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靛玉红衍生物PHⅡ-7对人乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤效应及其机制
目的 观察靛玉红衍生物PH Ⅱ-7对人乳腺癌癌细胞株MCF-7的杀伤作用并探讨其初步机制.方法 四唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期分布;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成变化;RT-PCR法、Western blot法检测原癌基因c-fos基因及蛋白表达水平.结果 不同浓度的PH Ⅱ-7对MCF-7细胞的增殖抑制率为43.13 % ~ 90.90 %,抑制效应随着浓度增加而增强(P<0.05);各实验浓度的PH Ⅱ-7均能诱导细胞凋亡,1.25、2.5、5.0 μmol/L PH Ⅱ-7作用24 h后,MCF-7细胞的早期凋亡率分别为(1.43 ± 0.02) %,(9.14 ± 0.36) %,(45.79 ± 8.46)%,具有浓度依赖性; PH Ⅱ-7处理MCF-7后致其G0/G1期和S期细胞比例下降,G2/M 期细胞比例明显上升;PH Ⅱ-7作用于MCF-7细胞2 h后,细胞内ROS水平显著增高;PH Ⅱ-7处理MCF-7后,原癌基因c-fos mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性下调.结论 PH Ⅱ-7对MCF-7具有明显的体外杀伤作用,其作用机制可能与细胞周期阻滞、改变细胞氧化还原平衡状态及下调原癌基因表达有关.
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人膜联蛋白V的重组表达与细胞凋亡显像
移植肿瘤模型的研究表明,化疗和放疗对肿瘤的杀伤效应是通过对细胞凋亡过程的迅速诱导来实现的[1].
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二硝基氟苯修饰的肿瘤疫苗可增强外周血单个核细胞体外杀伤人乳腺癌细胞
抗肿瘤免疫治疗是一种重要的癌症辅助治疗手段,其特点是毒副反应较小,患者耐受性好,并能在相当程度上改善肿瘤的预后.本研究是应用一种小分子半抗原二硝基氟苯(1)NP)修饰细胞瘤苗(TCV),评价该瘤苗是否会增强人淋巴细胞对人乳腺痛(MCF7)和人肺癌(H23)细胞的杀伤效应.此外,我们还把DNP瘤苗修饰法与另一种临床常用的瘤苗修饰法,即应用新城疫病毒Ulster株(NDV Ulster.)的修饰法,进行了抗肿瘤免疫效应方面的比较.
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激活性受体自然杀伤细胞2D及其配体的研究进展
自然杀伤细胞2D(natural killer cell 2D,NKG2D)是NK细胞、CD8+T细胞的一种活化性受体,属于C型凝集素样超家族,可与靶细胞表面的NKG2D配体结合,通过接头蛋白传递活化信号,激活或协同激活免疫效应细胞对靶细胞的杀伤效应,在抗肿瘤、抗感染免疫中具有极为重要的作用.随着对NKC2D及其配体研究的不断深入,开发其在疾病预防与治疗方面的应用将成为新的研究热点.本文就NKG2D及其配体的表达形式、信号转导作用及其功能的新研究成果作一综述.
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中性粒细胞对肺鳞状细胞癌杀伤效应的研究
目的 探索中性粒细胞(PMNS)对人肺鳞状细胞癌的杀伤效应.方法 随机选取人肺鳞状细胞癌石蜡 包埋标本300例,行G-CSF的免疫组化染色,分析其阳性强度与中性粒细胞分布的关系;分离人肺鳞状细胞癌患者及健康志愿者的外周血中性粒细胞各5例,体外杀伤建系及原代培养的肺鳞状细胞癌细胞;MTT法检测杀伤效应,观察中性粒细胞和肺癌细胞的形态变化.结果 300例人肺鳞状细胞癌中221例可见中性粒细胞浸润,且其浸润程度和G-CSF的阳性强度成显著正相关(P<0.01),HE切片可见中性粒细胞致肺鳞癌细胞凋亡现象,其杀伤效应需直接接触癌细胞,并围绕癌细胞形成花环状,PMNs∶癌细胞=500~ 600∶1时,杀伤效率高.结论 中性粒细胞可在体内、外对肺鳞状细胞癌具有杀伤作用,其杀伤效应需要和肿瘤细胞直接接触,癌细胞分泌的G-CSF能促进PMNs对肿瘤的杀伤作用.
