Synaptotagmin在神经递质释放过程中的作用

神经突触间递质的释放是神经系统完成其生理功能重要的生物现象之一.在贮存递质的突触囊泡上存在一些神经细胞所特有的囊泡蛋白,如突触素(synapsin)、synaptobrevin和synaptotagmin等.其中synaptotagmins是膜转运蛋白中的一个家族,它们的特征是含有两个钙结合区:C2A 和C2B.到目前为止,在哺乳动物中已经发现了15种synaptotagmin同形物(isoforms).神经递质释放是由Ca2+内流以诱导突触囊泡发生胞吐而引起的,Ca2+需与细胞内部的Ca2+感受器相结合来协同控制囊泡胞吐释放,Synaptotagmin I可能作为快速同步释放的Ca2+感受器而发挥作用.现在已知synaptotagmin I在胞吐和胞吞两个过程中都扮演重要角色.

神经末梢突触囊泡释放神经递质过程的调控蛋白

神经末梢突触囊泡释放神经递质是一个复杂且受到精细调控的过程,涉及多种蛋白质间的相互作用.位于突触囊泡膜上的突触囊泡蛋白/突触囊泡相关膜蛋白(synaptobrevin/VAMP),与位于突触前膜上的syntaxin和突触小体相关蛋白SNAP-25,三者聚合形成的可溶性N-甲基马来酰胺敏感因子(NSF)附着蛋白受体(SNARE)核心复合物是突触囊泡胞吐过程中的核心成分.本文主要围绕参与突触囊泡胞吐过程,以及调节SNARE核心复合物的形成,解离及其功能的蛋白质,并对突触囊泡胞吐过程的分子模型作一概述.

磷脂酶D在胞吞与胞吐中的作用

磷脂酶D(PHospholipase D，PLD)水解其主要底物磷脂酰胆碱是细胞信号转导的重要途径之一。大量研究表明PLD激活是受体介导的胞吞和胞吐过程中关键的一步。本文主要介绍PLD 在受体介导的胞吞和胞吐过程中的作用及作用机制的研究进展

"kiss and run"机制--胞吐的新模式

Annexin A2在肿瘤发生中的作用研究进展

Annexins是一组钙离子依赖的磷脂结合蛋白.它们参与一系列细胞活动,比如胞吐、胞吞、细胞增殖、分化和凋亡.早在急性早幼粒细胞白血病中发现Annexin A2高表达,而其家族的另一成员Annexin Ⅴ与抗磷脂综合征相关,因此提出Annexinopathy的概念.研究发现Annexin A2与其他Annexins不同,具有RNA结合的特性,与DNA合成、复制相关,在肿瘤的发生、浸润和转移中起作用.本文着重阐述Annexin A2在肿瘤中的研究进展.

SNAP-23对NK细胞杀伤效应的调控

目的探讨SNAP-23对NK细胞杀伤效应的调控作用.方法通过核酸转染仪转染SNAP-23 shRNA(short hairpin RNA)质粒阻断NK92细胞中SNAP-23蛋白的表达,分别利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验和β-己糖氨酶释放实验检测SNAP-23表达下降对NK细胞杀伤效应和胞吐效应的影响.结果核转染仪可将shRNA质粒成功转入NK92细胞,所设计的3条SNAP-23的shRNA能抑制SNAP-23的蛋白表达,继而导致NK92细胞的杀伤活性和胞吐效应下降.结论SNAP-23通过调控NK细胞的胞吐效应而参与NK细胞杀伤效应的调控.

TRP超基因家族与疼痛

目前的研究越来越表明:痛也即伤害性刺激的感受.是始于周边终末的伤害性受体.这是一类高度特化的初级神经元.小薄髓Aδ纤维和无髓C纤维的轴突上有伤害性受体.这种接受特化感觉神经元由它们表达的转导高离子通道受体来决定其特性,这类受体对外界的刺激有一个高阈值,也就是说它的被激活需要被敏化.

延长针刺镇痛时间对中枢神经内大颗粒小泡于突触部位胞吐的影响

目的:为证实大颗粒小泡(LGV)参与突触传递的学说、为痛觉生理学的研究提供形态学依据,用形态和机能相结合的方法观察了延长针刺时间后LGV在抑痛过程中于突触部位的胞吐.方法:用辐射热致痛、针刺镇痛,并延长针刺时间,电镜下观察、记录了LGV于突触部位的胞吐.结果:观察发现,实验组动物中枢神经内有较多的LGV于突触部位胞吐其内含的递质,实验组与对照组比较有显著的统计学意义.在高频率、较长时间的针刺过程中LGV于突触部位的胞吐增加.结论:LGV可能通过于突触部位的胞吐参与了痛的调节过程.

