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Ad-HGF基因修饰的胎盘间充质干细胞治疗兔肢体缺血的实验研究
目的:研究重组腺病毒介导肝细胞生长因子( adenoviral vector mediated human hepatocyte growth factor,Ad-HGF)修饰的胎盘源间充质干细胞( placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSC)在兔肢体缺血模型中促新生血管生成的作用。方法无菌取足月产妇胎盘胎儿面中心区域胎盘组织,胶原酶消化法分离干细胞,体外培养传代,感染Ad-HGF 48 h后收集细胞用于治疗兔肢体缺血实验。左侧治疗组后肢缺血肌肉组织内多点注射总细胞数5×106/ml Ad-HGF修饰的PMSC,右侧对照组后肢缺血肌肉组织内注射生理盐水。结果治疗后第14天腹主动脉穿刺行数字减影血管造影( digital subtraction angiography,DSA)检查,可见左侧肢体缺血治疗后微血管生成数明显多于未治疗右侧肢体,血管形成能力明显增强。苏木精伊红染色法( HE)后置光镜下观察显示,治疗组毛细血管密度明显大于未治疗组(P<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测后肢肌肉组织中血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子( basic fibroblast growth factor,bFGF)、HGF的表达明显升高(P<0.05)。结论经Ad-HGF基因修饰的PMSC能明显促进血管新生,加快局部缺血组织血流循环的重建,是治疗肢体慢性缺血的有效手段。
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低氧诱导VEGF基因表达载体治疗家兔肢体缺血性疾病的实验研究
目的 探讨低氧诱导血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达载体对家兔肢体缺血性模型的基因治疗效果.方法 通过切除髂外动脉远端和股动脉分支制作家兔左后肢缺血模型,术后立即将含VEGF基因的低氧诱导表达载体6HRE-pcDNA-VEGF165多点注射至患侧肌肉内,并于不同时间点进行后肢胫动脉血压测量和动脉血管造影.结果 与对照组相比,应用低氧诱导VEGF基因表达载体的基因治疗组胫动脉血压恢复快;动脉血管造影显示基因治疗组动脉充盈早于对照组,新生血管多于对照组,早于对照组建立侧支循环.结论 低氧诱导VEGF基因表达载体可促进家兔肢体缺血模型新生血管的形成,改善缺血肢体的血液循环.
关键词: 低氧诱导表达载体 血管内皮细胞生长因子 肢体缺血 基因治疗 -
中药对肢体缺血-再灌注损伤保护作用的研究进展
随着生产和交通的日趋发展,四肢大血管损伤、骨筋膜室综合征等疾病在临床中越来越常见.肢体恢复血流后,存在缺血-再灌注损伤,影响肢体功能恢复,造成肢体残疾,据有关统计伤残率高达26.4%[1].更为严重的是缺血-再灌注损伤后可继发远位脏器损伤,如心脏、肺、肾、脑等器官的损伤,从而危及生命.许多学者从氧自由基、脂质过氧化、细胞内Ca2+超载、兴奋性神经递质毒效应以及炎性损害等发病机制上研究中药对肢体缺血-再灌注损伤的保护作用,发现中药不良反应小、疗效好,在临床上可以发挥很大的作用,现综述如下.
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干细胞移植治疗肢体缺血的进展
周围血管病变是导致肢体缺血的主要原因,近年来干细胞移植改善肢体缺血的基础与临床研究逐渐深入.本文从骨髓单核细胞移植、外周血干细胞移植和脐带血干细胞移植这三个方面,对目前干细胞移植治疗肢体缺血作一综述.
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四肢血管损伤的救治体会
肢体血管损伤较常见,且常与四肢骨折、神经损伤和软组织伤同时存在,其主要危险是致命大出血和肢体缺血坏疽.近年来,由于血管外科的发展,主张在保证生命安全的前提下,首先考虑行血管修复,重建血液循环,恢复肢体功能.现将我院自1990-2004年间共收治四肢血管损伤10例的救治效果报告如下:
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急性肢体动脉栓塞取栓术并发症临床观察
急性肢体动脉栓塞指栓子自心脏或近端动脉壁脱落,或自外界进入动脉,被血流冲向动脉远端,阻塞动脉血流,导致相应肢体或内脏器官缺血甚至坏死的一种病理过程.是临床上常见的血管外科急症,发病急骤,进展迅速,可造成远端肢体缺血、坏死甚至危及生命.早期诊断和正确治疗至关重要[1].我科2003~2012年完成92例急性肢体动脉栓塞取栓手术,现将并发症报道如下.
