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HPLC-MS同时测定益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量
建立益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定方法.采用LC-MS同时测定盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量.使用Waters XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1％甲酸为流动相,流速1.0 mL·min-1,分流比为1∶4.质谱条件为ESI离子源,正离子模式,选择性离子扫描(SIM)下对盐酸水苏碱(m/z 144.0)和盐酸益母草碱(m/z312.0)进行测定.盐酸水苏碱浓度在0.562 8～281.4 μg·L-1线性关系良好(r=0.9998).盐酸益母草碱浓度在0.5212～260.6 μg·L-1性关系良好(r=0.9998).该方法准确、简便、可靠,可作为益母草制剂的含量测定方法.
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代谢综合征痰浊郁阻证患者的血清代谢组学特征
目的 寻找代谢综合征痰浊郁阻证患者内源性代谢物,探讨代谢综合征痰浊郁阻证血清代谢组学特征.方法 收集代谢综合征患者324例,随机抽取代谢综合征痰浊郁阻证、非痰浊郁阻证患者血清样本各20例,并以健康志愿者8例为对照,运用液相色谱-质谱联用技术,检测并分离各组血清相关代谢物,采用主成分分析与偏小二乘法判别分析进行数据处理,寻找差异性代谢产物.结果 经代谢组学技术检测,代谢综合征血清相关代谢物有鞘氨醇、4,5-脱氢二十二碳六烯酸、尿酸等23种.代谢综合征痰浊郁阻证血清相关代谢物有磷脂(20∶4)、棕榈酰左旋肉碱、黄嘌呤、磷脂(18∶3)等27种. 结论 代谢综合征痰浊郁阻证和非痰浊郁阻证患者血清的代谢物存在差异,代谢综合征痰浊郁阻证血清相关代谢物27种.
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基于代谢组学评价血液生物标志物对中枢神经系统肿瘤的诊断价值
目的 分析中枢神经系统肿瘤代谢组学图谱,评价小分子代谢物作为中枢神经系统肿瘤生物标志物的诊断价值.方法 本研究纳入126例中枢神经系统肿瘤患者和86例健康对照人群.通过液相色谱质谱联用技术(LC-MS/MS)检测血液中氨基酸和酰基肉碱,分析中枢神经系统肿瘤代谢组学图谱.用ROC曲线对小分子代谢物进行诊断效能分析.结果 中枢神经系统肿瘤代谢谱与健康人群有明显区别,19个指标有显著差异.肿瘤患者血液C2水平显著低于健康人群.Arg,C8和C18:2对中枢神经系统原发性肿瘤具有辅助诊断价值,ROC曲线下面积分别为0.868、0.895和0.756,灵敏度分别为82.6%、88.0%和60.9%,特异性分别为77.5%、80.8%和78.3%.结论 血液中小分子代谢物,包括氨基酸和酰基肉碱可作为中枢神经系统肿瘤辅助诊断新的生物标志物.
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兴奋剂检测中吗啡和可待因的LC-MS/MS定量方法研究
目的:建立WADA禁用清单中阈值物质吗啡及相关物质可待因的HPLC-MS/MS定量方法并进行方法验证.方法:尿样加内标后,加入磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L Na2HPO4和0.1 mol/LNaH2PO4水溶液pH=6.8)及β-Glucuranidase水解过夜,加入固体缓冲剂(NaHCO3/K2CO3=3/2,w/w,pH=9.5)和提取液(乙醚/异丙醇=9/1,v/v)萃取,有机相于氮气流下吹干,用初始流动相定容后进样于LC/MS/MS.使用耐受高pH值的Waters XBridgeTM C 18色谱柱,以乙腈/氨水(pH≈10)作为流动相体系,使用乙腈的起始浓度为2％,终浓度为98％,运行时间为10min的梯度洗脱条件,采用多反应离子监测正离子模式,以286→201 (morphine),300→171 (codeine),289→165 (morphine-D3)为定量离子.结果:吗啡和可待因在尿中的定量限分别为0.05μg/mL和0.005 μg/mL,线性范围分别为(r2 ＞0.99)0.10～10 μg/mL和0.05～10 μg/mL,吗啡定量的日内精密度和日间精密度(CV)分别为2.64％和4.01％,可待因为2.22％和2.01％.吗啡和可待因在1.0 μg/mL浓度时的方法回收率分别为98.47±2.73％和99.41±4.12％.定量检测误差均低于5％.结论:本方法使用一个步骤同时测定尿中禁用物质morphine的总量,并可同时定量检测尿样中的codeine,数据处理简单;简化了前处理操作步骤,定量结果的精密度得到了提高;采用BridgeTM C 18色谱柱和高pH值流动相,改善了morphine在普通C18柱上不保留、仪器响应和保留时间重现性较差、峰形拖尾较为严重的问题.方法重现性好,测量结果准确可靠,满足WADA技术文件的要求,应用于本实验室常规检测和WADA的外部质量评估计划,效果良好.
