首页 > 文献资料
-
梯度洗脱-HPLC法测定异烟肼及其片剂中有关物质
目的:建立梯度洗脱-HPLC法测定异烟肼原料及其片剂中有关物质,并对国内外20家企业异烟肼片的有关物质进行分析.方法:资生堂CAPCELL PAK ADME(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.05 mol· L-1磷酸二氢钾溶液(pH 6.0±0.05)-甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-1,检测波长为262 nm,柱温为35℃.已知杂质测定采用相对保留时间(RRT)定性,校正因子(f)定量的主成分自身对照法,未知杂质为不加校正因子的自身对照法.结果:异烟肼、6个已知杂质以及其他降解杂质分离度均大于1.5,异烟肼与6个已知杂质呈良好的线性关系,6个已知杂质的平均回收率为92.5％～110.0％,精密度、重复性、稳定性、专属性均良好.美国山德士片剂中检出1个含量达3.1％的特有杂质,LC-MS初步确定其为异烟肼与乳糖反应产生的乳糖异烟腙.国内大多数企业片剂单个杂质含量在0.5％以下,各杂质总和含量在1.0％以下.结论:梯度洗脱-HPLC方法灵敏,专属性好,可用于异烟肼及其片剂质量一致性评价中有关物质的分析研究.
-
液相色谱-质谱法对棓丙酯注射剂中有关物质的初探与结构解析
目的:采用色谱-质谱联用技术对注射用掊丙酯、掊丙酯注射液和掊丙酯氯化钠注射液中有关物质进行结构解析.方法:采用C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),以乙腈-0.05％甲酸(20∶80)为流动相,流速为0.2 mL· min-1,检测波长为272 nm,对注射用掊丙酯(来自13家企业)、掊丙酯注射液(来自6家企业)和梧丙酯氯化钠注射液(来自3家企业)中有关物质进行分离;采用电喷雾负离子化的方法,通过飞行时间质谱(TOF-MS)测定一级质谱精确质量,三重四极杆质谱扫描二级质谱(MS/MS),并进行结构解析.结果:掊丙酯与杂质分离良好,6家企业的注射用掊丙酯中检出同1个杂质,命名为杂质Ⅰ,1家企业的掊丙酯氯化钠注射液检出另1个杂质,命名为杂质Ⅱ.采用液相色谱-质谱联用法对杂质Ⅰ和杂质Ⅱ进行了结构解析,推测杂质Ⅰ为掊丙酯二聚物,为粉针剂生产过程中长时间加热产生,推测杂质Ⅱ为棓丙酯与辅料亚硫酸氢钠发生磺酸化反应的产物,为棓丙酯氯化钠注射液贮藏过程中产生.结论:色谱-质谱联用技术能有效地对3种剂型棓丙酯注射剂中的有关物质进行结构解析,为其工艺和质量控制提供参考依据.
-
HPLC-DAD-MS法对酮咯酸氨丁三醇及其注射液有关物质的分析
目的:对国内各厂家生产的酮咯酸氨丁三醇及注射液的有关物质现状进行考察,为标准提高提供依据.方法:建立液相色谱-二极管阵列检测器-质谱联用法,采用C18(100 mm×4.6 mm,3μm)色谱柱,以0.05 mol· L-1乙酸铵溶液(甲酸调节pH至2.5)-乙腈(60:40)为流动相,对酮咯酸氨丁三醇及注射液中有关物质进行分离,采用二极管阵列检测器及ESI/Q/TOF高分辨质谱检测器进行检测,对检测到的有关物质进行结构解析,并将有关物质检测结果与现行标准方法检测结果进行对比.结果:在所建立的液质条件下,酮咯酸氨丁三醇及其有关物质分离良好,可以检测到酮咯酸氨丁三醇合成副产物及降解产物共22个,推断了有关物质1、4、6、10、13、15、21和22的结构.现有酮咯酸氨丁三醇原料药及注射液产品中实际存在的有关物质有13个.现行标准方法对酮咯酸氨丁三醇及注射液中的有关物质没有漏检.结论:液质联用技术能有效地分离鉴定酮咯酸氨丁三醇及注射液中的有关物质,液质分析结果为酮咯酸氨丁三醇及注射液的质量控制提供了参考.