肽类激素分泌机制的研究进展

肽类激素贮存在大型致密核芯分泌颗粒内,通过胞吐分泌,分泌颗粒被膜与细胞膜融合成单层,释放出全部内容物,或通过接触一分离的方式,多次部分释放.对新发现的孔体或融合孔的研究,揭示了分泌颗粒停泊、融合并释放出内容物的机制.排放到细胞外的囊泡内容物的消散速度,取决于融合孔的状态和囊泡内容物的化学性质.由于在细胞外存在完整的膜包分泌颗粒,因此,可能还存在着连同颗粒被膜的整体释放方式.

癌症的形成及其防治

所谓的癌症只不过是动物细胞超过60倍的增长速度形成的肿瘤,生物细胞的生成及新陈代谢,受其大自然的冷暖、风寒的影响细胞内酸碱转化和胞吞胞吐的影响、特别是人类各种激素的刺激,使人类的正常细胞变异形成肿癌细胞,导致癌症形成.全人类每年死于各种癌症的人就有130万人,这个恶性肿瘤的杀手正在侵蚀人类的生命.

反义RNA抑制synaptotagminⅡ在RBL-2H3的表达及对胞吐的作用

目的:研究SynaptotagminⅡ(简称Syt2)在RBL-2H3(简称RBL)中的表达及其在胞吐中的作用.方法:通过Western blot 检测Syt2在RBL中的表达情况.用高保真酶扩增Syt2,与pEGFP-N1构建全长反义基因表达载体,电穿孔转染RBL,G418筛选获得稳定转染细胞.通过钙离子载体和抗原刺激,应用Western blot 检测稳定转染细胞和对照细胞分泌的组织蛋白酶D,分析Syt2对胞吐的影响.结果:在RBL中检测到Syt2表达.构建了pEGFP-N1-Syt2-AS质粒,插入片段测序结果与GenBank登录号NM012665(rat Syt2)序列完全一致.经转染和G418筛选,获得了稳定转染细胞RBL-Syt2-AS,Western blot结果显示,两株RBL-Syt2-AS表达的Syt2均明显减少,分别只有对照的8%和10%.经刺激后,RBL-Syt2-AS分泌的组织蛋白酶D较对照明显增加.结论:Syt在RBL中表达,其对RBL溶酶体胞吐起负调控作用.

跨膜型TNF-α介导的反向信号对NK细胞杀伤功能的影响

目的:观察跨膜型TNF-α介导的反向信号对NK细胞杀伤功能的影响.方法:用sTNFRI激活NK92细胞的TM-TNF-α反向信号;MTT比色法检测NK92细胞对靶细胞的杀伤作用;β-己糖氨酶释放实验检测NK92细胞在杀伤靶细胞时的胞吐作用;ELISA实验检测NK92细胞sTNF-α的分泌;流式细胞术检测NK92细胞FasL的表达.结果:预先激活TM-TNF-α反向信号,可以促进NK92细胞对靶细胞的杀伤功能;增强NK92细胞的胞吐;促进FasL的表达和sTNF-α的分泌.结论:TM-TNF-α反向信号可能通过促进NK92细胞胞吐、sTNF-α分泌及FasL的表达而促进NK92细胞对靶细胞的杀伤.

尿感方清除受感染膀胱上皮细胞胞内尿道致病性大肠杆菌的作用

目的 观察尿感方(马齿苋、蒲公英)清除受感染膀胱上皮细胞胞内尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escheriehia coli,UPEC)的作用,并探讨其作用机制.方法 通过UPEC感染人膀胱癌细胞5637(human bladder cancer cell 5637,HTB-9)细胞模型,观察尿感方含药尿液清除受感染膀胱上皮细胞胞内UPEC的作用;同时采用分子生物学技术,观察其对TLR4/cAMP信号传导通路的主要环节Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、腺苷酸环化酶3(adenylate cyclase 3,AC3)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶A(protien kinase A,PKA)、肌球蛋白Ⅶa和Rab蛋白相互作用蛋白(MyosinⅦA and Rab interacting protein,MyRIP)、Rab27b和小窝蛋白1 (Caveolin-1)的影响.结果 与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组的细菌胞吐率增加.与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组增加TLR4、AC3蛋白的表达及胞内cAMP的水平,促进PKA活化,增加TLR4、AC3、MyRIP、Rab27b和Caveolin-1蛋白的表达.结论 尿感方具有一定的清除受感染膀胱上皮细胞胞内UPEC的作用,其作用机制与TLR4/cAMP信号传导通路的环节有关.

Synaptotagmin Ⅱ在RBL-2H3细胞系表达及在胞吐中的作用研究

研究Synaptotagmin Ⅱ(简称Syt2)在大鼠嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3,简称RBL)中的表达、分布及其在胞吐中的作用.通过Western blot检测Syt2在RBL中的表达情况.用高保真酶扩增Syt2,构建pEGFP-N1-Syt2表达质粒,电穿孔转染RBL,G418筛选获得稳定表达Syt2-EGFP的细胞.通过钙离子载体和抗原刺激,应用Western blot检测稳定转染细胞和对照细胞分泌的组织蛋白酶D,分析Syt2对胞吐的影响.结果显示,在RBL中检测到Syt2表达.构建了pEGFP-N1-Syt2质粒,插入片段测序结果与GenBank登录号NM012665(rat Syt2)序列完全一致.经转染和G418筛选,获得了稳定表达细胞RBL-Syt2-S,经刺激后,其分泌的组织蛋白酶D较对照明显减少.证实Syt2主要分布在RBL的质膜,在胞浆中表达较少,Syt2对于RBL溶酶体胞吐起负调控作用.