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液相色谱质谱联用检测药物反应性代谢物的研究进展
候选药物在体内向反应性代谢物的生物转化过程中,人们不希望其生成能共价结合大分子(如蛋白质和DNA)的反应性代谢物.作为候选药物吸收、分布、代谢和排泄(ADME)性质整体评价的一部分,许多制药公司已开始采用多种体内外筛选方法研究其是否有生成反应性代谢物的可能,并鉴定反应性代谢物的性质.发现问题化合物后,通过合适的结构修饰使潜在的生物转化减少至低.因此,检测、鉴定和定量测定活性代谢产物在药物开发过程中非常重要.三级四极杆质谱是用于分析活性代谢产物的常规方法.在过去3年间,为改善分析灵敏度和选择性,实现高通量筛选,已发展了许多新的质谱方法.本文重点阐述在药物开发过程中应用液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)检测和鉴定反应性代谢物的新进展,尤其关注线性离子阱(LTQ)、混合三级四极杆-线性离子阱(Q-trap)和高分辨LTQ-静电场轨道阱的应用.
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用MassLynx4.1软件提取液相色谱质谱联用部分重叠色谱峰的质谱图
目的 两个化合物A和X采用液相色谱质谱联用法实现部分分离,并形成部分重叠峰.尝试在不改变分离条件的情况下获得化合物X的“较纯的”质谱图.方法 运用MassLynx 4.1软件的“谱图合并(Combine Spectra process)”功能,扣除化合物A的信号.结果 与预期相符,所获得的质谱图明晰,提示X可能是A的脱氢类似物,后经验证,与A脱氢类似物纯品的质谱图一致.结论Masslynx 4.1软件的“谱图合并”功能可以帮助分析者更容易地获得清晰的质谱信息,并有可能节省传统方法中优化色谱条件所花费的时间,是液相色谱质谱联用分析的有力工具.
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高效液相色谱-质谱联用法测定风湿免疫病患者口服低浓度甲氨蝶呤的血药浓度
目的 建立风湿免疫病患者服用甲氨蝶呤的液相色谱-质谱联用血药浓度测定方法.方法 采用甲醇沉淀蛋白,以氨基蝶呤作为内标,用Epic C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,3μm),甲醇(含0.1％甲酸)-水(含0.1％甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.6 mL· min-1,柱温40℃.用电喷雾离子化源,正离子模式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测.考察方法的专属性、标准曲线、定量下限、精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性.结果 甲氨蝶呤在0.5～200.0ng·mL-1范围内线性良好(r=0.999 2),定量下限为0.5ng·mL-1,日内、日间精密度及准确度RSD＜ 15％,回收率为76.80％～85.49％.结论 该检测方法快速、灵敏,满足对服用甲氨蝶呤72 h内的风湿免疫病患者血药浓度的准确测定.
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LC-MS/MS法测定全血中西罗莫司的药物浓度
目的 建立测定人全血中西罗莫司(免疫抑制剂)浓度的LC-MS/MS的方法.方法 全血样品经硫酸锌乙腈混合液沉淀后,用Zobox XDB-CN色谱柱,0.1mmol·L-1乙酸水-0.1 mmol·L-1乙酸乙腈(60∶ 40)为流动相,流速0.45 mL·min-1,通过电喷雾离子化电离源,经多反应监测模式检测.结果 全血中西罗莫司的线性范围为1.12～33.47μg·L-1,日内、日间RSD均小于10％,提取回收率为81.4％～92.4％.结论 本法灵敏、准确、快速,可用于人全血中西罗莫司浓度监测和药代动力学研究.