-
核磁共振和液相色谱-质谱法对苯丙哌林未知杂质的结构分析
目的:建立利用仪器分析苯丙哌林未知杂质化学结构的方法,并对2个未知杂质进行结构确证.方法:采用Inertsil ODS-3(4.6 μm,2.1 mm×150 mm)色谱柱,以甲醇-0.01 mol· L-1醋酸铵缓冲液(取醋酸铵0.77 g,加水800 mL溶解,用冰醋酸调节pH至3.3,用水稀释至1 000mL)(65:35)为流动相,流速0.25 mL·min-1,检测波长270 nm.用HPLC-MS/MS分析2个未知杂质,使用制备液相进行分离纯化,通过核磁共振(1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC、DEPT135、H-H COSY)技术,对苯丙哌林及其未知杂质进行结构确证.结果:首次发现并确定苯丙哌林2个未知杂质的结构,分别为1-[2-(2-苯甲酰基苯氧基)-1-甲基乙基]哌啶和1-[2-(2-苄基-6-氯苯氧基)-1-甲基乙基]哌啶.结论:该方法可为苯丙哌林的质量控制提供依据.
-
青蒿素有关物质检查方法探讨
目的:建立青蒿素有关物质含量的HPLC检查方法.方法:采用高效液相色谱法对青蒿素原料中有关物质进行定量测定,以CAPCELL PAK C18 MG(4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水(60∶40)为流动相,流速为1.0 mL·min1,检测波长为210 nm;采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对实测样品中的主要杂质进行结构确认,离子源为ESI,检测模式为正离子模式.结果:主峰与各杂质分离良好,样品中检测出2个主要杂质.其中,杂质I为青蒿烯,杂质Ⅱ可能为青蒿素的异构体.所建立的HPLC方法,青蒿素和青蒿烯的检出限分别为2μg·mL-1和0.05 μg·mL-1,线性范围分别为0.01～0.12 mg·mL-1和0.000 5～0.01 mg·mL-1;青蒿烯的平均加样回收率为101.4％,RSD为1.8％;青蒿烯和杂质Ⅱ进样精密度分别为0.6％和1.7％.结论:本法经方法学验证,可用于青蒿素中有关物质的测定.
-
羧甲司坦中杂质的分离和鉴定
目的:分离和鉴定羧甲司坦中的杂质.方法:采用离子对HPLC法分析羧甲司坦中的有机杂质.通过与对照品比较,鉴定了其中的3个杂质;合成了其中1个无对照品的未知杂质,并采用MS和NMR对其结构进行鉴定.结果:确定了羧甲司坦中的4个有机杂质分别为氯乙酸、胱氨酸、羧甲基半胱氨酸内酰胺和N,S-(二羧甲基)半胱氨酸.结论:N,S-(二羧甲基)半胱氨酸是羧甲司坦的合成副产物,为首次报道.
-
硝西泮及其片剂中有关物质的液相色谱电喷雾质谱联用分析
目的:建立HPLC-MS法测定硝西泮原料及片剂中3种杂质.方法:采用Shimadzu VP-ODS柱(250 mm ×4.6 mm,5μ m),以乙腈:10 mmol·L 1磷酸二氢钾(45:55)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱后分流；进样量10 μL;DAD检测器,检测波长220nm.电喷雾电离源(ESI),雾化器干燥气流速8 mL·min-1,干燥气温度:350℃,静电喷雾电压3500 V;质谱扫描质量范围50 ～ 1200m/z.采用全扫描一级质谱和选择离子全扫描二级质谱(MS/MS)2种方式同时测定.结果:硝西泮与各杂质峰均能良好的分离,杂质A、B、C在0.24～30.0μg·mL-1浓度范围内与峰面积成良好的线性关系,回归方程分别为Y=3.411×104X +384.1,Y=2.411 ×104 X-258.4,Y=8.982×104 X-1.378×103,r均为1.000,低检测限分别为0.24ng、0.36 ng、0.24 ng.高、中、低三浓度的平均回收率分别为100.8％,99.4％,101.3％；并对硝西泮的未知降解产物进行结构分析.结论:该方法简便、灵敏、专属性好,硝西泮和3种已知杂质有良好的分离.