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陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞杀伤效应和抑制作用的实验研究
本研究观测了陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞的杀伤效应和抑制作用.处理后的癌细胞在光镜下表现为细胞核固缩、核碎裂、核溶解;在电镜下表现为异染色质增加,边集,呈团块样改变,胞浆肿胀,脂滴数量增加,质膜破裂;核固缩,碎裂,线粒体肿胀.抑瘤观察中发现治疗组小鼠肿瘤体积明显减小,肿瘤生长受到抑制,治疗组和对照组间差异有显著性;生存期观察中发现经陡脉冲治疗后的荷瘤小鼠生存期明显延长.实验揭示了陡脉冲电场能有效地杀伤癌细胞,明显抑制了荷瘤小鼠恶性肿瘤的生长、增殖,有着良好的应用前景.
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两种抗T细胞免疫毒素对靶细胞杀伤效应的比较
免疫毒素杀伤靶细胞的关键取决于抗体对靶细胞的特异性识别和毒素对靶细胞的杀伤效率.本研究比较了我们所研制的两种抗T细胞免疫毒素(CD5:rRA和CD5:Ricin)对靶细胞的特异性杀伤效应.实验结果证实:①两种免疫毒素在10-9-10-11mol/L浓度范围内均可有效地清除CD5+T细胞群,并对CD25+CD3+激活T细胞具有剂量依赖性抑制作用;②两种免疫毒素均对混合淋巴细胞增殖反应有明显抑制作用,与CD5:Ricin比较,CD5:rRA在10-10-10-11 mol/L浓度范围内对T细胞增殖的抑制作用明显减弱;③10 mmol/L氯化铵与CD5:rRA联合应用,可增强CD5:rRA对T细胞的清除效率;④两种免疫毒素及氯化铵与CD5:rRA联合应用在有效杀伤T细胞的浓度范围内,对骨髓粒-巨噬系祖细胞的增殖无明显的抑制作用.
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SNAP-23对NK细胞杀伤效应的调控
目的探讨SNAP-23对NK细胞杀伤效应的调控作用.方法通过核酸转染仪转染SNAP-23 shRNA(short hairpin RNA)质粒阻断NK92细胞中SNAP-23蛋白的表达,分别利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验和β-己糖氨酶释放实验检测SNAP-23表达下降对NK细胞杀伤效应和胞吐效应的影响.结果核转染仪可将shRNA质粒成功转入NK92细胞,所设计的3条SNAP-23的shRNA能抑制SNAP-23的蛋白表达,继而导致NK92细胞的杀伤活性和胞吐效应下降.结论SNAP-23通过调控NK细胞的胞吐效应而参与NK细胞杀伤效应的调控.
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负载食管癌酸洗抗原树突状细胞诱导高效特异的抗肿瘤免疫
目的:研究负载食管癌酸洗抗原树突状细胞(DC)诱导的特异性CTL对食管癌细胞的杀伤效应.方法:酸洗涤法获得T.Tn细胞膜抗原多肽,GM-CSF,IL-4和TNF-α体外诱导扩增DC并负载酸洗抗原,制备食管癌抗原特异性CTL;用CytoTox 96TM检测其对T.Tn体外杀伤效应.结果:负载食管癌抗原肽的DC诱导的特异性CTL对T.Tn的杀伤率达89.4%,显著高于LAK细胞的杀伤率43.9%(P<0.05).而对MCC803及Hep2肿瘤细胞株无显著杀伤作用(P<0.05).结论:负载食管癌抗原的DC体外可诱导出高效而特异的抗食管癌效应,提示以DC为中心的肿瘤生物治疗可望提高食管癌综合治疗水平.
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结肠癌LS174细胞培养上清对树突状细胞诱导CTL杀伤效应的影响
目的:观察结肠癌细胞对人单个核细胞源树突状细胞(DC)诱导的CTL杀伤效应的影响,探讨其在人体的免疫逃避机制.方法:人外周血分离单个核细胞以GM-CSF和IL-4培养DC,用结肠癌LS174细胞的提取物诱导DC,并激活T淋巴细胞抗肿瘤效应,在此不同过程中,体系中加入人结肠癌细胞系LS174的培养上清液.以正常培养体系为对照,通过计算细胞毒杀伤率检测不同条件下DC激活同种异体T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果:LS174细胞培养上清液作为条件培养的DC,在DC培养的早期阶段对DC激活过程有明显的影响(在DC培养的第1 d加入肿瘤培养上清组,第3 d加入肿瘤培养上清组vs正常培养的DC组,DC培养第5 d加入肿瘤培养上清组,DC激活T淋巴细胞过程加入肿瘤培养上清组,P<0.05).结论:肿瘤细胞分泌的某些物质可在DC培养的早期阶段影响肿瘤的免疫,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.