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建立人血浆中拉呋替丁的液相色谱质谱联用测定方法
目的 建立人血浆中拉呋替丁(制胃酸药)的LC-MS测定方法.方法 采用单剂量单周期给药试验设计,12名健康受试者服用拉呋替丁片10 mg后,测定了不同时间内的血药浓度.在血浆0.5 mL中加入内标盐酸雷诺嗪10 μL碱化,以乙醚5 mL提取,进行LC-MS法检测.流动相由0.02%甲酸与0.5 mmol·L-1醋酸铵的水溶液和甲醇组成,流量为0.2 mL·min-1;色谱柱为Shim-Pack ODS(5 μm,150 mm×2.0 mm),质谱采用选择性离子检测方法.结果 拉呋替丁的线性范围为1.0～400.0 μg·L-1,低检测浓度为1.0 μg·L-1,批间和批内的变异系数均＜10%.结论 该法简便、准确、灵敏度高.
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LC-MS/MS法定量测定人血浆中普罗布考的浓度
目的:建立一种特异、灵敏的液质联用方法定量测定人体血浆中普罗布考的浓度.方法:在25.0μL含待测药物的血浆中加入内标Pr-1312及萃取液混匀沉淀蛋白.采用X-Terra RP C8(2.1mm×50 mm,3.5 μm)色谱柱;柱温50℃;流动相为10mmol·L-1碳酸氢铵水溶液-乙腈(20:80);进样量5μL;流速0.2 mL·min-1.质谱检测方式为ESI-,MRM扫描,监测普罗布考m/z 515.3→236.1,内标Pr-1312m/z 382.2→161.0,分析时间3.3min.结果:普罗布考在10.0～5 000.0ng·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r>0.99),日内与日间精密度(RSD)<10.2%,准确度(RE)<±15.0%.所有稳定性考察项目结果均符合要求.结论:本文采用蛋白沉淀样品前处理以及液质联用定量测定人体血浆中普罗布考的浓度方法,能够满足临床试验中生物样品分析的需要.
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大鼠血浆中新型α7-烟碱型乙酰胆碱受体正向变构调节剂LD486的液相色谱-质谱串联测定方法学的建立及其药代动力学特征
神经型α7-烟碱型乙酰胆碱受体功能的不足与认知缺陷以及多种神经精神障碍相关.在动物模型中,激活α7-烟碱型乙酰胆碱受体可以提高学习记忆能力以及感觉门控.为了增强新型的功能,我们通过筛选发现了激动α7-烟碱型乙酰胆碱受体的正向调节剂LD486.在本研究中,我们建立了一个简单可靠且高效的液相色谱质谱联用的方法(LC-MS/MS)并分析了这种新型的正向变构调节剂LD486在大鼠血浆中的浓度以及药代动力学参数.含有LD486的血浆样品用反向C18色谱柱分离,流动相为乙腈和0.1％甲酸水溶液(80∶20,v/v),流速为0.5 mL/min,内标为A1223.液相流出液使用电喷雾离子源(ESI,正离子模式),质谱多反应监测模式检测,检测离子:LD486为m/z 419.0[M+H]+→m/z 169.0,A1223为m/z 400.0[M十H]+→m/z129.9.LD486在4-4000 ng/mL范围内,线性关系良好,低定量限为4 ng/mL.在低定量限时,依然有满意的日内日间精密度,提取回收率,以及基质效应.稳定性测试提示血浆中LD486在反复冻融,22℃室温下放置2小时和12小时,以及-20℃保存2周均保持稳定.我们将此方法成功地应用到测定大鼠血浆中LD486静脉注射(1 mg/kg)以及口服(3 mg/kg和30 mg/kg)后给药途径的药代动力学特征.
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液相色谱串联质谱法测定人体血浆维拉帕米浓度及生物等效性评价研究
目的 建立LC-MS/MS测定人体血浆中维拉帕米的浓度.方法 色谱柱为Thermo Hypurity C18 (2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为10 mmol·L-1甲酸铵(含0.1％甲酸)-乙腈(35∶65)；流速:0.3 mL·min-1；进样量:10 μL;柱温:40℃,样品室温度为15℃.ESI源正离子扫描,维拉帕米和内标丙咪嗪离子监测分别为(m/z)455.0→165.0和(m/z) 281.0→86.0.结果 维拉帕米线性范围为0.457 5 ～234.20 ng·mL-1,维拉帕米低检测限为0.1ng·mL-1,方法灵敏、稳定、特异性高,并成功地应用到人体维拉帕米药动学的研究.结论 该方法简便、准确、重复性好,可以准确地定量人体血浆维拉帕米的浓度.