-
基于LC-MS/MS法的盐酸肼屈嗪片有关物质研究
目的:利用LC-MS/MS法对盐酸肼屈嗪片剂中的主要杂质进行结构鉴定.方法:采用Agilent ZORBAX SB-CN色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以缓冲液(合十二烷基硫酸钠和溴化四丁基铵,用0.05 mol·L-1硫酸调pH至3.0)-乙腈为流动相进行洗脱,对盐酸肼屈嗪片剂进行强制降解和稳定性研究;并建立新的挥发性流动相条件通过LC-MS和LC-MS/MS法对盐酸肼屈嗪片剂中的主要杂质进行结构鉴定.结果:盐酸肼屈嗪片剂在多种条件下的稳定性欠佳;共检测到5个主要杂质:1,2,4-三唑并[3,4-α]酞嗪、3-甲基-1,2,4-三唑并[3,4-α]酞嗪、肼屈嗪乳糖缩合物、酞嗪和1-氨基酞嗪,其中4个初步鉴定为盐酸肼屈嗪与辅料相互作用产生的物质.结论:本研究新建立的LC-MS/MS方法可用于盐酸肼屈嗪中有关物质检查,对完善质量标准,加强药品的质量控制具有积极意义.
-
高效液相色谱离子阱质谱联用法同时测定人血浆中曲马多和对乙酰氨基酚浓度
目的:建立快速、灵敏的液相色谱-电喷雾离子阱质谱法测定人血浆中曲马多和对乙酰氨基酚的浓度.方法:血浆样品经乙腈直接沉淀蛋白后,以乙腈-10mmoL·L-1甲酸胺-0.1%甲酸(65 :15:20)为流动相,采用Hypurity C18柱(150 mm×2.1mm,5μm)分离,流速为0.2 mL·min-1,通过电喷雾离子化离子阱质谱,以二级质谱选择离子反应监测(SRM)方式进行检测.结果:曲马多和乙酰氨基酚的线性范围分别为5-1000及20-12800ng·mL-1,低检测浓度分别为1和10 ng·mL-1,平均相对回收率均为103.7%,日内和日间变异均＜20%,每个样品测试时间仅为7.0 min.结论:本法简单、快速、灵敏、重现性好,是一种有效的检测人血浆中曲马多和对乙酰氨基酚浓度的方法.
-
LC-MS/MS法测定健康人体血浆中阿齐沙坦的浓度及在药代动力学研究中的初探
目的:为临床研究阿齐沙坦人体药动学建立一种高效、专一的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并将其应用于阿齐沙坦在中国健康人群药动学研究.方法:含阿齐沙坦血浆样本与内标混合后经乙腈处理,以含5 mmol·L-1甲酸铵溶液-乙腈为流动相,SB-Aq色谱柱(3.0 mm×100 mm,3.5 μm)为分析柱,采用API 4000型液质联用系统,流速0.6 mL· min-1,室温下测定;采用负离子模式,MRM扫描,阿齐沙坦m/z 455.2→411.2和内标奥美拉唑m/z 344.1→193.9.9例健康受试者口服40 mg阿齐沙坦片,于不同时间点分别采集静脉血进行药代动力学分析.结果:阿齐沙坦和内标的保留时间分别为4.17和4.77 min,标准曲线在0.01～10.0 mg· mL-1范围内线性良好(r=0.998 6±0.000 9),低定量限10 ng·mL-1,日内、日间批间差异均小于12％,准确度在89.2％～ 110.2％,回收率在83.2％～96.2％之间,所有的稳定性考察项目均符合要求.药动学结果显示,健康受试者口服阿齐沙坦片40 mg后,阿齐沙坦在人体内平均达峰时间tmax=2.22h,平均半衰期t1/2=10.15 h.结论:本测定方法适用于阿齐沙坦的药动学研究和血药浓度监测.