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双功能融合基因在肝癌细胞中的表达与作用
目的:构建含有融合基因FCUl的自杀基因系统,观察其对体外培养肝癌细胞的杀伤效应.方法:将FCUl基因亚克隆于pEGFP-C1载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子转染肝癌细胞HepG2,绿色荧光蛋白检测FCUl的表达,用G418筛选出阳性细胞克隆后,进行体外药物敏感实验,观察旁观者效应.结果:FCUl基因正确插入到pEGFP-C1中,pEGFP-FCUl转染成功的细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,在5-FC作用下细胞的生长抑制率明显高于未转染细胞,且旁观者效应显著.结论:本基因治疗体系具有很好的体外杀肿瘤效果,为肝癌的基因治疗提供了一个新的选择.
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食管癌细胞RNA致敏树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫
目的:观察人食管癌细胞株RNA致敏的树突状细胞(DC)所诱导的特异性抗肿瘤免疫效应,探讨肿瘤细胞RNA直接致敏DC进行食管癌生物治疗的可能性.方法:食管癌细胞株T.Tn体外培养,提取RNA;正常人外周血,进行体外DC的培养扩增;食管癌RNA直接致敏DC,MTT法检测食管癌RNA活化DC所诱生的淋巴细胞对食管癌T.Tn、视网膜母细胞瘤SoRb-70的体外杀伤效应.结果:正常人外周血来源的DC,经食管癌T.Tn细胞株RNA直接致敏后,成功诱导特异性抗肿瘤免疫反应,T.Tn RNA组CTL在靶效比为20:1时对T.Tn,SoRb-70的杀伤率分别为85.8%、1.9%,而对照组对这两种细胞的杀伤率分别为1.0%和0.5%.结论:肿瘤RNA致敏DC可以诱导特异性抗肿瘤免疫,是一种有前景的食管癌治疗手段,有进一步研究的价值.
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大肠癌细胞功能性Fas配体的表达度与肿瘤免疫逃逸的关系
目的:表达Fas配体(fasligand,FasL)的肿瘤周围激活的Fas阳性淋巴细胞凋亡异常增加.肿瘤的发生在很大程度上是因为转化的细胞不能正常凋亡所致.观察Fas与FasL在结肠癌细胞株的表达,在体外验证结肠癌细胞SW620是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡.方法:用免疫组织化学SABC法观察结肠癌细胞系和Jurkat T淋巴细胞系Fas与FasL的表达,为癌细胞的Fas和FasL的功能提供形态学依据.采用非放射性细胞毒分析,测定SW620结肠癌细胞与Jurkat靶细胞共培养后LDH释放值检测效应细胞的杀伤效应.结果:结肠癌SW620细胞FasL染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜及核周区,而Fas染色几乎呈阴性反应.Jurkat细胞系Fas,FasL免疫组化染色呈阳性反应,阳性反应物主要定位于癌细胞的胞膜.CytoTox96非放射性细胞毒分析显示大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,诱导对Fas介导的凋亡敏感的T淋巴细胞(Jurkat T细胞)明显凋亡,并随着SW620接种浓度增加和共培养时间的延长,Jurkat T细胞凋亡的比例显著增加.用含有乙酸肉豆佛波醇(phorbol 12-myristatel3-ac-etate,PMA)加离子霉素(ionomycin)的DMEM培养基孵育48 h的大肠癌SW620细胞系与激活的T细胞(Jurkat T细胞)共培养,Jurkat T细胞凋亡的比例也明显增加.结论:结肠癌细胞SW620表达功能性FasL,能杀伤Fas阳性Jurkat T淋巴细胞,形成免疫逃逸.
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CDglyTK双自杀基因腺病毒系统的构建及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤作用
胸腺嘧啶核苷激酶(thymidine kinase,TK)基因和胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)基因整合形成的双自杀基因CDglyTK,通过适当的载体导入靶细胞内,同时给予两种基因前体药物,前体药物在自杀基因表达产物作用下转化为有毒性的代谢产物,通过干扰DNA和RNA的合成抑制细胞增殖,促进靶细胞凋亡.我们利用改良细菌内同源重组法构建CDglyTK双自杀基因的腺病毒,并观察其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤效应,为进一步研究重组CDglyTK双自杀基因对瘢痕疙瘩的治疗作用提供依据.
