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柯萨奇B组3型、5型病毒在人脐静脉血管内皮细胞中持续感染模型的建立
柯萨奇B组病毒(group B coxsackieviruses, CVB)可引起人类多种疾病.如病毒性心肌炎,有的患者可转为慢性,晚期形成扩张型心肌病,导致心衰,预后不良.目前认为扩张型心肌病的病因与病毒在心肌组织中的持续存在有关[1].CVB可形成病毒血症,侵入血管内皮细胞或经血管内皮细胞穿越内皮屏障,感染相应靶组织.ECV304为一株自发突变为可传代的人脐静脉内皮细胞,其主要生物学特性与原代细胞相似.本研究在ECV304细胞中建立CVB3、CVB5持续感染的细胞模型,通过对病毒、细胞各种指标的检测,印证病毒长期存在于感染细胞中.为病毒性心肌炎及扩张型心肌病发病机制的深入研究及治疗药物的筛选提供参考依据.
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铅染毒大鼠胎盘组织错配修复基因突变的研究
金属及其化合物过量地进入机体会产生各种毒性效应而造成损害,严重者可以致癌[1].错配修复(mismatchrepair,MMR)基因是生物进化过程中的保守基因,具有修复DNA碱基错配、增强DNA复制准确性、维持基因组稳定性及降低自发突变的功能.
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单细胞凝胶电泳对o-PDA诱导CHL细胞基因组不稳定性的研究
基因组不稳定性是DNA接受损伤因素作用后重要的生物学效应.它不仅使受损细胞的损伤敏感性提高,加速损伤,而且具有传递性,即:基因组不稳定性所致的遗传效应并不是出现在受照细胞本身,而是以加强自发突变的形式表现在受照的子代细胞中[1].邻苯二胺是药物合成、染料、杀虫剂生产过程中的一种较为常见的副产品,是一种强的化学诱变剂[2].本实验主要采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)对化学诱变剂邻苯二胺(o-PDA)处理的CHL细胞及其经再次染毒子代细胞的彗星尾长进行测定与分析,初步探讨o-PDA诱发的CHL细胞基因组不稳定性.
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拓展微生物药源活性新菌株资源的新方法探索
在药源微生物活性产物研究中,分离得到的绝大多数菌株往往因无活性而被大量闲置或被选择销毁,造成前期投入的极大浪费和菌株资源开发利用效率严重低下.因此,如何将大量无活性菌株有效转化成活性菌株从而拓展药源微生物资源已成为重要研究课题.本课题组近几年一直在探索开展海洋来源无活性野生菌株的活性化转化与新产活性产物研究,并在无活性放线菌和真菌相关研究中取得了较好进展.本文简要归纳介绍包括尚未详细报道的新近进展在内的部分研究结果.
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KM突变小鼠皮肤T、B细胞数量分布和皮肤细胞凋亡增殖的动态改变
目的 观察不同年龄段KM突变小鼠皮肤T、B淋巴细胞的数量和分布,表皮及毛囊皮脂腺细胞凋亡和增殖情况.方法 采用血常规、免疫组织化学检测KM突变小鼠皮肤T、B淋巴细胞改变情况,TUNEL技术和增殖细胞核抗原(PCNA)染色检测1 d、3d、6d、9 d、22 d、3个月、6个月KM突变小鼠皮肤组织背皮细胞凋亡和增殖情况.结果 KM突变小鼠皮肤T细胞主要表达在表皮及真皮,出生第1天至第6天增多,9 d、22 d减少,3个月以后增多,6个月时可见B细胞增多.KM突变小鼠凋亡细胞主要分布在毛囊和皮脂腺,较野生小鼠增多,且两种小鼠均在22 d时凋亡细胞数目多;出生1~9d的KM突变小鼠皮肤表皮基底细胞增殖与野生小鼠无差异,22 d和3个月增殖减少,但6个月时增殖多;毛囊及皮脂腺细胞22 d时增殖较多,9d和3月龄增殖减少.结论 KM自发突变小鼠皮肤组织存在T、B淋巴细胞数量分布及毛囊皮脂腺细胞凋亡和增殖的异常改变,引起免疫学紊乱和被毛异常生长,促进了炎症反应.
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常见中药的抗突变与致突变作用
突变是生物体遗传物质DNA化学结构发生了改变而复制机制并不丧失的现象.常见的突变有两种:一为自发突变,即突变是天然的,有稳定的突变率,自然发生的概率很低;另一种是诱发突变,是由于化学(包括药物)、物理或生物因素诱发的,突变率超过自然突变率.
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不同国家、地区细菌耐药性差别与抗感染治疗对策
致病菌耐药性的快速发展使临床抗感染治疗面临越来越大的困难.在生长繁殖过程中,细菌可通过自发突变产生耐药基因,也可以通过质粒、噬菌体、转座子等可移动的遗传物质获得外源性耐药基因,在耐药基因存在的前提下,抗菌药物所产生的选择压力可以使细菌中的耐药亚群逐渐发展成为优势菌群.
