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支气管哮喘患儿血浆内皮素测定及意义研究
支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,临床表现为反复发作性喘息、咳嗽、气促和胸闷等症状[1].内皮素(endothelin,ET)是强烈的支气管收缩剂,ET不仅存在于血管内皮细胞,而且气管、支气管黏膜、平滑肌、肺血管、肺泡上皮细胞亦有ET存在,其中ET-1在肺内含量高,由于内皮素在各种心血管疾病的发生和发展过程中起着重要的作用[2],其在心脑血管疾病病理中的作用已多有报道.本研究测定支气管哮喘患儿血浆内皮素水平,旨在探讨儿童哮喘患者血浆ET含量及其与疾病严重程度的关系,现报告如下.
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大黄牛角汤治疗肺癌(瘀热型)大咯血探讨
肺癌是发生于各级支气管及细支气管肺泡上皮细胞的恶性肿瘤.由于肿瘤表面血管丰富,肿块在不断生长过程中,癌肿侵蚀较大血管时可引起大咯血,如救治不及时,常可引起病人窒息、休克、死亡,是肺癌晚期严重的并发症和急症之一.
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N-乙酰半胱氨酸减轻香烟烟雾提取物所致的A549细胞损伤
目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对香烟烟雾提取物(CSE)暴露后的A549细胞的影响.方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率;用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化;用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化;用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达变化.结果 CSE致A549细胞存活的A值为0.55 ±0.04,显著低于对照组的0.78±0.03(P＜0.05),NAC处理使A值显著上升至0.67±0.04(P ＜0.05),并消除了G1期阻滞,降低细胞凋亡率等.IGFBP-3的表达在CSE刺激后,有所升高,在接受NAC保护后,其表达水平有所降低(P＜0.05).结论 NAC可以抑制香烟烟雾提取物造成的A549细胞损伤,IGFBP-3可能在香烟烟雾提取导致细胞损伤的机制中发挥作用.
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沉默FOXO1抑制H2O2诱导的大鼠肺泡2型上皮细胞凋亡
目的 探讨沉默叉头蛋白O1(FOXO1)基因表达对H2O2诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系(RLE-6TN)活力、凋亡的影响及机制.方法 随机将RLE-6TN细胞分为对照组、H2 O2组、si-FOXO1组和NC组.CCK8法及膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)细胞凋亡试剂盒分别检测细胞活力和凋亡率;Western blot检测FOXO1、p53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达.结果 H2O2可明显上调RLE-6TN细胞FOXO1、p53、Bax和p-p38蛋白表达,抑制细胞活力,诱导细胞凋亡(P<0.05),而转染FOXO1 siRNA后可明显降低H2 O2对FOXO1、p53、Bax和p-p38蛋白表达上调、细胞活力抑制及凋亡诱导作用(P<0.05).结论 沉默FOXO1基因表达可抑制H2 O2诱导的RLE-6TN凋亡,其机制可能与下调p38MAPK信号通路有关.
关键词： 肺泡上皮细胞 FOXO1基因 过氧化氢(H2O2) 凋亡 -
细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控
目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用. 方法 肺泡上皮细胞A549分为A、B、C 3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4 h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h.分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Western blotting检测ERK激酶的活性. 结果 A549细胞施加14 %牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P＜0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断. 结论 机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达
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荚膜在新型隐球菌黏附和侵袭肺泡上皮细胞中的作用
在对新型隐球菌与肺泡上皮细胞相互作用的研究中,发现隐球菌可以与肺泡上皮细胞发生黏附,诱导自身进入肺泡上皮细胞即对细胞发生侵袭,同时对细胞的活性造成损伤,并对其过程进行了显微结构上的观察.本文利用这一模型,对荚膜在隐球菌黏附和侵袭肺泡上皮细胞中的作用做进一步的研究.
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新型隐球菌与肺泡上皮细胞的体外相互作用
目的 研究新型隐球菌与肺泡上皮细胞的体外相互作用,探讨隐球菌肺部感染的发病机制.方法 体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞A549(ATCC CCL-185),检测新型隐球菌2种变种对细胞的时间/浓度黏附率、通过率;检测新型隐球菌对细胞的损伤作用;透射电镜观察相互作用的超微结构.结果 2种变种的新型隐球菌可以对A549细胞产生黏附与侵袭,黏附率与侵袭率呈现时间依赖性;同时还可以使A549细胞凋亡率升高,对其造成损伤,这与菌体的活力相关.超微结构可见隐球菌与肺泡上皮细胞的黏附与侵袭过程.2种变种之间在黏附率、通过率及对细胞的损伤作用方面差异无统计学意义.结论 活的隐球菌黏附与侵袭肺泡上皮细胞是隐球菌感染肺部的重要条件,不同变种对肺部的易感性可能不存在差异.进一步明确二者的作用机制对隐球菌的发病机制研究具有重要意义.