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泰索帝合并温热对肺腺癌细胞的杀伤效应
目的 研究泰索帝合并温热对SPC-A-1肺腺癌细胞的杀伤效应.方法 不同浓度(0.05 μg/ml~10μg/ml)泰索帝合并温热(39~42℃)作用后,应用MTT法测定其对细胞的杀伤效应,用流式细胞仪和Feulgen染色法检测5μg/ml泰索帝合并41℃对细胞周期影响,并用考马氏亮蓝法观察细胞骨架的形态变化.结果 40℃以上温热作用60min,可抑制SPC-A-1细胞生长,其效应随温度的升高逐渐增强,以42℃明显;24h后,各组抑制效应均较即时组更明显.泰索帝单独作用对肺癌细胞的杀伤效应在5μg/ml出现,停药后24h杀伤效应有所降低.低浓度泰索帝与39℃~42℃合并可见显著抑瘤协同效应,24h后协同效应仍存在.合并作用可使更多细胞阻滞于分裂期,细胞形态变圆,可出现骨架蛋白凝聚、细胞伸展不良,细胞分裂异常,可见较多微核、多核细胞.结论 泰索帝与温热合并有协同效应,可提高泰索帝对SPC-A-1肺腺癌细胞的杀伤效应,降低用药浓度,其机制可能与细胞骨架功能障碍及温热增加膜对药物通透性有关.
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重离子肿瘤放射生物学的研究进展
重离子,简言之,即比α粒子(4H)重的离子(如12 C、22 Ne、45 Ca等),因加速后拥有物理剂量分布和生物学方面的双重优势而备受肿瘤放疗界关注。限于实验设施、基础及临床资料影响,目前对重离子的放射生物学效应,包括肿瘤细胞杀伤效应、对肿瘤血管生成和转移的影响及诱发第二肿瘤等尚缺乏全面认识。笔者就重离子(主要是碳离子)的基本生物特征以及相关生物学研究进展做一综述。
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VP3基因对鼻咽癌特异性杀伤效应的实验研究
鼻咽癌是中国南方地区常见的恶性肿瘤之一,主要采取局部放射治疗.鼻咽癌放疗后5年生存率在40%~50%[1],因此寻找一种新型的治疗手段,能够有效杀死鼻咽癌细胞,以弥补放疗的不足,对鼻咽癌的临床一线治疗具有重要意义.
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磁诱导化疗对人舌癌细胞杀伤效应的实验研究
一定强度的恒磁场(static magnetic field, SMF)能使人类恶性肿瘤的细胞结构和增殖周期发生改变,而为化疗药物提供作用的契机.本实验利用场强0.35 Tesla (T)的SMF诱导体外培养的人舌癌细胞后,联合应用平阳霉素(pingyangmycin, PYM),对比观察其杀伤效应.
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中口径穿甲爆破燃烧弹对坦克内绵羊致伤的试验研究
为了解中口径穿甲爆破燃烧弹对坦克内绵羊的致伤特点,用某型中口径炮发射同样口径穿甲爆破燃烧弹,在100m距离向坦克前甲板射击,试验后检查动物伤情.结果在坦克内的4组共16只动物中有2只即刻死亡,其余14只均受到了不同程度的弹片伤、冲击伤、复合伤,其伤处总数为157处,致伤率达100%.说明反装甲武器侵彻坦克后,致绵羊伤情复杂、严重,死亡率高,加之舱室类兵器机动性强,内部空间小等特点,给救治带来困难.
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小口径穿甲武器致伤坦克内绵羊的现场试验
为了解小口径反坦克武器对坦克内绵羊的致伤特点,用2种武器在60m距离向坦克前甲板射击,然后检查动物伤情.结果发现,在坦克受到某型高射机枪穿甲燃烧弹攻击后,16只试验动物中有8只受到了不同程度的损伤,而步枪穿甲燃烧弹穿甲后,16只动物中只有1只因弹丸直接击中受伤.以上伤情无燃烧因素.说明高射机枪穿甲燃烧弹所致绵羊受伤率仍很高,而步枪穿甲燃烧弹如果不直接击中动物一般不会造成伤亡.