利用苯乙烯染料揭示突触囊泡循环过程的研究进展

苯乙烯类染料(Styryl dyes),如FM1-43和FM2-10等是近年来发展和广泛应用于突触囊泡循环及突触传递研究领域的一类工具药.这类化合物特异性地标记突触囊泡,发出荧光,而又不影响囊泡的活性和运转.因此在突触事件中依照荧光强度的变化就可以推断相应的神经胞吞及胞吐的程度,跟踪囊泡循环过程.一些突触事件的具体环节,在应用了苯乙烯类染料之后,得到了进一步的阐明.本文简要介绍苯乙烯类染料的性质和近年来在突触事件研究中的一些主要应用及进展.

胞内Ca2+和小G-蛋白对人中性粒细胞胞吐的调控作用

中性粒细胞在机体抵抗细菌感染中起着非常重要的作用.本研究应用全细胞膜片钳微电极灌流和膜电容检测技术研究了细胞内钙及GTPγS对中性粒细胞胞吐的调控作用.结果表明,钙引起的细胞膜电容增加呈现两个不同的分泌相.第一相发生在钙浓度为0.2-14 μmol/L区间,膜电容增加幅度为1.23 pF,钙的EC50值为1.1μmol/L.这部分膜电容增加可能对应于三级颗粒的释放.第二相发生在钙浓度为20-70 μmol/L区间,膜电容增加幅度为6.36 pF,钙的EC50值为33 μmol/L.这部分膜电容增加可能对应于一、二级颗粒的释放.细胞内Ca2+浓度可同时影响细胞分泌的平均速率和终可达到的分泌程度.而用GTPγS刺激细胞分泌时,只要作用时间足够长(＞20 min),20-100 μmol/L的GTPγS均可使中性粒细胞膜电容增加6 pF以上.GTPγS的浓度不影响细胞膜电容的终可增加的幅度,但细胞分泌的平均速率随着GTPγS的浓度的增加而增加.

Intersectin蛋白在胞吞和胞吐中的作用

Intersectin是一种进化上高度保守的多功能衔接蛋白/支架蛋白,具有多个功能结构域.这些结构域能够与胞吞和胞吐相关蛋白,如介导突触囊泡循环的网格蛋白、与细胞质膜微囊内吞相关的蛋白、与调控肾离子运输相关的无赖氨酸激酶以及介导胞吐过程的Cdc42等发生作用.近年来,人们对intersectin在唐氏综合症(Down syndrome,DS)、阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)等众多神经退行性疾病以及内分泌组织肿瘤中的作用进行了广泛研究.本文综述了intersectin结构特征、在胞吞和胞吐中的功能及其与相关疾病方面的研究进展.

受精前后地鼠卵母细胞皮质颗粒的变化

为观察人精子与地鼠卵异体受精前后,卵母细胞内皮质颗粒的变化,采用罗丹明偶联的兵豆凝集素标记受精前、受精30 min和3 h后金黄地鼠的去透明带卵母细胞,用激光共聚焦显微镜观察皮质颗粒的分布情况,结果显示,受精前卵母细胞内的皮质颗粒散在于卵质膜下和皮质区,受精后皮质颗粒数量减少,并发生边集.说明人精子与金黄地鼠卵异体受精时,可引起皮质颗粒向卵质膜靠拢并胞吐.

癫痫发病中突触机制的研究进展

反复的癫痫发作可导致突触蛋白的表达异常、突触重塑和异常神经元网络的形成,这是难治性癫痫的病理生理学机制之一.近年来发现突触蛋白在原发性癫痫的发病机制中同样发挥重要的作用.多个突触调控蛋白以及突触后膜受体蛋白表达异常可导致癫痫发作.绝大多数的抗癫痫药物是以离子通道为作用靶点,但卡马西平及唑尼沙胺可通过影响突触融合蛋白及可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体复合物的功能而发挥抗癫痫作用.突触囊泡蛋白2A是新型抗癫痫药物左乙拉西坦、布瓦西坦和seletracetam的作用靶点.

神经突触前递质小泡胞吐作用的分子机制

神经系统突触小泡的胞吐作用(exocytosis)关系到神经内分泌物质及神经递质的释放.其机制一直是神经科学界关注的问题之一.近年来由于分子生物学手段的进展对于此问题的研究取得了很大成就,分离出许多与此机能有关的蛋白质,它们参与小泡的胞吐过程.