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昆明山海棠总生物碱诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究
目的:研究昆明山海棠(THH)总生物碱对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因的影响.方法:用抽提的THH总生物碱对L5178Y细胞进行浓度梯度染毒,不同时间点进行单细胞微孔接种,计数阳性集落,测定细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和突变频率.结果:随着THH总生物碱作用剂量的增加,L5178Y细胞相对存活率和相对悬浮增长率均明显下降;在0.1～2.0 g*L-1范围内可诱导细胞tk位点的突变,诱发突变频率是自发突变频率的2～9倍.在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落,即大集落与小集落,但以大集落为主,这一现象可能与THH的作用机制有关.结论:THH总生物碱对L5178Y细胞具有肯定的细胞毒性与诱导基因突变作用.
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硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失分析
目的 探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合缺失进行分析.方法 使用硝酸羟胺50～500 mg/L剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性,细胞接种效率,相对悬浮生长率和突变频率.挑选经硝酸羟胺诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,经等位基因特异性PCR扩增,杂合性缺失(LOH)分析等技术,分析其杂合性缺失的发生.结果 大集落和小集落诱导突变体tk基因LOH发生率分别为62.2%和98.9%.由LOH分析的实验结果显示,诱导突变体的LOH在LC与SC之间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 功能性等位基因缺失是HAN诱导tk基因分子突变的重要形式之一,在不同集落类型之间可能具有不同的突变机制.
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高能微波辐射对小鼠淋巴瘤细胞的影响
目的 研究高能微波(HPM)对小鼠淋巴瘤L5178Y 3.2.7c-tk+/-细胞的影响,以明确高能微波的致突变性和细胞毒性.方法 微波频率为7.9 GHz,功率为10.0 mW/cm2,以不同的时间(0～75 min)辐照L5178Y细胞,分别进行细胞毒性、细胞接种效率、相对悬浮生长率和tk基因突变率的测定.结果 随微波照射时间的延长,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率明显降低,照射75 min时分别降低51.4%和89.7%.长照射时间诱导L5178Y细胞tk基因的突变率是阴性对照突变率1.5倍,尚未达到2倍,未见明显致突变性.结论 HPM对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,但未见明显诱导tk基因突变.
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小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因自发分子突变研究
背景与目的:研究小鼠淋巴瘤 L5178Y3.2.7c-tk +/-细胞 tk基因的自发突变频率和分子突变.材料与方法:进行 4次平行试验,计算自发突变频率.选择 tk基因自发突变子(tk-/-),提取基因组 DNA,经等位基因特异性 PCR扩增,杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)分析和测序等技术,分析其分子突变谱.结果:L5178Y细胞 tk基因的平均自发突变频率为 145× 10-6,tk基因自发突变 LOH平均发生率为 79.8%.由 LOH分析的试验结果显示,自发突变的 LOH在大集落(Large clone,LC)与小集落(Small clone,SC)之间差异无统计学意义.序列分析证实,自发tk基因点突变主要为碱基置换.结论:tk基因的自发突变是以功能性等位基因缺失为主的分子突变,其中点突变以碱基置换为主.
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丙烯酰胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究
背景与目的:研究丙烯酰胺(Acrylamide,AA)对小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变频率的影响.材料与方法:使用丙烯酰胺对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别进行细胞毒性,细胞接种效率,相对悬浮生长率和突变频率的测定.结果:随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低.在150～750 μg/ml范围内诱导L5178Y细胞tk基因的突变频率高于自发突变频率1～9倍,表明具有较强的致突变性.结论:AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变.
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WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用
背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据.材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTKl细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(Single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测.结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTKl细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主.过氧化氢诱发了WTKl细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系.随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).结论:WTKl细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究.采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价.
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硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究
背景与目的:研究硝酸羟胺对小鼠淋巴瘤L5178Y-3.7.2c tk+/-细胞tk基因突变的影响.材料与方法:使用硝酸羟胺对L5178Y细胞进行梯度染毒,再分别进行细胞毒性,细胞接种效率,相对存活率,相对悬浮生长率和突变频率测定.结果:随着硝酸羟胺的剂量增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均下降.在硝酸羟胺50～500μg/ml范围内可以诱导细胞tk基因的突变率达到自发突变率几倍至十几倍.结论:硝酸羟胺对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因突变.