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人脐带血CD34+细胞诱导小鼠缺血肢体血管生成
目的 观察体外增殖的人脐带血CD34+细胞对缺血肢体血管生成的影响,探讨CD34+细胞与血管生成的关系.方法 采集人脐血细胞并进行CD34+细胞的提取、培养.建立小鼠左后肢缺血模型并随机分为CD34+细胞增殖组(n=5)、CD34+细胞组(n=5)和空白对照组(n=5)3组.采用DiI标记CD34+细胞示踪显像和抗人核抗原抗体(HNA)免疫组织化学方法评估人CD34+细胞向缺血区域的迁移能力,肢体温度、CD31免疫组织化学方法和转化生长因子β1 (TGF-β1)m RNA表达评估缺血肢体血流改善情况.结果 DiI标记示踪及HNA显色可见扩增的CD34+细胞出现在小鼠缺血下肢的肌肉组织中并分布在血管周围.注射液体后第14天(t=5.421,P=0.001;t=0.616,P=0.000)和第28天(t=10.780,P=0.000;t=12.123,P=0.000),CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组的温度改变百分比均明显高于对照组.注射液体后第28天,CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组毛细血管密度分别为592.3 ±24.6(t=26.386,P=0.000)和530.7±25.5(t=21.502,P=0.000),均明显高于对照组的219.7±19.9;CD34+细胞增殖组和CD34+细胞组的TGF-β1 mRNA表达量分别为(0.578±0.050)(t=12.376,P=0.000)和(0.504±0.080) copies(t=7.098,P=0.000),均明显高于对照组的(0.224±0.040) copies.结论 体外培养的人脐带血CD34+细胞能向缺血区富集并诱导血管生成,促进血流复通,有望成为治疗下肢缺血的有效途径.
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糖尿病下肢缺血的外科治疗
目前糖尿病在我国的发病率很高,居于常见疾病的第3位.糖尿病导致的肢体缺血的发病率也日益增高,已为血管外科医师所重视.
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老年患者血管外科急症的分布状况和手术疗效
目的 探讨血管外科老年急症病种的分布状况,评价急诊手术治疗效果.方法 回顾性分析北京协和医院血管外科中心2006年1月1日至2008年10月31日所有年龄≥60岁的血管外科急症入院手术病例的发病情况、伴随疾病、手术治疗效果和围手术期并发症情况.结果 血管外科急诊手术量逐年递增,年龄≥60岁患者伴随疾病比例明显高于<60岁患者,其中心血管疾病(包括瓣膜病)、脑血管疾病、高血压、糖尿病等四大疾病为老年患者为常见的伴随疾病.年龄≥60岁的患者的围手术期并发症比例与<60岁的患者相比无统计学意义.结论 老年血管外科急诊患者情况复杂、严重,做好术前评估和围手术期伴随疾病的治疗能有效降低并发症的发生率.
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神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响
目的 评价神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响.方法 54只小鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=6)、单纯缺血组(n=24)和缺血+去神经支配组(n=24).分别建立单纯后肢缺血模型和后肢缺血+去神经支配模型,在术后第7、14、21和28天取患肢腓肠肌.对3组腓肠肌标本进行HE染色,CD31和PCNA免疫组化染色,酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测神经生长因子(NGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达.结果 术后第7天,缺血+去神经支配组的患肢缺血程度评估1~4级的比例高于单纯缺血组(33.4%比16.6%),而0级的比例低于单纯缺血组(16.7%比33.3%),两组总体差异有统计学意义(x2 =7.94,P =0.047).术后第28天缺血+去神经支配组与单纯缺血组相比,其内皮细胞增殖指数[(2.4±0.4)%比(5.7±1.0)%,P=0.000]、毛细血管密度[(0.44±0.05)比(0.61 ±0.07),P=0.000]、NGF表达量[(6.71±0.94)pg/ml比(8.36±0.77) pg/ml,P=0.008]和VEGF表达量[(11.32±1.56) pg/ml比(15.13 ±2.93)pg/ml,P=0.018]均明显降低.术后第28天,缺血+去神经支配组的腓肠肌Ⅱ型肌纤维比例[(84.9±3.8)%]明显高于单纯缺血组[(78.8±1.8)%,P=0.008].结论 神经因素在缺血肢体血管生成和维持骨骼肌肌纤维类型上具有重要作用,但相关的分子调控机制仍需进一步研究.
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血管内皮生长因子基因转染胶质瘤细胞在治疗缺血性脑血管病中的意义
在所有可以诱导新生血管形成的基因中,血管内皮生长因子(VEGF)是目前有前景的一个基因,在治疗心肌缺血和肢体缺血方面,VEGF基因治疗已得到成功应用[1,2].鉴于VEGF是一种高效的特异性的可以诱导新生血管形成的内皮细胞有丝分裂原[3],我们希望将VEGF基因引入缺血性脑血管病的治疗领域.脑胶质细胞具有潜在的VEGF分泌功能,在脑缺血的情况下,胶质细胞可以分泌少量的VEGF,但VEGF的表达量不足难以诱导可以改善缺血区血液供应的新生血管形成.为此,我们选择胶质细胞作为VEGF基因治疗缺血性脑血管病基因转染的靶细胞,并研究VEGF基因的体外表达.
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干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变的研究进展
干细胞移植治疗的基础研究北京医科大学血管外科研究所、首都医科大学实验中心崔世军等关于是VEGF-bFGF基因治疗家免慢性肢体缺血的实验结论为:VEGF、bFGF和VEGF-bFGF真核表达载体可以获得局部高效表达,刺激体内新生血管生成,建立侧枝循环,改善慢性肢体缺血的效果.