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海水淹溺15例诊治体会
海水含3.5%氯化钠及大量钙盐和镁盐,海水对呼吸道和肺泡有化学性刺激作用.肺泡上皮细胞和肺毛细血管内皮细胞受海水损伤后,大量蛋白质及水分向肺间质和肺泡腔内渗出,引起非心源性肺水肿.海水淹弱必须现场及时发现并院前急救,争取时机是院内急救成功的前提,若没及时发现救治或应急医护人员反应速度慢,病死率较高.本文就1999年1月至12月我院救治15例海水淹溺作一总结分析,主要着重海水淹溺救治的体会报告如下.
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机械拉伸对γ-干扰素诱导肺泡上皮细胞人β-防御素-3表达的影响
目的 研究机械拉伸对γ-干扰素(IFN-γ)诱导肺泡上皮细胞(A549细胞)人β-防御素-3(HBD-3)表达的影响并探讨HBD-3在呼吸机相关性肺炎(VAP)发病机制中的作用.方法 体外培养A549细胞,分别给予机械拉伸(S组),10 ng/ml IFN-γ(I组)和10.ng/ml IFN-γ+机械拉伸(IS组)3种处理,未处理的细胞为对照组(C组),处理的时间为2 h、4 h和6 h.拉伸由细胞FlexerceH-4000TM拉伸系统提供,拉伸的幅度为20%,速率为30次/min.处理后实时定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测HBD-3 mRNA的表达;处理6 h的细胞继续培养至24 h,激光扫描共聚焦显微镜检测HBD-3的表达.采用单因素方差分析和q检验对实验数据进行统计学分析.结果 单独的机械拉伸不能使HBD-3mRNA的表达发生显著变化.10 ng/ml IFN-γ处理2 h、4 h和6 h后,HBD-3 mRNA表达量较之C组分别增加了(2.63±0.60),(8.02±1.63)和(12.21±2.35)倍.10 rig/ml IFN-γ+机械拉伸处理2 h、4 h和6 h后,HBD-3 mRNA表达量较之C组分别增加了(1.54±0.16),(4.37±0.87)和(6.99 4-1.32)倍,但均显著低于I组(P<0.01).6 h机械拉伸后,IS组HBD-3的表达显著少于I组(P<0.01),同C组差异无统计学意义.结论 机械拉伸能显著抑制IFN-γ诱导肺泡上皮细胞HBD-3表达的上调,这可能是机械通气(MV)的患者易于发生VAP的原因之一.
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百草枯中毒大鼠肺组织缺氧诱导因子-1α的表达变化
目的 探讨百草枯中毒大鼠肺组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)的表达变化。方法 将96只健康SD大鼠随机(随机数字法)分为对照组和染毒组,染毒组按50 mg/kg将20％百草枯(paraquat,PQ)用生理盐水稀释到1 mL一次性灌胃染毒灌胃后0,2,6,12,24,48,72 h及120 h分别收集动脉血做血气分析,肺组织切片做HE染色,Masson染色及免疫组化标记HIF-1α。数据收集后两组之间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),相关分析采用Pearson相关分析。结果 PQ中毒后2h大鼠肺组织的HIF-1α及胶原的表达即明显升高,低氧血症则在中毒后72 h出现。动脉血氧分压与HIF-1α阳性面积/细胞数无显著相关(r=-5.24,P＞0.05)。Masson染色阳性面积/细胞数与HIF-1α阳性面积/细胞数(r=0.819,P＜0.05)呈显著相关。动脉血乳酸与HIF-1α阳性面积/细胞数(r=0.761,P＜0.05)呈显著相关。结论 PQ中毒可上调大鼠肺组织的HIF-1α蛋白,且这一变化可能不是由低氧血症介导的。
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急性肺损伤的诊治现状和进展
急性肺损伤(acute lung iniury,ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,它造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,导致的急性低氧性呼吸功能不全.以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调为病理生理特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变,其发展至严重阶段(氧合指数<200)被称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS).
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沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响
目的 探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响.方法 用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平.A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平.细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α).流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达.结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高.转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低.空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)％、(7.94±0.19)％、(7.93±0.17)％、(4.62±0.13)％.TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P＜0.01).干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P＜0.01).结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关.
