疗症状性大脑中动脉狭窄患者安全、有效,严格控制并发症能让患者获益,但与药物治疗相比,其并不能显著改善1年后的无事件生存率.