-
在线固相萃取LC-MS/MS法测定健康人体全血中依维莫司浓度及在药代动力学研究中的应用
目的:为临床研究依维莫司人体药动学建立一种特异、灵敏、快速、重现性好的在线固相萃取(onlineSPE)-液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并将其应用于依维莫司在中国健康人群药动学研究.方法:200 μL含依维莫司全血样本与20μL内标混合后经0.4 mol·L-1硫酸锌80％甲醇水溶液处理,取上清液经在线固相萃取,以含0.1％甲酸5 mmol·L-1甲酸铵水溶液-含0.1％甲酸甲醇溶液(10:90)为流动相,Waters SunFireTM Cm色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)为分析柱,进样量50 μL,室温下测定;采用正离子模式,MRM扫描,依维莫司m/z 975.8→908.6,内标m/z 809.6→756.7,分析时间为5min.12例健康受试者口服1.5 mg依维莫司片,于不同时间点分别采集静脉血进行药代动力学分析.结果:依维莫司质量浓度在0.201～100.7 ng·mL-1的范围内线性良好(r=0.999 8±0.000 2),低定量限为0.201 ng·mL-1,回收率在99.2％～105.4％之间,以RSD表示的日内与日间精密度均小于8％,过程效率良好,所有稳定性考察项目结果均符合要求.药动学结果显示,健康受试者口服依维莫司片1.5 mg后,依维莫司在人体内平均达峰时间k为0.69h,平均药峰浓度Cmax腿为10.56 ng·mL-1,0～96h时间段药时曲线下面积AUC为AUC0-96h 65.70 ng·mL-1·h,平均半衰期ti/2 36.50h.结论:本法经方法学验证,可用于依维莫司的药动学研究和血药浓度监测.
-
间尼索地平对映体在人肝微粒体中的酶促反应动力学研究
目的:研究间尼索地平对映体在人肝微粒体中的酶促反应动力学,计算其酶促反应动力学参数,并对R型和S型间尼索地平的酶促反应动力学过程进行比较.方法:以尼莫地平为内标,建立液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法分别测定体外孵育人肝微粒体后R型、S型间尼索地平含量,采用Linewrave-Burk作图法处理数据,以底物消除法计算酶促动力学参数Km和Vmax.结果:R-间尼索地平Km=71.67 μmol·L-,Vmax=2.513 μmol·min-1·mg-1;S-间尼索地平Km=72.86 μmol·L-1,Vmax=2.534 μmol·min-1·mg-1.结论:该方法简单、可靠,适用于间尼索地平的体外代谢研究,R型和S型间尼索地平的酶促反应动力学过程无明显差异.
-
液质联用方法对海狗油大鼠药物动力学的初步研究
目的:应用LC/APCI - MS法检测大鼠血浆中海狗油的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)3个主要成分,为其药动学研究提供灵敏、准确和实用的方法.方法:取血浆样品0.1 mL经甲醇-正已烷(1:1)沉淀蛋白并萃取后,氮气吹干后进行柱前转酯化衍生,采用Waters C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm)分离,以乙腈-水(9:1)为流动相,流速0.3 mL· min-1,检测波长210 nm,柱温40℃.通过大气压化学电离四极杆质谱,以选择离子监测(SIM)方式进行检测.用于定量分析的EPA甲酯(EPAM)、DHA甲酯(DHAM)、DPA甲酯(DPAM)、十九碳二烯酸甲酯(内标物)的m/z分别为317.30[M+H]+、343.30[M+H]+、345.30[M+H]+、309.20[M+H]+.结果:EPAM、DHAM和DPAM的线性范围均为50～10000 ng·mL-1,定量限为50 ng·mL-,日内、日间RSD均小于6.6％.对海狗油的大鼠药物动力学初步研究结果表明,EPA、DHA和DPA在连续给药第10 d达到稳态浓度,且时间与给药剂量之间没有关联性；大鼠血浆中EPA、DHA和DPA稳态浓度的高低与给药剂量正相关.结论:该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内EPA、DHA、DPA的药动学研究.