关键词： 肺泡上皮细胞 凋亡 TNF-α Bcl-2相关X蛋白 重症肺炎 -
犬肺移植中供体肺泡上皮细胞核的形态计量研究
目的:探讨EC液低温灌注犬肺离体保存组织结构随保存时间变化的特点及规律,评价EC液低温灌注对犬肺的保存效果.方法:4℃ EC液灌注6只健康成年杂种犬肺并离体低温保存,灌注结束后,分别保存30、60、120、180、240min,取材制作组织标本,测试、观察不同时点肺组织湿干重与肺泡上皮细胞核的体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)、表面积与体积比(Rsv),以灌注前为对照组.结果:肺组织湿干重比、肺泡上皮细胞核的Vv、Sv、Rsv随低温保存时间变化无显著性差异(P＞0.05).结论:保存4h内肺组织结构的特点没有变化,肺泡上皮细胞核的Vv、Sv、Rsv变化不明显,改进后的EC保存液可以用于供体肺保存.
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百草枯中毒肺损伤机制和治疗的研究进展
百草枯(Paraquat,PQ)化学名称是1,1'-二甲基-4,4'-联吡啶阳离子盐,相对分子质量257.2,易溶于水,微溶于酒精,不溶于有机溶剂,在酸性及中性溶液中稳定,在碱性溶液中容易分解,对金属有腐蚀性.百草枯是对人有较强毒性的除草剂.由于其中毒致死量小、无特效解毒剂、常规对症治疗效果极差,故死亡率居高不下.百草枯中毒的特征性改变是肺损伤,早期表现为肺泡上皮细胞受损,肺泡内出血水肿,晚期则出现肺泡内和肺间质纤维化,这是PQ中毒患者的主要死亡原因.本文对近年来PQ中毒肺损伤机制和治疗进展作一综述.
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TGF-β与肺纤维化
肺纤维化(pulmonary interstitial fibrosis,PIF)可由多种病因引起,其病理演变大多表现为初始的下呼吸道炎症细胞浸润,肺泡上皮细胞和血管内皮细胞的损伤,伴有成纤维母细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞的增殖及细胞因子等的释放,导致细胞外基质蛋白和胶原沉积,终引起肺结构的损害[1].
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体外循环血清对A549细胞的损伤和N-乙酰半胱氨酸的影响
目的:研究体外循环血清对肺泡上皮细胞的损伤作用以及N-乙酰半胱氨酸的保护作用.方法:将体外循环术后血清在体外与肺腺癌上皮细胞株A549细胞共同孵育,实验分为对照组、实验组和用药组(n均=8),在2 h、8 h和18 h测定细胞上清液中的丙二醛,并利用电镜、脱氧核糖核酸(DNA)电泳、原位凋亡检测及bcl-2蛋白免疫组化等方法观察A549细胞的损伤情况,用N-乙酰半胱氨酸进行干预研究.结果:实验组与用药组细胞培养液中丙二醛在加入刺激因素后随时间逐渐升高,18小时达到高峰.实验组、用药组与对照组比差异非常显著.用药组与实验组间也有非常显著的差异(P均＜0.01).实验组细胞脱落渐进性增加,细胞呈损伤性改变,部分细胞膜不完整,或细胞边缘模糊不清.透射电镜见A549染色质凝集,它是凋亡特征之一,用药组形态较完整.实验组与对照组相比差异非常显著,用药组成活率明显较实验组高(P＜0.01).实验组DNA电泳后可见明显的梯带,表明DNA碎裂明显.原位凋亡检测示实验组凋亡率明显高于对照组,用药组凋亡率低于实验组(P＜0.01);而免疫组化示实验组bcl-2的积分光密度值和平均光密度值均十分显著的高于对照组(P＜0.01),用药组较对照组也有显著升高(P＜0.05～0.01). 结论:体外循环血清在体外能引起A549细胞凋亡,氧自由基可能起了很重要的作用,N-乙酰半胱氨酸能减轻A549的损伤,体外循环术中应用N-乙酰半胱氨酸等药物可能会减轻术后呼吸功能不全的发生率.