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S基因的自发突变对乙型肝炎病毒分泌的调节作用
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新生儿慢性肉芽肿病1例临床及基因分析
目的 了解新生儿慢性肉芽肿病(CGD)的临床特征和诊断.方法 回顾分析1例新生儿CGD的临床资料.结果 患儿系新生儿期起病,除反复发热外,临床症状及体征不明显,接种疫苗后出现皮疹,曾有小脓疱性皮疹;中性粒细胞呼吸爆发功能检测提示刺激指数(SI)明显下降,曲霉菌抗原阳性,结核抗体、PPD实验及T-SPOT均阴性,肺部CT影像学可见多处结节实变影.抗感染及对症治疗效果不佳,后期出现巨噬细胞活化表现,自动出院后不久死亡.CYBB基因分析发现1个半合子突变:c.845_855del(缺失),导致氨基酸改变p.E283Afs*61(移码突变).该变异不属于多态性位点,在人群中发生频率极低,为自发突变.结论 对于新生儿期起病,存在疫苗接种后反应或皮肤感染、反复发热、中性粒细胞呼吸爆发功能检测SI下降、肺部CT影像学特征性多发结节实变影者,要高度怀疑CGD,CYBB基因突变是其常见致病原因.
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DNA聚合酶β对细胞生物学特性及DNA损伤的影响
目的 探讨DNA聚合酶β(pol β)的表达水平对细胞的生物学特性及重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的影响.方法 以pol β野生型(pol β+/+)、pol β缺陷型(pol β-/-)及pol β 高表达型(pol β oe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法绘制3种细胞的生长曲线;群体倍增实验观察3种细胞的倍增时间;HGPRT基因突变实验检测细胞的自发突变频率;同时用单细胞凝胶电泳实验分析3种细胞的自发DNA损伤和重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的差异.结果 3种细胞生长曲线和群体倍增时间基本一致,细胞自发突变频率和自发DNA损伤差异也无统计学意义(P0.05);随着重铬酸钾浓度的增加,3种细胞的拖尾率和尾长均增加,在相同重铬酸钾染毒浓度下pol β缺陷型细胞的DNA损伤明显大于pol β野生型和高表达型细胞, 且以pol β高表达型细胞的DNA损伤效应弱.结论 pol β表达水平对细胞的生长特征无明显影响,也不会造成细胞自发突变的增加;pol β基因缺陷使细胞对重铬酸钾诱导的DNA损伤更敏感,而高表达则对DNA损伤具有一定保护作用.
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阴沟肠杆菌仪器法筛选和三维试验法测定阴沟肠杆菌AmpC酶的结果分析
近20年以来,随着三代头孢菌素在临床上大量使用,阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性不断上升,逐渐成为医院感染的重要病源菌之一.通过染色体自发突变,去阻遏持续高产AmpC酶,是阴沟肠杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制[1],此菌常引起患者长期、反复、多部位的感染[2],给临床治疗带来困难.本文对我院2003年1~12月从临床标本中分离的82株阴沟肠杆菌用阴沟肠杆菌(Microscan Walk Away-40)全自动细菌鉴定仪-NC-21复合板耐药谱推测,三维试验确证产AmpC酶的情况进行分析,现报道如下.
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小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因自发分子突变研究
背景与目的:研究小鼠淋巴瘤 L5178Y3.2.7c-tk +/-细胞 tk基因的自发突变频率和分子突变.材料与方法:进行 4次平行试验,计算自发突变频率.选择 tk基因自发突变子(tk-/-),提取基因组 DNA,经等位基因特异性 PCR扩增,杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)分析和测序等技术,分析其分子突变谱.结果:L5178Y细胞 tk基因的平均自发突变频率为 145× 10-6,tk基因自发突变 LOH平均发生率为 79.8%.由 LOH分析的试验结果显示,自发突变的 LOH在大集落(Large clone,LC)与小集落(Small clone,SC)之间差异无统计学意义.序列分析证实,自发tk基因点突变主要为碱基置换.结论:tk基因的自发突变是以功能性等位基因缺失为主的分子突变,其中点突变以碱基置换为主.
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重现经典实验感悟先人智慧培养科学思维——开放实验之抗异烟肼的吡哆醇高产菌株的定向培育
开放实验室是改革实验课教学,提高学生综合能力的主要途径之一,而经典实验是学生设计实验方案的优秀范例.本实验室开展了突变与育种这一微生物学经典实验,通过梯度平板法阶段筛选双歧杆菌的抗高浓度异烟肼自发突变株,在自发突变的基础上,通过紫外线和亚硝基甲基脲(NMU)处理对抗异烟肼的突变株进行诱变,再通过梯度培养法筛选到抗更高浓度异烟肼的突变体.从而重现了经典实验,使学生对变异的特征以及变异在生物生产上的应用有更深的了解,并让学生受到科学思维方法的熏陶和引导,培养了他们提出假设、设计实验的能力.