-
LC-MS/MS法测定Beagle犬全血中环孢素A浓度及环孢素微乳制剂的生物等效性研究
目的:建立液相色谱串联质谱法测定Beagle犬全血中环孢素A的浓度,并考察3种环孢素微乳制剂的生物等效性.方法:全血样品中加入适量内标和氢氧化钠,以乙醚萃取后用API 3000LC-MS/MS仪进行分析.采用CAPCELLPAK(C18) (2.0mm×50 mm,5μm)色谱柱,以水(5 mmol·L-1甲酸铵)为流动相A,甲醇-乙腈(1:1,含5 mmol·L-1甲酸铵)为流动相B,以0.4 mL·min-1的流速进行梯度洗脱(0～0.8 min,60％B;0.8 ～ 1.3 min,60％ B→100％B;1.3～2.5 min,100％ B;2.5 ～3.7 min,60％ B),柱温65℃;质谱采用多反应离子监测(MRM)的扫描模式,以电喷雾离子源(ESI)在正离子电离模式下进行测定,选择性监测质荷比(m/z)为1 220.2/1 202.9(环孢素A)、1 234.3/1 216.9(环孢素D,内标).结果:本方法的线性范围为20.16 ～2 016 ng.mL-1;低定量浓度为:20.16 ng·mL-1.日内、日间精密度均小于7.1％,准确度在92.9％ ～ 108.2％之间,提取回收率为63.8％～68.3％,稳定性考察结果良好.以AUC0-t计算,受试制剂的相对生物利用度为95.42％ ～ 100.10％;以AUC0-∞计算,受试制剂的相对生物利用度为95.82％～99.14％.剂量矫正后Cmax和AUC0-∞的90％置信区间(CI)均在80％ ～ 125％范围内,2种口服液和1种软胶囊制剂生物等效.结论:本法经方法学验证,适用于测定Beagle犬全血中环孢素A浓度及其生物等效性研究.
-
银荷降脂方中5种活性成分在大鼠体内的药代动力学研究
目的:建立液相色谱质谱联用定量分析方法,测定大鼠血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素及槲皮素的含量,并用于银荷降脂方中主要活性成分经口服给药后大鼠体内药代动力学研究.方法:采集SD大鼠灌胃银荷降脂方后不同时间点的血浆样本,采用LC-MS/MS以多反应离子监测(MRM)模式,电喷雾离子源(ESI)正、负离子检测,测定血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素及槲皮素5种成分的浓度,应用DAS3.2软件进行药动学参数计算.结果:荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素Tmax分别为(1.10 ±0.22)、(0.19±0.04)、(0.20±0.05)、(0.17±0.00)、(0.17±0.00)h,Cmax分别为(52.10 ±7.42)、(1.61±0.50)、(106.02±49.59)、(28.07±9.76)、(186.79±60.99)ng·mL-1,t1/2分别为(2.82±0.69)、(6.46±0.63)、(16.04±9.65)、(5.16±2.12)、(8.27±7.04)h,AUC0-t分别为(167.33±42.61)、(5.86±4.42)、(261.73±34.72)、(78.99±18.20)、(683.04±173.96) ng·h·mL-1,MRT0-t分别为(4.59±0.51)、(7.87±1.66)、(8.43±1.22)、(8.32±1.23)、(7.43±1.26)h.结论:本文建立的LC-MS/MS法符合方法验证要求,可用于银荷降脂方中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素在大鼠体内的药动学研究,为临床应用及新药开发提供依据.
-
重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的分析与评价
目的:分析重组假丝酵母尿酸酶中聚合物的形成原因及其对结构功能的影响.方法:通过分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)结合多角度激光散射仪分离聚合物并测定其相对分子质量;将含有聚合物的蛋白进行还原及非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),确定聚合物的形成是否与二硫键有关;通过液质联用仪鉴定聚合物中存在的二硫键;通过测定圆二色谱评价聚合物的形成对蛋白二级结构的影响;通过多角度激光散射仪测定二硫键形成对蛋白稳定性的影响;通过酶活性测定评价聚合物形成对酶活性的影响.结果:重组假丝酵母尿酸酶正常以同源四聚体的形式存在,37℃条件下可通过链间二硫键形成更高级别的聚合物,高级聚合物的形成对蛋白二级结构及稳定性的影响不大,但会降低酶活性.结论:本文综合多种手段对尿酸酶中聚合物的成因及影响进行分析,测定结果可为该制品的后续研究及质量控制提供依据.
-
复合酶提取人参的高效液相色谱-电喷雾质谱研究
采用高效液相色谱法和电喷雾质谱联用技术并结合紫外光谱技术对复合酶提取的人参化学成分进行了分析,结果表明复合酶可提高人参的提取效率,提取物中人参皂苷Re、Rg1、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rd、Rk3、Rh4的含量明显增多,并得到了常规提取方法中不能得到的Rk1、Rg5、20(S)-Rg3和20(R)-Rg3.复合酶法提取天然药物并结合高效液相色谱和电喷雾质谱联用技术进行即时分析具有高效,灵敏和直观的特点,以实现对人参中微量成分的检测,并可指导其他天然药物的研究.