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HPLC-MS/MS同时测定人体血浆中氯沙坦钾与其代谢物氯沙坦羧酸(E-3174)的浓度及其药动学应用
目的 建立灵敏、快速的液相色谱串联质谱法测定人血浆中氯沙坦钾和氯沙坦羧酸(E-3174)浓度.方法 血浆样品中加入适量内标和冰乙酸,以叔丁基甲醚萃取后用API 3000 LC-MS/MS进行分析.色谱柱采用SHISEIDO,CAPCELL PAK C18MGⅡ(2.0 mm×50mm,5μm),柱温为室温,流动相由0.1％甲酸水溶液(含5 mmol·L-1醋酸铵)-乙腈(含0.1％甲酸)(20∶ 80)组成,流速0.85 mL·min-1.质谱采用多反应离子监测(MRM)的扫描模式,以电喷雾离子源(ESI)在正离子电离模式下进行测定.结果 本方法的线性范围是10.10 ～2 525 ng· mL-1(氯沙坦钾)和9.820 ～2 455 ng·mL-(E-3174),低定量限为10.10 ng·mL-1(氯沙坦钾)和9.820 ng·mL-1(E-3174),日内、日间精密度均小于9.22％,准确度在93.56％～102.88％之间,萃取回收率约70％,稳定性考察结果良好,单个样品分析时间仅为2.5 min.2种制剂的相对生物利用度为96.5％(氯沙坦钾)、110.0％(E-3174).不同来源的2种氯沙坦钾片具有生物等效性.结论 本方法快速、灵敏、专属性强,适用于氯沙坦钾的人体药动学研究及其制剂的生物等效性研究.
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液相色谱质谱联用法测定静脉复合麻醉患者血浆中舒芬太尼的浓度
目的 建立液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)测定静脉复合麻醉患者血浆中舒芬太尼的药物浓度方法.方法 血浆样品经2 mol·L-1NaOH溶液20 μL碱化后用乙醚萃取,以芬太尼为内标,采用LC-MS/MS测定.色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6mm×150 mm,5μm),以甲醇-5 mmol·L-1醋酸铵-醋酸(74:26:0.5)为流动相,流速为0.5 mL· min-1；质谱条件采用TIS离子源,检测方式为正离子电离,多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 387.2→m/z 238.2(舒芬太尼)和m/z 337.4→m/z 188.2(芬太尼).结果 舒芬太尼在0.01 ～1.00 μg· L-1(r =0.998 1)内线性关系良好,高、中、低3浓度的提取回收率在64.2％以上,日内、日间精密度均小于11.6％.结论 本试验建立的舒芬太尼血药浓度的测定方法简单、快速、准确、灵敏,可用于临床上复合麻醉中小剂量应用舒芬太尼患者的血药浓度测定及临床药动学研究.
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LC/MS/MS法测定人血浆中阿莫西林克拉维酸浓度及其药物代谢动力学及人体生物等效性研究
阿莫西林(amoxicillin)为半合成广谱青霉素类抗菌药,具有杀菌活性强、生物利用度高、组织分布好等优点[1].克拉维酸(clavulanic acid)是竞争性广谱β-内酰胺酶的抑制剂,由阿莫西林和β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸钾组成的复方制剂,在临床上的应用日趋普及.克拉维酸可以增强阿莫西林对产β-内酰胺酶菌种的抗菌活性,且对多数产β-内酰胺酶的细菌也有明显的抗菌活性,临床应用十分广泛[2].本研究建立了快速、灵敏、适用于测定高通量样品的液相色谱质谱联用(LC/MS/MS)分析方法,用于同时测定健康受试者血浆中阿莫西林和克拉维酸的浓度,评价受试制剂和参比制剂的人体生物等效性,希望能为临床安全合理用药提供科学依据.
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LC/MS/MS法测定人血浆中阿莫西林克拉维酸浓度及其药物代谢动力学及人体生物等效性研究
阿莫西林(amoxicillin)为半合成广谱青霉素类抗菌药,具有杀菌活性强、生物利用度高、组织分布好等优点[1].克拉维酸(clavulanic acid)是竞争性广谱β-内酰胺酶的抑制剂,由阿莫西林和β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸钾组成的复方制剂,在临床上的应用日趋普及.克拉维酸可以增强阿莫西林对产β-内酰胺酶菌种的抗菌活性,且对多数产β-内酰胺酶的细菌也有明显的抗菌活性,临床应用十分广泛[2].本研究建立了快速、灵敏、适用于测定高通量样品的液相色谱质谱联用(LC/MS/MS)分析方法,用于同时测定健康受试者血浆中阿莫西林和克拉维酸的浓度,评价受试制剂和参比制剂的人体生物等效性,希望能为临床安全合理用药提供科学依据.