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脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性损伤及损伤机制
目的 探讨细菌脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(AEC)炎症反应及可能的反应机制.方法 将人肺腺癌细胞系A549细胞株分为2组:对照组和LPS干预组,分别培养并于0.5 h、2 h、6 h和12 h时留取标本进行相关细胞因子检测.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),放射免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的水平.实时荧光定量PCR检测TLR-4 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白IκBα和NF-κB p65蛋白水平,观察NF-κB的活性变化.结果 与对照组比较,LPS使AECs分泌的ICAM-1,TNF-α和IL-8于2 h、6 h和12 h均升高,ICAM-1,TNF-α于2 h、IL-8于12 h达分泌高峰;作用2 h后TLR-4 mRNA表达明显升高并达到峰值(27.88±13.31),6 h后(19.82±15.58)仍高于对照组(1.00±0.00),组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),12 h时(12.86±11.45)组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);NF-κB活性于刺激后0.5 h、2 h、6 h和12 h均明显增加,表现为抑制蛋白IκBα迅速降解,NF-κB p65蛋白同步释出并转入细胞核内.结论 LPS能够激活肺泡上皮细胞使其释放大量炎性因子,这一过程可能是通过激活TLR-4并进而激活NF-κB而诱导了AECs的炎性损伤.
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肺结节病肺泡上皮细胞CD44表达的观察
目的探讨肺结节病的肺泡Ⅱ型细胞CD44的表达与其发病机制的关系.方法对21例肺结节病、5例结核病、3例Wegener肉芽肿、4例特发性肺纤维化和8份正常肺组织行活组织检查,行肺泡上皮总数(AE1/AE3)和CD44的免疫组化染色.3个显微镜高倍视野为观察范围,以AE1/AE3标记阳性细胞即肺泡上皮总数为基数,观察肺泡上皮的CD44阳性细胞数、以及肺泡上皮总数和CD44的计数比率.结果结节病组的肺泡上皮总数为110±32,肺泡上皮CD44的计数为84±6,与正常组的肺泡上皮总数(70±17)和CD44计数(18±4)比较,差异有显著性(P<0.001).CD44阳性表达于肺泡上皮膜上,且以肺泡Ⅱ型细胞为主.结论结节病时肺泡上皮细胞增多,伴有肺泡上皮细胞膜的CD44高表达,且以Ⅱ型细胞为主,此变化在结节病的炎症反应和修复过程中起着重要的作用.
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磷脂转运蛋白在烟草诱导RLE-6TN细胞株发生上皮间质转化中的作用
目的 探讨磷脂转运蛋白(PLTP)在烟草提取物(CSE)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞株RLE-6TN发生上皮间质转化(EMT)中的作用.方法 体外培养RLE-6TN细胞株24 h,分为4组,每组3孔,分别加入0％、0.25％、0.5％和1％ CSE培养2d,检测E-钙黏蛋白和波形蛋白mRNA表达以及细胞和CSE共培养3d检测PLTP、EMT相关蛋白(E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白)的表达量.将siRNA-PLTP转染入RLE-6TN中,Western blot法检测CSE对转染后PLTP和EMT相关蛋白的影响.结果 不同浓度的CSE作用后,E-钙黏蛋白mRNA分别为1.01±0.05、0.74±0.05、0.65±0.03、0.30±0.08,呈浓度依赖下降;波形蛋白mRNA在1％ CSE组(1.88±0.49)表达与对照组(1.01±0.20)相比增加.PLTP蛋白含量分别为0.42±0.02、0.89±0.25、1.08 ±0.18、1.61±0.06;E-钙黏蛋白蛋白含量分别为1.61±0.04、1.08 ±0.10、0.63±0.08、0.68±0.17;N-钙黏蛋白蛋白含量分别为0.60±0.15、0.57±0.26、0.88±0.30、1.94±0.54;波形蛋白蛋白含量分别为0.61±0.05、0.98±0.16、1.07±0.14、1.34±0.19.1％组与对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.05).siRNA-PLTP和CSE处理细胞后,E-钙黏蛋白蛋白表达量较对照组明显增加(P＜0.05),N-钙黏蛋白和波形蛋白蛋白表达量较对照组明显降低(P＜0.05),siRNA-PLTP可部分逆转CSE诱导RLE-6TN细胞发生上皮间质转化.结论 PLTP能促进烟草诱导RLE-6TN发生上皮间质转化.
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香烟烟雾提取物影响肺泡上皮细胞谷胱甘肽和γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达
香烟中含有大量的氧化剂,吸烟可导致肺内氧化/抗氧化失衡,并终导致慢性阻塞性肺疾病(COPD).谷胱甘肽(GSH)是肺内一种重要的抗氧化剂,在氧化剂介导的肺部炎症和肺损伤中起着重要的防御作用.本组研究系统观察香烟烟雾提取物(CSC)对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)GSH及其合成限速酶γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,旨在深入探讨吸烟引起慢性气道炎症的机制.