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七叶皂苷钠在关节镜下前交叉韧带重建术后的临床应用
手术时肢体缺血、灌注液渗出、静脉回流障碍和止血带反应等,是关节镜下手术后肢体肿胀及关节积液的主要原因.手术创伤可导致组织水肿、关节液代谢循环障碍.关节灌注液泵的使用,为关节内修复、重建手术的开展,提供了有利条件,但如果使用经验不足,易导致液体外渗.止血带造成的肢体缺血可能引起组织细胞渗透压改变.术后肢体发生不同程度的肿胀和关节腔积液使组织愈合推迟,影响患肢关节的功能恢复及康复计划的实施.
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拉索式血管分流装置治疗四肢血管离断并缺损伤的体内试验
目的:进行拉索式血管分流装置治疗四肢血管离断并缺损伤的体内试验.方法:建立四肢血管离断并缺损伤动物模型,用拉索式血管分流装置和硅胶管连接缺损血管两端,检测通血及血栓发生情况,并与常规缝线结扎合并硅胶管连接方法进行比较.结果:拉索式血管分流装置固定的血管具有与传统缝线结扎合并硅胶管分流装置相同的通血效果,但操作时间短,和常规缝线结扎合并硅胶管连接方法相比有显著性统计学差异(P<0.05).结论:拉索式血管分流装置对离断并缺损的四肢血管可简单有效地恢复供血,可为后送至有条件的医院进行血管移植创造有利条件.
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培哚普利促进糖尿病大鼠缺血肢体的血管新生
目的 探讨培哚普利在糖尿病大鼠肢体缺血后血管再生中的作用及相关机制.方法 采用链脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型,切断一侧肢体股动脉,分为对照组和培哚普利治疗组.治疗4周后观察各组缺血肢体血管新生情况.逆转录-多聚酶聚合链反应(RT-PCR)和Western印迹法测定后肢肌肉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA和蛋白表达,并测定结构型NOS(cNOS)活性.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠缺血肢体的微血管密度、eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表达及cNOS活性均下降.培哚普利治疗后上述指标均明显升高.结论 糖尿病使大鼠缺血肢体的血管再生受损,有关的生长因子的表达下调或活性下降.培哚普利能促进糖尿病大鼠缺血肢体的血管再生,其机制与eNOS、VEGF和bFGF的表达上调及cNOS活性增加有关.
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紫苏叶油对肢体缺血-再灌注大鼠离体结肠平滑肌细胞的作用
紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.是唇形科紫苏属药用植物,性温、味辛.紫苏叶具有发散风寒、行气和胃之功效.紫苏叶含挥发油,主要成分为紫苏醛、黄酮以及金属元素.
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局部pUDKH基因治疗对实验性犬缺血肢体的某些生理、生化变化的影响
目的:探讨携带人肝细胞生长因子基因的真核表达质粒pUDKH在治疗犬肢体缺血时对其生理、生化的影响.方法:建立犬左下肢血管完全闭塞性血管病模型,一次性局部肌肉注射不同剂量pUDKH,并在不同时间点检测犬生理、生化指标.结果:转染pUDKH组,能使损伤的血管功能恢复,股动脉血流量恢复,脉搏搏动有力,下肢活动正常,肌电图指标无明显改变.血液生化指标在正常值范围内波动.结论:局部pUDKH基因治疗犬肢体缺血后对其生理、生化无明显影响.
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硬膜外自控泵下肢术后镇痛疗效观察
我院自1998年5月~2000年10月间,对80例周围血管病双下肢手术后病人采用硬膜外腔内保留导管、小剂量芬太尼等药物自控镇痛,获得满意的镇痛效果.现报告如下.1.一般资料周围血管病下肢手术病人80例,年龄在29~82岁,平均46岁;男性56例,女性24例.病种及术式:大隐静脉曲张高位结扎剥脱术及股静脉戴戒术40例,下肢急性动脉栓塞取栓术18例,阻塞性动脉栓塞肢体缺血、股骨下段及胫腓骨中下段截肢术10例,其它手术12例.有60例选择连续硬膜外阻滞麻醉,20例选择脊麻-硬膜外联合麻醉.
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脊髓刺激治疗危重肢体缺血的随机试验:技术与并发症
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培哚普利促进肢体缺血后血管新生的实验研究
目的:探讨培哚普利对大鼠缺血肢体血管新生的作用及相关机制.方法:对Wistar大鼠予单侧后肢股动脉切断,制造肢体急性缺血模型.分为对照组和培哚普利治疗组.治疗4周后观察各组缺血肢体血管新生情况.RT-PCR测定后肢肌肉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达,并测定结构型NOS(cNOS)活性.结果:与对照组相比,培哚普利治疗组缺血肢体的微血管密度、eNOS、VEGF和bFGF的mRNA表达及cNOS活性均明显升高.两组非缺血侧后肢肌肉中上述指标水平相似.结论:培哚普利对大鼠缺血肢体的血管再生有明显促进作用,并增加eNOS、VEGF和bFGF的表达及cNOS活性.