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6种光固化复合树脂吸水性、溶解性和单体释放量的比较
目的:比较6种光固化复合树脂吸水值、溶解值和单体释放量,探讨其影响因素,并阐明其与材料组成成分和浸泡液的关系.方法:根据ISO 4049-2009标准,测量6种复合树脂FiltekTM Z250 (Z250)、FiltekTM Z350 XT (Z350)、Aelite LS Posterior (ALS)、CLEARFIL MAJESTY Posterior (CMP)、Neofil Nano (NN)和Tetric N-Ceram (TNC)的吸水值和溶解值,并将6种树脂试件浸泡于75％乙醇溶液中,在不同时间点(24 h、7d、1个月和3个月)终止浸泡,利用液相色谱质谱仪测量各时间段内浸泡液中Bis-GMA和TEGDMA单体释放量.结果:6种光固化复合树脂的吸水值由小到大依次为ALS＜CMP＜TNC≈Z250＜ NN＜Z350,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);溶解值由小到大依次为Z350＜NN≈ ALS≈CMP≈Z250＜TNC,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).Bis-GMA释放量,树脂随着浸泡时间延长释放量缓慢增加(P＜0.05),其中ALS和CMP 3个月时释放量变小(P＜0.05),3个月时释放量由大到小依次为NN＞ TNC＞Z250＞Z350＞ALS＞CMP (P＜0.05);TEGDMA释放量,NN和TNC未检出,另外4种树脂的TEGDMA释放量随着时间延长缓慢增加(P＜0.05),其中CMP 3个月时释放量变小(P＜0.05),3个月时释放量由大到小依次为ALS＞CMP＞Z250＞Z350 (P＜0.05).结论:不同复合树脂的吸水性、溶解性及单体释放量不同,且与有机基质组成成分和浸泡液有关.
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LC-MS/MS法同时测定维C银翘片中6种成分
目的 建立同时测定维C银翘片中对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、牛蒡苷、连翘苷、甘草苷的高效液相-串联四级杆质谱方法.方法 采用Waters系统,Kromasil 100-5 C18(150mm×2.1 mm,3μm)色谱柱分离,多反应监测模式测定,乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min；柱温35℃；进样量10 μL.ESI+离子化模式.结果 6种成分在28 min内即达到基线分离,在测定的浓度范围内线性关系良好,r分别在0.992 6～0.999 6之间,各成分的平均回收率在82.1％ ～96.1％之间.结论 该方法准确、简便、灵敏,可作为维C银翘片的质量控制方法.
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健康志愿者二甲双胍缓释片群体药动学模型的初步研究
目的 建立中国健康志愿者服用二甲双胍缓释片的群体药动学(PPK)模型,并研究不同生理因素对二甲双胍药动学参数的影响.方法 20名中国健康受试者(男性1 1名、女性9名),单剂量给予二甲双胍缓释片1 000 mg,收集受试者服药后0～24 h血样标本,建立液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)方法测定人血浆二甲双胍浓度,采用非线性混合效应模型(NONMEM)建立二甲双胍的群体药动学(PPK)模型,并探讨生理因素对二甲双胍药动学的影响.结果 二甲双胍药动学符合一房室模型,清除率(CL/F)、分布容积(Vd/F)和吸收速率常数Ka分别为(95.8±7.46) L/h、(553±45.9)L及(0.596±0.070)/h.引入体重作为CL/F及Vd/F的协变量,使模型显著改善(P＜0.05).结论 NONMEM法可以用于二甲双胍药动学研究,且体重对二甲双胍清除率存在显著影响.
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高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中拉莫三嗪的浓度
目的 建立简单、快速和灵敏的高效液相色谱串联质谱法以测定人血浆中拉莫三嗪的浓度.方法 血浆样品经甲醇直接沉淀蛋白后,采用Thermo Hypurity C18柱(4.6×250 mm,5 μm)分离,流速为0.20 mL/min,以甲醇∶0.1％甲酸=80∶20为流动相等度洗脱.通过电喷雾离子源进入质谱,以二级质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方式进行检测.结果 拉莫三嗪的线性范围为8.19～2 096 ng/mL,平均相对回收率在80％～120％范围内,日内和日间变异均＜15％.结论 本法简单、快速、重现性好,能够用于拉莫三嗪的人体药代动力学性研究.
